ICS65.020.20 CCSB16 中华人民共和国国家标准 GB/T18084—2025 代替GB/T18084—2000 地中海实蝇检疫鉴定方法 DetectionandidentificationofCeratitiscapitata(Wiedemann) 2025-12-31发布 2026-07-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替GB/T18084—2000《植物检疫 地中海实蝇检疫鉴定方法》,与GB/T18084—2000相 比,除结构调整和编辑性改动外,主要技术变化如下: ———更改了范围(见第1章,2000年版的第1章); ———增加了术语和定义(见第3章); ———更改了仪器、用具和试剂(见第6章,2000年版的第3章); ———删除了抽查和取样(见2000年版的第4章和第5章); ———更改了现场检查(见第7章,2000年版的第6章); ———更改了饲养(见8.1,2000年版的6.4); ———增加了标本制备(见8.2); ———更改了形态鉴定(见8.3,2000年版的第7章); ———增加了分子生物学鉴定(见8.5); ———更改了结果判断(见第9章,2000年版的第8章); ———增加了标本保存(见第10章); ———增加了DNA条形码方法和实时荧光PCR方法(见附录E)。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。 本文件起草单位:广州海关技术中心、中国农业大学、中华人民共和国杭州萧山机场海关、金华市农 业技术推广与种子管理中心。 本文件主要起草人:李献锋、何旭诺、曹文泽、李志红、李月红、黄伟超、柳丽君、魏霜、李盼畔、刘海军、 冯黎霞。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为: ———2000年首次发布GB/T18084—2000; ———本次为第一次修订。 ⅠGB/T18084—2025 地中海实蝇检疫鉴定方法 1 范围 本文件描述了地中海实蝇Ceratitiscapitata(Wiedemann,1824)的检疫鉴定方法。 本文件适用于地中海实蝇的检疫鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T36772—2018 小条实蝇属检疫鉴定方法 SN/T1847 寡毛实蝇类害虫分类学术语 3 术语和定义 GB/T36772—2018和SN/T1847界定的术语和定义适用于本文件。 4 基本信息 中文名:地中海实蝇。 学名:Ceratitiscapitata(Wiedemann,1824)。 中文异名:地中海小条实蝇,地中海腊实蝇。 英文名:Mediterraneanfruitfly,Medfly。 异名:TephritiscapitataWiedemann,1824、Trypetacapitata(Wiedemann,1824)、C.citriperda Macleay,1829、C.hispanicaBrême,1842、C.citripedaEfflatoun,1924、PardalaspisasparagiBezzi, 1924、C.asparagiBezzi,1924。 分类地位:双翅目Diptera,实蝇科Tephritidae,实蝇亚科Trypetinae,腊实蝇族Ceratii,小条实蝇属 Ceratitis,小条实蝇亚属Ceratitis(Ceratitis)。 小条实蝇属世界已报道超过100种,小条实蝇亚属已报道有8种,地中海实蝇是该属最具经济意义 的有害种类,它是一种重要的水果害虫。成虫具有一定的飞行能力,可进行短距离扩散传播,卵、幼虫、 蛹可随果实、包装物、运输工具、寄主植物携带的土壤或基质等传播。 地中海实蝇的其他信息见附录A。 5 方法原理 5.1 形态学鉴定 通过观察寄主果实的为害状、传播途径及可能携带虫体的包装物、运输工具、土壤或基质等,依据成 虫的形态学特征进行种类鉴定。 1GB/T18084—2025 5.2 分子生物学鉴定 针对幼虫、蛹或成虫样品,通过DNA条形码序列扩增及与地中海实蝇参考序列的比对,或基于实 时荧光PCR的扩增结果,进行种类鉴定。 6 仪器、用具和试剂 6.1 仪器 体视显微镜、生物显微镜、荧光定量PCR仪、普通PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统、干燥箱和冰箱等 仪器设备。 6.2 用具 实蝇诱捕器、捕虫网、养虫箱、镊子、毛笔、放大镜、解剖针、解剖刀、指形管、载玻片、盖玻片、昆虫针、 白瓷盘、烧杯、冻存管、防虫网罩、干燥器和玻璃棉等用具。 