ICS11.220 CCSB41 中华人民共和国国家标准 GB/T46668—2025 动物和动物产品沙门氏菌检测方法 DetectionmethodsforSalmonellainanimalandanimalproducts 2025-10-31发布 2026-05-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布目 次 前言 Ⅲ ………………………………………………………………………………………………………… 1 范围 1 ……………………………………………………………………………………………………… 2 规范性引用文件 1 ………………………………………………………………………………………… 3 术语和定义 1 ……………………………………………………………………………………………… 4 缩略语 1 …………………………………………………………………………………………………… 5 试剂和材料 1 ……………………………………………………………………………………………… 6 仪器设备 2 ………………………………………………………………………………………………… 7 生物安全要求 2 …………………………………………………………………………………………… 8 检测程序 3 ………………………………………………………………………………………………… 9 样品采集 3 ………………………………………………………………………………………………… 9.1 养殖场 3 ……………………………………………………………………………………………… 9.2 屠宰场 4 ……………………………………………………………………………………………… 9.3 环境样品 5 …………………………………………………………………………………………… 9.4 样品运输和临时存放 5 ……………………………………………………………………………… 10 分离培养 5 ………………………………………………………………………………………………… 10.1 样品处理及预增菌 5 ………………………………………………………………………………… 10.2 分离纯化 6 …………………………………………………………………………………………… 10.3 结果判定 6 …………………………………………………………………………………………… 11 沙门氏菌的检测 7 ………………………………………………………………………………………… 11.1 生化鉴定 7 …………………………………………………………………………………………… 11.2 血清学鉴定 7 ………………………………………………………………………………………… 11.3 PCR检测 7 ………………………………………………………………………………………… 11.4 荧光定量PCR检测 8 ……………………………………………………………………………… 12 结果与报告 9 ……………………………………………………………………………………………… 附录A(规范性) 培养基与试剂的配制 10 ………………………………………………………………… A.1 缓冲蛋白胨水(BPW) 10 …………………………………………………………………………… A.2 RVR10培养基 10 …………………………………………………………………………………… A.3 MSRV培养基 10 …………………………………………………………………………………… A.4 XLT4培养基 10 ……………………………………………………………………………………… A.5 0.5×TAE电泳缓冲液 11 …………………………………………………………………………… A.6 1.2%琼脂糖凝胶 11 ………………………………………………………………………………… 附录B(资料性) 沙门氏菌的菌落特征 12 ………………………………………………………………… 附录C(资料性) 沙门氏菌PCR检测 13 ………………………………………………………………… ⅠGB/T46668—2025 附录D(资料性) 沙门氏菌实时荧光定量PCR检测 14 ………………………………………………… D.1 待测样品模板的制备 14 ……………………………………………………………………………… D.2 阳性对照和阴性对照样品模板的制备 14 …………………………………………………………… D.3 标准品模板和标准曲线的制备 14 …………………………………………………………………… ⅡGB/T46668—2025 前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国农业农村部提出。 本文件由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC181)归口。 本文件起草单位:扬州大学、华中农业大学。 本文件主要起草人:焦新安、潘志明、孟闯、栗绍文、耿士忠、胡茂志、康喜龙、田禹齐、刘博闻、顾丹、 许辰、李求春、黄金林。 ⅢGB/T46668—2025 动物和动物产品沙门氏菌检测方法 1 范围 本文件描述了畜禽和畜禽产品及其生产环境中沙门氏菌的检测方法,包括试剂和材料、仪器设备、 生物安全要求、检测程序、样品采集、分离培养以及沙门氏菌的检测、结果与报告等。 本文件适用于畜禽、畜禽产品及其生产环境中沙门氏菌的检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB4789.4 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB19489 实验室 生物安全通用要求 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 BPW:缓冲蛋白胨水(BufferedPeptoneWater) CFU:菌落形成单位(Colony-FormingUnit) DNA:脱氧核糖核酸(DeoxyribonucleicAcid) EDTA:乙二胺四乙酸(EthyleneDiamineTetraaceticAcid) MSRV:改良半固体RV培养基(ModifiedSemi-SolidRappaport-VassiliadisMediumBase) PCR:聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction) RT-qPCR:实时荧光定量PCR(RealTimeQuantitativePCR) RVR10:沙门氏菌选择性增菌液体培养基(Rappaport-VassiliadisR10Broth) TAE:三羟甲基氨基甲烷-乙酸-乙二胺四乙酸(Tris-AceticAcid-EthylenediaminetetraaceticAcid) XLT4:木糖-赖氨酸-硫酸四癸钠琼脂(XyloseLysineTergitol4AgarBase) 5 试剂和材料 5.1 缓冲蛋白胨水(BPW),按照附录A中A.1配制。 5.2 RVR10培养基,按照A.2配制。 5.3 MSRV培养基,按照A.3配制。 1GB/T46668—2025 5.4 XLT4培养基,按照A.4配制。 5.5 0.5×TAE电泳缓冲液,按照A.5配制。 5.6 1.2%琼脂糖凝胶,按照A.6配制。 5.7 蒸馏水:符合GB/T6682中二级水的要求。 5.8 无核酸酶水(ddH2O):符合GB/T6682中一级水要求,不含DNA酶和RNA酶的去离子水。 5.9 PCRMasterMix。 5.10 RT-qPCRMasterMix。 5.11 细菌DNA提取试剂盒。 5.12 核酸染料。 5.13 Marker:介于100bp~2000bp的DNA分子质量标准。 5.14 10×DNA凝胶加样缓冲液。 5.15 大肠杆菌标准株(ATCC25922)。 5.16 鼠伤寒沙门氏菌标准株(ATCC19585)。 6 仪器设备 6.1 冰箱(2℃~8℃)。 6.2 恒温培养箱(37℃±1℃、42℃±1℃)。 6.3 高压灭菌锅。 6.4 恒温摇床(180r/min、37℃±1℃)。 6.5 无菌采样袋(120mm×180mm、450mm×550mm)。 6.6 无菌培养皿(直径90mm)。 6.7 无菌接种环(10μL)。 6.8 无菌棉签(10cm)。 6.9 均质器。 6.10 无菌均质袋、无菌均质杯。 6.11 电子天平(感量0.1g)。 6.12 过滤装置及滤膜(0.22μm)。 6.13 微量移液器(10μL、10μL、200μL、1000μL)及配套吸头。 6.14 离心机。 6.15 离心管(1.5mL、10mL、100mL)。 6.16 干式恒温金属浴。 6.17 普通PCR扩增仪。 6.18 荧光定量PCR扩增仪。 6.19 PCR管(200μL)。 6.20 RT-qPCR管(200μL)。 6.21 凝胶成像仪。 6.22 二级生物安全柜。 7 生物安全要求 样品采集、样品处理及检测过程所涉及的试验操作,应遵守GB19489的有关规定。 2GB/T46668—2025