ICS59.080.01 CCSW04 中华人民共和国国家标准 GB/T46540—2025 纺织品 微生物的测定 Textiles—Determinationofmicroorganisms 2025-10-31发布 2026-05-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布目 次 前言 Ⅲ ………………………………………………………………………………………………………… 1 范围 1 ……………………………………………………………………………………………………… 2 规范性引用文件 1 ………………………………………………………………………………………… 3 术语和定义 1 ……………………………………………………………………………………………… 4 样品采集和处理 2 ………………………………………………………………………………………… 5 菌落总数的测定 3 ………………………………………………………………………………………… 6 大肠菌群的测定 6 ………………………………………………………………………………………… 7 金黄色葡萄球菌的测定 10 ………………………………………………………………………………… 8 白假丝酵母的测定 14 ……………………………………………………………………………………… 9 铜绿假单胞菌的测定 18 …………………………………………………………………………………… 10 乙型溶血性链球菌的测定 23 …………………………………………………………………………… 附录A(规范性) 培养基和试剂 28 ………………………………………………………………………… 附录B(规范性) LAMP引物 38 …………………………………………………………………………… 附录C(规范性) 实时荧光PCR引物和探针 39 ………………………………………………………… 附录D(资料性) LAMP、PCR试验阳性结果判定图谱 40 ……………………………………………… ⅠGB/T46540—2025 前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中国纺织工业联合会提出。 本文件由全国纺织品标准化技术委员会(SAC/TC209)归口。 本文件起草单位:郑州海关技术中心、中纺标(深圳)检测有限公司、南京海关纺织工业产品检测中 心、浙江雅琪诺装饰材料有限公司、南昌海关、中纺标(浙江)检测有限公司、嘉庚创新实验室、宁波海关 技术中心、加佳控股集团有限公司、海安南通大学高端纺织研究院、深圳歌力思服饰股份有限公司、湖南 华升株洲雪松有限公司、中国计量大学、浙江荣大时尚科技有限公司、广东启悦未来科技有限公司、中联 品检(东莞)检验技术有限公司、如鱼得水(杭州)软装定制有限公司。 本文件主要起草人:郭会清、李轲、马鹏飞、张淑霞、桂家祥、谢堂堂、郑悦、傅科杰、丁友超、禹建鹰、 周宇航、刘欣、袁奇宇、张伟、楼丹丽、黄周勇、张合为、周虎云、颜鹰、黄福开、盛方明、朱国权、陈海洋。 ⅢGB/T46540—2025 纺织品 微生物的测定 警示:从事微生物检测实验的实验室生物安全管理和设施条件要求应满足GB19489的规定。使 用本文件的工作人员应有微生物实验室工作的实践经验,并有责任采取适当的安全和健康保护措施,以 符合国家有关法规要求。 1 范围 本文件描述了纺织品中微生物测定的样品采集和前处理以及纺织品中菌落总数、大肠菌群、金黄色 葡萄球菌、白假丝酵母、铜绿假单胞菌、乙型溶血性链球菌的测定方法。 本文件适用于各类纺织品。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T8170 数值修约规则与极限数值的表示和判定 GB19489 实验室 生物安全通用要求 GB/T36433—2018 纺织品 山羊绒和绵羊毛的混合物DNA定量分析 荧光PCR法 3 术语和定义 GB/T36433—2018界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 菌落形成单位 colony-formingunits;CFU 根据固体培养基上形成的菌落数量,测定样品中活菌浓度的单位。 3.2 环介导恒温扩增 loop-mediatedisothermalamplification;LAMP 在60℃~65℃等温环境下,DNA处于动态平衡状态,在此温度下利用4种特异引物依靠一种高 活性链置换DNA聚合酶,使DNA在短时间内进行核酸扩增的技术。 注:反应能产生大量的扩增产物即焦磷酸镁白色沉淀,通过肉眼观察白色沉淀的有无来判断靶基因是否存在。 3.3 实时荧光定量PCR real-timefluorescence;PCR 在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号的积累实时监测整个PCR进程,再通过曲线对未 知模板进行定量或定性分析的DNA扩增方法。 [来源:GB/T36433—2018,3.2] 3.4 Ct值 cyclethreshold 每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。 [来源:GB/T36433—2018,3.5] 1GB/T46540—2025 4 样品采集和处理 4.1 样品采集 4.1.1 样品的采集:应采集相同批次、独立包装、适量件数样品送检,最低采样量应符合4.2.2要求。 4.1.2 样品标记:应对采集的样品进行及时、准确的记录和标记,采样人应清晰填写采样单(包括采样 人、采样地点、时间、样品名称、来源、批号、数量、保存条件等信息)。 4.2 样品处理 4.2.1 开启包装 4.2.1.1 实验室收到样品后,应先核对样品状态、包装完整性、来源、贮存信息并记录。 4.2.1.2 样品袋开启前,先将其表面擦干净,再用75%酒精消毒开启部位及其周围,保证无菌操作。 4.2.2 样液制备 4.2.2.1 称量法 在空气洁净度5级净化条件下用无菌方法准确称取25g样品。剪碎后加入225mL无菌稀释液 中,用拍击式均质器拍打1min~2min,充分混匀,制成1∶10的样液。 4.2.2.2 多点采样洗脱法 在空气洁净度5级净化条件下用无菌方法在样品四周和中间均匀布控5个采样点,用灭菌规格 板,每个采样点按4cm×5cm(20cm2)面积范围剪裁,每20cm2采样面积为1份检样,每件纺织品共 采集5份检样,采样面积为100cm2。将上述采集好的5份检样放入盛有200mL无菌稀释液的全滤网 无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min~2min,充分混匀,制成的样品洗脱液作为样液。 4.2.2.3 棉拭子涂抹法 用无菌稀释液湿润无菌干燥的棉拭子,在样品四周和中间均匀布控5个采样点,每个采样点用1个 无菌棉拭子,用无菌规格板围量,按4cm×5cm(20cm2)面积范围均匀涂抹,立即用无菌剪刀剪去棉签 手接触部分,将涂抹部分一块放入盛有50mL无菌稀释液中,制成1∶10的样液。 4.2.2.4 样液制备方法的选择 4.2.2.4.1 样液制备一般采用4.2.2.1方法。 4.2.2.4.2 当样品为面积较大或较厚实或多孔时,样液制备应采用4.2.2.2方法。采用4.2.2.2方法时如 果被检样品面积过大或过小,采样点可按比例增加或减少。使保持各采样点间距始终保持在10cm~ 20cm之间。 4.2.2.4.3 当样品质地致密不容易剪碎制备,或样品较贵重,客户要求无损检测的,样液制备应采用 4.2.2.3方法。 4.2.2.4.4 采用4.2.2.1、4.2.2.2方法,如果被检样品大量吸水而导致不能吸出足够样液时,无菌稀释液 可适当增加,以满足检测要求。 4.2.3 无菌稀释液的选择 定性检测时,应选择微生物的预增菌液作为无菌稀释液;定量检测时,应选择无菌生理盐水或磷酸 盐缓冲液作为无菌稀释液。 2GB/T46540—2025