ICS65.020.01 B16 中华人民共和国国家标准 GB/T33020—2016 苹果瘿蚊检疫鉴定方法 DetectionandidentificationofDasineuramali(Kieffer) 2016-10-13发布 2017-05-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。 本标准起草单位:中华人民共和国天津出入境检验检疫局、天津农学院、南开大学。 本标准主要起草人:牛春敬、焦克龙、胡佳续、冯洁、廖芳、卜文俊、黄国明、杨韶勇。 ⅠGB/T33020—2016 苹果瘿蚊检疫鉴定方法 1 范围 本标准规定了苹果瘿蚊的检测、饲养、标本制作和室内鉴定等方法。 本标准适用于苹果瘿蚊的检疫和鉴定。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 体长 bodylength 瘿蚊成虫虫体头最前部到腹部末端的长度。 2.2 翅长 winglength 瘿蚊成虫虫体从翅基到翅端的长度。 2.3 翅端 wingapex 瘿蚊成虫翅的外缘离翅基最远端。 2.4 结部 node 瘿蚊成虫触角鞭小结(flagellomere)基部着生微刺的膨大部分,与其端部的细长的颈部(neck) 相对。 2.5 环丝 circumfila 瘿蚊科多数种类在双翅目中的特有结构,为成虫触角鞭小节结部上横向环绕并有纵向相连的带状 或环状结构,其两端均着生于结部,无游离端。雄虫通常比雌虫环丝发达。 3 苹果瘿蚊基本信息 学名:Dasineuramali(Kieffer,1904)。 英文名:appleleafcurlingmidge,appleleafmidge。 中文名:苹果瘿蚊,或称苹果(叶)瘿蚊。 分类地位:苹果瘿蚊属于双翅目Diptera,瘿蚊科Cecidomyiidae,叶瘿蚊属(也称达瘿蚊属) DasineuraRondani。叶瘿蚊属全世界已知466种(Gagné,2010),其中苹果瘿蚊的重要近似种为梨叶瘿 蚊Dasineurapyri(Bouché,1847)。 传播途径:苹果瘿蚊主要以生活于寄主卷叶内的幼虫以及结茧于寄主植株附带土壤中的幼虫和蛹, 随寄主植物果实和植株进行远距离传播。 苹果瘿蚊其他信息参见附录A。 1GB/T33020—2016 4 方法原理 根据苹果瘿蚊危害状,在检疫现场肉眼观察寄主植物,取得幼虫、蛹或成虫,如取得幼虫和蛹需饲养 至成虫,解剖雌雄成虫并制成玻片标本,在显微镜下观察,根据形态特征对种类进行判定。 5 器材和试剂 5.1 器材 显微镜、体视显微镜、干燥箱、解剖针、眼科镊、0号毛笔、解剖穴盘、表面皿、烧杯、载玻片、盖玻片、 吸管、医用纱布、橡皮筋、养虫瓶(500mL或1L)、生物培养箱、解剖刀、小剪刀、培养土、标签、封口塑 料袋。 5.2 试剂 75%乙醇溶液、95%乙醇溶液、无水乙醇溶液、10%氢氧化钠溶液、二甲苯、苯酚、冰乙酸、香柏油、中 性树胶(以上使用化学试剂均为分析纯)。 6 检测与饲养 6.1 检测 在检疫现场仔细观察寄主植物叶片、果实以及植株所带泥土上是否有幼虫或蛹,如发现有卷叶,则 用解剖刀和小剪刀把卷叶剖开查找,如发现幼虫或蛹,连同寄主植物一起装入可封口塑料袋。塑料袋加 标签和编号,记录时间、地点、寄主、采集人、虫源地等,带回实验室。 6.2 饲养 现场检查获得的幼虫或蛹需要进一步饲养至成虫再进行鉴定。将带有幼虫的寄主叶片或蛹放入养 虫瓶中,期内置放一个盛有培养土的表面皿供幼虫化蛹及羽化,然后将养虫瓶置于温度25℃~30℃、 相对湿度50%~80%的生物培养箱内饲养。 7 标本的制作准备 7.1 标本准备 饲养羽化后的或直接采集到的瘿蚊成虫,用0号毛笔蘸取75%乙醇溶液将成虫移入75%乙醇溶液 中保存,以备制片。 7.2 雌雄成虫玻片标本 苹果瘿蚊雌雄成虫玻片标本制作方法参见附录B。 8 实验室鉴定 8.1 瘿蚊科鉴定特征 成虫是微小至小型的蚊类昆虫,体长通常0.50mm~5.00mm,触角通常较长,翅脉脉序简单,纵脉 2GB/T33020—2016 不多于5条,胫距缺失。幼虫圆柱状或扁圆柱状,老熟幼虫前胸腹面具胸骨片。 8.2 叶瘿蚊属鉴定特征 下颚须4节;跗节爪均具齿;R5脉在翅端稍前与C脉汇合;雄虫生殖节上的抱器基节中基瓣由基部 向端部渐细,并几乎与阳茎等长;雌虫产卵器可伸缩,且尾须融合;雌虫第8腹节背板明显长于第7腹节 背板,并且趋向于纵向延伸并左右分离。 