ICS71.100.70 Y42 中华人民共和国国家标准 GB/T30929—2014 化妆品中禁用物质2,4,6-三氯苯酚、 五氯苯酚和硫氯酚的测定 高效液相色谱法 Determinationofbanned2,4,6-trichlorophenol,pentachlorophenoland bithionolincosmetics—Highperformanceliquidchromatography 2013-07-08发布 2014-11-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中国轻工业联合会提出。 本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会(SAC/TC257)归口。 本标准起草单位:江苏省产品质量监督检验研究院(国家化妆品质量监督检验中心)、苏州质量检测 科学研究院、上海市日用化学工业研究所、国家环保产品质量监督检验中心、山东省产品质量监督检验 研究院。 本标准主要起草人:卢剑、武中平、车文军、张征、张晓强、耿宁、王莉、沈敏、杜瑾、刘艳明、张岩、 胡梅、邹洁、钱凯、曲梅、杨洋、薛彦军。 ⅠGB/T30929—2014 引 言 本标准中的被测物质是我国《化妆品卫生规范》规定的禁用物质,不得作为化妆品生产原料即组分 添加到化妆品中。如果技术上无法避免禁用物质带入化妆品时,则化妆品成品应符合《化妆品卫生规 范》对化妆品的一般要求,即在正常及合理的、可预见的使用条件下,不得对人体健康产生危害。 目前我国尚未规定这些物质的限量值,本标准的制定,仅对化妆品中测定这些物质提供检测方法。 ⅡGB/T30929—2014 化妆品中禁用物质2,4,6-三氯苯酚、 五氯苯酚和硫氯酚的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了化妆品中2,4,6-三氯苯酚、五氯苯酚和硫氯酚含量的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于膏霜、乳液、液体类化妆品中2,4,6-三氯苯酚、五氯苯酚和硫氯酚含量的测定。 本标准的检出限和定量限:2,4,6-三氯苯酚的检出限为1.5mg/kg,定量限为5.0mg/kg;五氯苯酚 的检出限为1.5mg/kg,定量限为5.0mg/kg;硫氯酚的检出限为0.8mg/kg,定量限为2.5mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 以甲醇为溶剂,超声提取、离心,经0.45μm的有机滤膜过滤,用配有二极管阵列检测器的高效液相 色谱仪检测,外标法定量,液相色谱-串联质谱确认。 4 试剂和材料 除非另有说明,所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。 4.1 甲醇:色谱纯。 4.2 乙腈:色谱纯。 4.3 乙酸铵。 4.4 乙酸。 4.5 微孔滤膜:0.45μm,有机相。 4.6 标准品:2,4,6-三氯苯酚、五氯苯酚和硫氯酚的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分 子质量及结构式参见附录A,纯度不小于98%。 4.7 标准储备液:准确称取适量标准品(4.6)于50mL容量瓶中,用甲醇(4.1)分别溶解并定容至刻度, 配制成浓度为1mg/mL的标准储备液,于4℃避光保存,可使用3个月。 4.8 标准工作溶液:用甲醇(4.1)将上述标准储备液(4.7)分别配成一系列浓度为0.5mg/L、1.0mg/L、 2.0mg/L、5.0mg/L、10mg/L、25mg/L的混合标准工作溶液,现配现用。 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱仪(HPLC):配有二极管阵列检测器。 1GB/T30929—2014 5.2 分析天平:感量为0.0001g和0.01g。 5.3 离心机:转速不低于6000r/min。 5.4 超声波清洗器。 5.5 涡旋混合器。 5.6 具塞比色管:10mL。 