ICS71.100.70 y42 中华人民共和国国家标准 GB/T30935—2014 化妆品中8-甲氧基补骨脂素等 8种禁用呋喃香豆素的测定 高效液相色谱法 Determinationof8furocoumarinesincluding8-methoxypsoralenincosmetics— Highperformanceliquidchromatography 2014-07-08发布 2014-11-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中国轻工业联合会提出。 本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会(SAC/TC257)归口。 本标准起草单位:中国检验检疫科学研究院、上海市日用化学工业研究所。 本标准主要起草人:马强、王超、马会娟、李文涛、白桦、孟宪双、陈云霞、沈敏、钱茵。 ⅠGB/T30935—2014 引 言 本标准的被测物质是我国《化妆品卫生规范》规定的禁用物质,不得作为化妆品生产原料即组分添 加到化妆品中。如果技术上无法避免禁用物质作为杂质带入化妆品时,则化妆品成品应符合《化妆品卫 生规范》对化妆品的一般要求,即在正常及合理的可预见的使用条件下,不得对人体健康产生危害。 目前我国尚未规定这些物质的限量值,本标准的制定,仅对化妆品中测定这些物质提供检测方法。 ⅡGB/T30935—2014 化妆品中8-甲氧基补骨脂素等 8种禁用呋喃香豆素的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了化妆品中8-甲氧基补骨脂素等8种禁用呋喃香豆素的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于膏霜、散粉、蜡基、水剂和香波类化妆品中8-甲氧基补骨脂素等8种禁用呋喃香豆素 的测定。 本标准的检出限和定量限:8-羟基补骨脂素的检出限为0.1mg/kg,定量限为0.25mg/kg;补骨脂 素、异补骨脂素、8-甲氧基补骨脂素、5-甲氧基补骨脂素、三甲沙林、欧前胡素、异欧前胡素的检出限为 0.2mg/kg,定量限为0.5mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 试样经溶剂提取,微孔滤膜过滤后,用高效液相色谱测定,外标法定量。 4 试剂和材料 除非另有说明,所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。 4.1 甲醇:色谱纯。 4.2 乙腈:色谱纯。 4.3 无水乙醇。 4.4 四氢呋喃。 4.5 50%乙醇水溶液:量取50mL无水乙醇和50mL水,混匀。 4.6 50%甲醇水溶液:量取50mL甲醇和50mL水,混匀。 4.7 50%乙腈水溶液:量取50mL乙腈和50mL水,混匀。 4.8 标准品:8-甲氧基补骨脂素等8种禁用呋喃香豆素标准品中文名称、英文名称、CAS号、分子式、结 构式和相对分子质量参见附录A表A.1,纯度不小于95%。 4.9 8种禁用呋喃香豆素的标准储备液:准确称取每种呋喃香豆素标准品(4.8)各10mg,精确至 0.1mg,分别置于10mL容量瓶中,用乙腈(4.2)溶解并定容至刻度,摇匀,配制成浓度分别为 1000μg/mL的标准储备液,于4℃保存,可使用3个月。 4.10 8种禁用呋喃香豆素的混合标准储备液:分别准确移取8种禁用呋喃香豆素标准储备液各1mL 1GB/T30935—2014 于10mL容量瓶中,用乙腈(4.2)稀释至刻度,该溶液中8种禁用呋喃香豆素的浓度均为100μg/mL。 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱(HPLC)仪:配有二极管阵列检测器。 5.2 液相色谱-质谱/质谱(LC-MS/MS)仪:配有电喷雾离子源(ESI)。 5.3 分析天平:感量为0.0001g和0.001g。 5.4 离心机:转速不低于5000r/min。 5.5 超声波水浴。 5.6 涡旋混合器。 5.7 具塞锥形瓶:50mL。 5.8 具塞塑料离心管:10mL。 5.9 微孔滤膜:0.45μm,有机相。 6 分析步骤 6.1 样品处理 6.1.1 膏霜类样品 称取1g(精确至0.001g)试样于50mL具塞锥形瓶(5.7)中,加入10mL50%乙醇水溶液(4.5),涡 旋混合后超声提取30min。取部分溶液转移至10mL具塞塑料离心管(5.8)中,以5000r/min离心 10min,上清液经0.45μm微孔滤膜(5.9)过滤,供高效液相色谱测定。 6.1.2 水剂类样品 称取1g(精确至0.001g)试样于50mL具塞锥形瓶(5.7)中,加入10mL无水乙醇(4.3),涡旋混合 后超声提取30min。