6.3 试剂或材料 除非另有规定,仅使用分析纯试剂。 6.3.1 10%氢氧化钠(或10%氢氧化钾)溶液:称取氢氧化钠(或氢氧化钾)10g置于200mL烧杯中, 加入约80mL的蒸馏水,搅拌溶解后再加蒸馏水定容至100mL。 6.3.2 封片胶:称取阿拉伯树胶粉30g于烧杯中,加入50mL蒸馏水,置于40℃~50℃的水浴中加 热,使其充分溶解。加入200g水合三氯乙醛及20mL丙三醇,置于55℃~60℃的干燥箱内,24h后, 用玻璃棉过滤。 6.3.3 保存液:量取75%乙醇溶液100mL,加入1mL丙三醇。 6.3.4 无水乙醇。 6.3.5 1×三乙酸盐-乙酸缓冲液(1×TAE)。 6.3.6 10×聚合酶链式反应缓冲液(10×PCRBuffer)。 6.3.7 脱氧核糖核苷三磷酸混合液(dNTPMxiture)。 6.3.8 Taq酶。 6.3.9 双蒸水(ddH2O)。 6.3.10 动物基因组DNA提取试剂盒。 6.3.11 引物。 6.3.12 探针。 6.3.13 DNA分子质量标记(DNAMarker)。 6.3.14 琼脂糖。 7 现场检查 检查包装物、运输工具、寄主植物携带的土壤或基质,是否有成虫、老熟幼虫或蛹。 仔细检查果实表面有无产卵痕迹,或果实是否有腐软的现象,必要时剖果检查是否有蛆状幼虫。 发现幼虫或蛹可用毛笔进行收集,也可用镊子进行拣出。 发现成虫可用捕虫网对成虫进行采集,也可用实蝇诱捕器对成虫进行诱捕。 将采集的成虫、幼虫、蛹浸泡在75%乙醇溶液中,带回实验室鉴定。或将怀疑带虫的果实、采集的 幼虫或蛹带回实验室进一步饲养观察。 2GB/T18084—2025 8 实验室鉴定 8.1 饲养 8.1.1 卵或幼虫的饲养 把采集到的带卵或幼虫的果实放入小号白瓷盘,将小号白瓷盘置于装水的大号白瓷盘内,用防虫网 罩住小号白瓷盘,确保网的边缘浸入水中,将饲养装置放在温度为25℃~26℃、相对湿度为50%~ 80%的环境中饲养6d~13d至幼虫老熟。 8.1.2 蛹的饲养 取一盛有洁净湿细沙(含水量约3%)的养虫杯,将现场检查采集的蛹埋入细沙表面以下3cm~ 5cm处,或将采集的老熟幼虫置于细沙表面,老熟幼虫会钻入沙中化蛹。然后置于养虫箱中,在温度为 25℃~26℃、相对湿度为50%~80%条件下饲养5d~8d,至成虫羽化。 8.1.3 成虫的饲养 在养虫箱内悬挂橙、芒果等水果切片于养虫箱内供其取食。待成虫斑纹的色泽和大小稳定后 (2d~5d)收集成虫。 8.2 标本制备 8.2.1 成虫标本制备 将收集的活成虫置于-20℃以下条件下,冷冻3h以上将其杀死。若收集的是已死亡且干硬的成 虫,应先进行软化处理。用蒸馏水或75%乙醇溶液清洗虫体表面污物,用微针插入三角纸近尖角处,然 后将针尖从成虫中胸腹面垂直插入,再用3号昆虫针插入三角纸底边中央近边缘处,并插入相应的信息 标签,利用三级台调整虫位和信息标签。 8.2.2 成虫外生殖器玻片标本制备 用解剖刀切取成虫腹部,置于10%氢氧化钠(或10%氢氧化钾)溶液中,浸泡12h(或煮沸3min) 后取出,用蒸馏水洗净。在体视显微镜下,用解剖针或镊子挑取阳茎或产卵器置于载玻片上,滴入封片 胶,用解剖针将各部位结构展开,盖上盖玻片并粘贴相应的信息标签。 8.2.3 幼虫玻片标本制备 用昆虫针在幼虫体壁上刺戳数个小孔,置于10%氢氧化钠(或10%氢氧化钾)溶液中,浸泡12h(或 煮沸3min)后取出,用解剖针将幼虫体内残留物挤出并用蒸馏水洗净,在体视显微镜下挑取口钩、前气 门、后气门等部位,置于载玻片上,滴上封片胶,用解剖针将所挑取部位结构展开,盖上盖玻片并粘贴相 应的信息标签。 8.2.4 幼虫、蛹的浸渍标本制备 将幼虫或蛹用蒸镏水清洗后,投入(60±5)℃热水中浸泡5min~10min,将杀死后的幼虫或蛹冷 却至室温后置于保存液中并粘贴相应的信息标签。 8.3 形态鉴定 8.3.1 镜检观察 将制作的成虫针插标本置于体视显微镜下,生殖器解剖玻片标本和幼虫解剖玻片标本置于生物显 3GB/T18084—2025 微镜下,观察是否符合以下形态特征。 8.3.2 实蝇科Tephritidae形态特征 实蝇科成虫主要形态特征如下: ———翅亚前缘脉(Sc)端部几成90°急剧向前弯曲,前弯段细弱,终于前缘脉(C)的断裂处; ———前缘脉在前缘室段具2个断裂处; ———亚前缘脉完整并与第1径脉(R1)分离,第1径脉(R1)上具钝毛,第2、第3合径脉(R2+3)不 分支; ———第1径脉(R1)和第2、第3合径脉(R2+3)的背侧有细刺状小鬃; ———臀室(cup)