6 测定步骤 6.1 试样制备 称取化妆品试样约0.5g(精确至0.1mg)于10mL具塞比色管中,加入约8mL甲醇,分散均匀后, 在超声波清洗器中超声提取20min,冷却至室温,加甲醇定容至刻度。取部分溶液放入离心管中,在离 心机上于6000r/min离心10min,上清液经0.45μm有机滤膜过滤,滤液供测定用。 注:如离心后难以获得上清液可加适量氯化钠破乳。 6.2 测定 6.2.1 液相色谱条件 液相色谱测定参考条件如下: a) 色谱柱:C18柱,250mm×4.6mm(i.d.),5μm,或相当者; b) 流动相:甲醇-乙腈-5mmol/L乙酸铵水溶液(pH3.5),梯度洗脱,梯度洗脱条件见表1; c) 流速:1.0mL/min; d) 柱温:30℃; e) 进样量:10μL; f) 检测波长:300nm。 表1 梯度洗脱条件 时间/min5mmol/L乙酸铵水溶液 (pH3.5)/%甲醇/% 乙腈/% 0.0 60 30 10 1.0 60 30 10 7.0 30 60 10 12.0 10 80 10 17.0 10 80 10 18.0 60 30 10 23.0 60 30 10 6.2.2 标准工作曲线绘制 分别吸取10μL标准工作溶液(4.8)注入高效液相色谱仪,按色谱条件(6.2.1)进行测定,以色谱峰 的峰面积为纵坐标,对应的溶液浓度为横坐标作图,绘制标准工作曲线。标准物质液相色谱图参见 附录B。 2GB/T30929—2014 6.2.3 试样测定 准确吸取10μL试样溶液(6.1)注入高效液相色谱仪,按色谱条件(6.2.1)进行测定,记录色谱峰的 保留时间和峰面积,由色谱峰的峰面积可从标准曲线上求出相应的被测物浓度。试样溶液中被测物的 响应值均应在仪器测定的线性范围之内。被测物含量高的试样可取适量试样溶液用流动相稀释后进行 测定。 6.2.4 定性判定 液相色谱仪对样品进行测定时,如果检出被测物的保留时间与标准品相一致,并且在扣除背景后的 样品色谱图中,该物质的紫外吸收光谱图与标准品的紫外吸收光谱图相一致,则可初步确认样品中存在 被测物。必要时,阳性样品需用液相色谱-串联质谱进行确认试验,参见附录C。 6.3 空白试验 除不加试样外,均按上述测定条件和步骤进行。 7 结果计算 结果按式(1)计算,计算结果保留小数点后两位。 Xi=ci×V m…………………………(1) 式中: Xi———样品中各被测物的含量,单位为毫克每千克(mg/kg); ci———从标准曲线得出各被测物的浓度,单位为毫克每升(mg/L); V———样品稀释后的总体积,单位为毫升(mL); m———样品质量,单位为克(g)。 8 检出限和定量限 本标准的检出限和定量限:2,4,6-三氯苯酚的检出限为1.5mg/kg,定量限为5.0mg/kg;五氯苯酚 的检出限为1.5mg/kg,定量限为5.0mg/kg;硫氯酚的检出限为0.8mg/kg,定量限为2.5mg/kg。 9 回收率与精密度 按本测定方法所确定的实验条件,在添加浓度5mg/kg~50mg/kg范围内,回收率在90%~ 110%之间,相对标准偏差小于5.0%。 10 允许差 在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。 3GB/T30929—2014 附 录 A (资料性附录) 2,4,6-三氯苯酚、五氯苯酚和硫氯酚的中文名称、英文名称、CAS登录号、 分子式、相对分子质量及结构式 表A.1 2,4,6-三氯苯酚、五氯苯酚和硫氯酚的中文名称、英文名称、CAS登录号、 分子式、相对分子质量及结构式 序号中文名称 英文名称 CAS登录号分子式相对分子 质量结构式 12,4,6-三氯 苯酚2,4,6-Trichlorophenol88-06-2C6H3Cl3O197.44 2五氯苯酚 Pentachlorophenol 87-86-5C6HCl5O266.33 3 硫氯酚Bithionol [2,2’-sulfanediylbis (4,6-dichlorophenol)]97-18-7C12H6Cl4O2S356.05 4GB/T30929—2014 附 录 B (资料性附录) 标准物质液相色谱图 说明: 1———2,4,6-三氯苯酚; 2———五氯苯酚; 3———硫氯酚。 图B.1 2,4,6-三氯苯酚、五氯苯酚和硫氯酚的标准物质液相色谱图 5GB/T30929—2014