以下步骤同6.1.1。 6.1.3 香波类样品 称取1g(精确至0.001g)试样于50mL具塞锥形瓶(5.7)中,加入10mL50%甲醇水溶液(4.6),涡 旋混合后超声提取30min。以下步骤同6.1.1。 6.1.4 蜡基类样品 称取1g(精确至0.001g)试样于50mL具塞锥形瓶(5.7)中,加入2mL四氢呋喃(4.4),涡旋混合 后再加入8mL50%乙醇水溶液(4.5),超声提取30min。以下步骤同6.1.1。 6.1.5 散粉类样品 称取1g(精确至0.001g)试样于50mL具塞锥形瓶(5.7)中,加入10mL50%乙腈水溶液(4.7),涡 旋混合后超声提取30min。以下步骤同6.1.1。 6.2 测定条件 高效液相色谱测定参考条件如下: a) 色谱柱:ZORBAXSB-Phenyl,5μm,250mm×4.6mm(内径),或相当者; b) 流动相:见表1; 2GB/T30935—2014 c) 流速:1.0mL/min; d) 柱温:30℃; e) 检测波长:250nm; f) 进样量:10μL。 表1 流动相 步骤 时间/min 水/% 甲醇/% 乙腈/% 0 0.00 55 22 23 1 12.50 55 22 23 2 14.00 37 31 32 3 21.00 36 32 32 4 22.00 0 50 50 5 25.00 55 22 23 6.3 标准曲线的绘制 用乙腈(4.2)将混合标准储备液逐级稀释得到浓度为0.025μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL、 0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL的混合标准工作溶液,按6.2的测定条件浓度由低到高 进样测定,以峰面积-浓度作图,得到标准曲线回归方程。 8种禁用呋喃香豆素标准品色谱图参见附录B中的图B.1。 6.4 测定 按6.2的测定条件对待测样液进行测定,用外标法定量。待测样液中对呋喃香豆素的响应值应在 标准曲线的线性范围内,超过线性范围则应稀释后再进样分析。进行样品测定时,如果检出呋喃香豆素 的色谱峰的保留时间与标准品相一致,并且在扣除背景后的样品色谱图中,该物质的紫外吸收光谱与标 准品的紫外可见吸收光谱相一致,则可初步确认样品中存在被测呋喃香豆素。必要时,阳性样品需用液 相色谱-质谱进行确认试验(参见附录C)。 6.5 空白试验 除不称取样品外,均按上述测定条件和步骤进行。 7 结果计算 结果按式(1)计算,计算结果保留两位小数(计算结果应扣除空白值): W=c×V m…………………………(1) 式中: W———化妆品中呋喃香豆素的含量,单位为毫克每千克(mg/kg); c———从标准工作曲线上查出的样液中被测呋喃香豆素的浓度,单位为微克每毫升(μg/mL); V———样液最终定容体积,单位为毫升(mL); m———试样的质量,单位为克(g)。 3GB/T30935—2014 8 检出限和定量限 本标准的检出限和定量限:8-羟基补骨脂素的检出限为0.1mg/kg,定量限为0.25mg/kg;补骨脂 素、异补骨脂素、8-甲氧基补骨脂素、5-甲氧基补骨脂素、三甲沙林、欧前胡素、异欧前胡素的检出限为 0.2mg/kg,定量限为0.5mg/kg。 9 回收率和精密度 在添加浓度0.25mg/kg~25mg/kg范围内,回收率在85.0%~105.8%,相对标准偏差为0.41%~ 7.90%。 10 允许差 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。 4GB/T30935—2014 附 录 A (资料性附录) 8种禁用呋喃香豆素的中文名称、英文名称、CAS号、分子式、结构式和相对分子质量 表A.1 8种禁用呋喃香豆素的中文名称、英文名称、CAS号、分子式、结构式和相对分子质量 中文名称 英文名称 CAS号分子式 结构式 相对分子质量 8-羟基补骨脂素8-Hydroxypsoralen2009-24-7C11H6O4 202.16 补骨脂素 Psoralen 66-97-7C11H6O3 186.16 异补骨脂素 Isopsoralen523-50-2C11H6O3 186.16 8-甲氧基补骨脂素8-Methoxypsoralen298-81-7C12H8O4 216.19 5-甲氧基补骨脂素5-Methoxypsoralen484-20-8C12H8O4 216.19 三甲沙林 Trioxsalen3902-71-4C14H12O3 228.24 欧前胡素 Imperatorin482-44-0C16H14O4 270.28 异欧前胡素 Isoimperatorin482-45-1C16H14O4 270.28 5GB/T30935—2014