8.3 苹果瘿蚊鉴定特征 8.3.1 成虫 成虫鉴定特征如下(参见附录C): ———体型:体小型,体长:雄虫1.50mm~2.00mm,雌虫1.70mm~2.30mm(正常体态,即非产卵 状态,产卵器不完全伸长);翅长:雄1.30mm~1.50mm,雌1.55mm~1.70mm; ———体色:虫体深棕色,雌虫腹部呈淡红色或浅棕色; ———下颚须:下颚须4+1节(包括负唇须节)(参见图C.1中A); ———触角:2+12~13节,多为2+13节。触角单结型,雄虫触角颈部相对较长,雌虫颈部极短,环 丝带状贴生(参见图C.1中B,C); ———翅:透明,密被毛和鳞片;R1脉、C脉和R5脉粗壮;R1脉在翅基部1/2靠前处与C脉汇合;R5 脉在翅端稍靠前处与C脉汇合;M3脉微弱,在翅基部和翅缘处弱化近于消失;Cu脉分叉,呈 大约50°角;PCu脉与Cu脉几乎平行(参见图C.1中D); ———跗节爪:各足跗节的爪均具基齿,爪缓慢弯曲,其基部具较小的三角状突出物,基齿约为爪长的 2/3,爪间突约与爪等长,爪垫细长棒状,约为爪长的1/2(参见图C.2中E); ———雄虫生殖节:抱器基节较壮,近基部内侧具被短毛的中基瓣在一侧抱握阳茎;抱器端节粗壮、不 明显弯曲,近基部膨大,端部具单齿;尾须分2瓣,瓣间宽阔深凹;肛下板略短于尾须,分2瓣, 瓣间宽阔浅凹;阳茎骨化,略短于抱器基节(参见图C.2中F,G,H,I); ———雌虫生殖节:产卵器较长,可伸缩。尾须融合、不分瓣,不骨化,近圆柱状,具稀疏的长刚毛,末 端着生微刺;肛下板细管状,不骨化,密被短毛,末端着生若干长刚毛(参见图C.2中J)。 8.3.2 卵 长卵圆状,呈淡红色,长约0.60mm,其长为宽的5倍左右。 8.3.3 幼虫 初龄幼虫体色为白色至乳白色,至老熟后转变为橘红色;老熟幼虫体长1.50mm~2.50mm,最长 可达3.00mm。 8.3.4 蛹 离蛹,包覆于白色丝质茧中;体色橘红色,体长1.90mm~2.00mm。 8.4 苹果瘿蚊与近似种的区别 苹果瘿蚊与重要近似种梨叶瘿蚊D.pyri(Bouché,1847)区别如下: ———成虫:前者雄虫生殖节抱器端节略直、弯曲不明显,且其基部明显膨大,而后者雄虫抱器端节向 内均匀弯曲明显,且其基部不明显膨大;前者雄虫肛下板端缘浅凹,即其凹形长明显短于宽,而 后者雄虫肛下板端缘明显深凹,即其凹形宽明显短于长(参见图C.3)。 3GB/T33020—2016 ———寄主:前者专一寄生苹果属植物Malusspp.,且主要为苹果M.domestica,后者专一寄生西洋 梨PyruscommunisL.。 9 结果判定 以成虫形态特征为依据,符合上述8.3.1特征者可判定为苹果瘿蚊。 10 标本保存 经过鉴定的苹果瘿蚊标本应永久保存,并加注标明采集时间、采集地点、寄主、采集人、鉴定人、进境 植物来源等信息的标签。 4GB/T33020—2016 附 录 A (资料性附录) 苹果瘿蚊地理分布、寄主植物、生物学特性和危害特点 A.1 地理分布 遍布欧洲(奥地利、比利时、保加利亚、前捷克斯洛伐克、芬兰、前南斯拉夫、法国、德国、匈牙利、意大利、 马其顿、荷兰、挪威、波兰、罗马尼亚、俄罗斯、瑞典、瑞士和英国);后传入美国、加拿大、阿根廷和新西兰。 A.2 寄主植物 蔷薇科的苹果属植物Malusspp.(Rosaceae),目前记录的寄主多为MalusdomesticaBorkhausen, 且该种瘿蚊对苹果各品种(或品系)的偏好性不一。 A.3 生物学特性 苹果瘿蚊成虫将卵产在苹果嫩叶边缘;由卵孵化出的幼虫取食叶片组织并造成叶片卷曲和提前落 叶现象,而幼虫则在卷叶内发育,但通常在土壤中化蛹;蛹在适当时间羽化成虫并交配,每头雌虫一般可 产200个卵。因各地气候条件的差异,苹果瘿蚊完成一个世代的时间需35d~60d。在温带地区(如加 拿大),一年仅发生2代~3代。而在较温暖的区域(如新西兰北岛),一年可发生6代~7代。 A.4 为害特点 受苹果叶瘿蚊为害的苹果植株出现末梢叶片卷曲的现象,部分卷曲叶片略呈红色。通常以幼苗期 为害严重,由于苹果叶片卷曲和提前落叶而影响光合作用的进行,因而严重阻碍植株生长并影响果实产 量(参见图A.1)。 注:引自Anforaetal.,2005。 图A.1 苹果瘿蚊幼虫的苹果叶片为害状 5GB/T33020—2016 附 录 B (资料性附录) 苹果瘿蚊玻片标本制作方法 B.1 将75%乙醇溶液中的成虫标本取出二翅,置于载玻片上,滴一滴加拿大树胶,封片即成翅的标本。 B.2 将剩余成虫部分在5%~10%的氢氧化钠中水浴短时加热,后转入95%乙醇溶液中脱水5min~ 10min,再转入无水乙醇溶液脱水5min~10min。 B.3 二甲苯-苯酚混和液(3∶1)中透明。 B.4 无水乙醇溶液中清洗。 B.5 香柏油中进一步透明并解剖,将成虫解剖为头、胸(具足)和腹三个部分。