ICS71.100.70 Y42 中华人民共和国国家标准 GB/T30927—2014 化妆品中罗丹明B等4种禁用着色剂的 测定 高效液相色谱法 Determinationof4prohibitedcoloringagentsincludingrhodamineBin cosmetics—Highperformanceliquidchromatography 2014-07-08发布 2014-11-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中国轻工业联合会提出。 本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会(SAC/TC257)归口。 本标准起草单位:中国检验检疫科学研究院、上海市日用化学工业研究所。 本标准主要起草人:马强、李文涛、白桦、马会娟、王烨、孟宪双、李晶瑞、丁岚、陈云霞、李琼、武晓剑。 ⅠGB/T30927—2014 引 言 本标准的被测物质是我国《化妆品卫生规范》规定的禁用物质,不得作为化妆品生产原料即组分添 加到化妆品中。如果技术上无法避免禁用物质作为杂质带入化妆品时,则化妆品成品应符合《化妆品卫 生规范》对化妆品的一般要求,即在正常及合理的可预见的使用条件下,不得对人体健康产生危害。 目前我国尚未规定这些物质的限量值,本标准的制定,仅对化妆品中测定这些物质提供检测方法。 ⅡGB/T30927—2014 化妆品中罗丹明B等4种禁用着色剂的 测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了化妆品中罗丹明B、酸性黄36、颜料红53∶1和颜料橙5等4种禁用着色剂的高效液 相色谱测定方法。 本标准适用于膏霜、散粉、水剂、香波和唇膏类化妆品中罗丹明B、酸性黄36、颜料红53∶1和颜料 橙5等4种禁用着色剂的测定。 本标准的检出限和定量限:罗丹明B的检出限为2mg/kg,定量限为4mg/kg;散粉类、水剂类和唇 膏类样品中酸性黄36的检出限为4mg/kg,定量限为8mg/kg,膏霜类和香波类样品中酸性黄26的检 出限为3mg/kg,定量限为6mg/kg;散粉类、水剂类和唇膏类样品中颜料红53∶1的检出限为 6mg/kg,定量限为10mg/kg,膏霜类和香波类样品中颜料红53∶1的检出限为4mg/kg,定量限为 8mg/kg;颜料橙5的检出限为3mg/kg,定量限为6mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 试样经溶剂提取,离心过滤后,用高效液相色谱法进行测定,外标法定量,液相色谱-质谱确认。 4 试剂和材料 除非另有说明,所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。 4.1 乙腈:色谱纯。 4.2 甲醇:色谱纯。 4.3 四氢呋喃:色谱纯。 4.4 40%四丁基氢氧化铵水溶液(体积分数)。 4.5 柠檬酸。 4.6 28%氨水溶液(体积分数)。 4.7 标准品:罗丹明B等4种禁用着色剂标准品中文名称、英文名称、结构式、CAS号、CI号、分子式、 相对分子质量参见附录A表A.1,纯度不小于95%。 4.8 标准储备溶液:分别准确称取适量罗丹明B、酸性黄36和颜料红53∶1标准物质(精确至0.0001g), 以甲醇(4.2)分别配制成浓度为1000μg/mL的标准储备溶液。准确称取适量颜料橙5标准物质,以乙 腈(4.1)配制成浓度为200μg/mL的标准储备溶液。各标准储备溶液于4℃避光保存,可使用三个月。 1GB/T30927—2014 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱(HPLC)仪:配有二极管阵列检测器。 5.2 液相色谱-质谱/质谱(LC-MS/MS)仪:配有电喷雾离子源(ESI)。 5.3 pH计:范围0.00~14.00,精度±0.01。 5.4 分析天平:感量为0.0001g和0.001g。 5.5 离心机:转速不低于5000r/min。 5.6 超声波水浴。 5.7 具塞比色管:10mL。 5.8 具塞塑料离心管:10mL。 5.9 微孔滤膜:0.45μm,聚四氟乙烯材质。 6 分析步骤 6.1 样品处理 6.1.1 膏霜、散粉、水剂、香波类样品 称取1.0g(精确至0.001g)试样于10mL比色管中,加入甲醇至刻度,超声提取30min。取部分溶 液转移至10mL具塞塑料离心管中,以5000r/min离心10min,上清液经0.45μm微孔滤膜过滤,供 高效液相色谱测定。 注:如离心难以获得上清液可加适量氯化钠破乳。 6.1.2 唇膏类样品 称取1.0g(精确至0.001g)试样于50mL具塞锥形瓶中,加入1.5mL四氢呋喃(4.3),再加入乙 腈(4.1)至刻度,超声提取30min。取部分溶液转移至10mL具塞塑料离心管中,以5000r/min离心 10min,上清液经0.45μm微孔滤膜过滤,供高效液相色谱测定。 6.2 测定条件 高效液相测定参考条件如下: a) 色谱柱:XTerraC18,5μm,250mm×4.6mm(i.d.),或相当者; b)流动相:流动相条件见表1; 表1 流动相条件 时间/min 甲醇/% 0.015mol/L柠檬酸溶液(含0.01mol/L四丁基氢氧化铵,pH8.2)/% 0.00 45 55 8.00 75 25 12.00 90 10 15.00 90 10 20.00 45 55 c)流速:1.0mL/min; d)柱温:30℃; 2GB/T30927—2014 e)检测波长:417nm(酸性黄36)、483nm(颜料橙5)、504nm(颜料红53∶1)、547nm(罗明丹B); f)进样量:10μL。 6.3 标准曲线的绘制 用流动相溶液将标准储备液按比例混合,并将逐级稀释得到浓度为0.2μg/mL、0.5μg/mL、 1μg/mL、2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL的标准工作溶液,按6.2的测定条件浓 度由低到高进样测定,以峰面积-浓度作图,得到标准曲线回归方程。 4种禁用着色剂标准品色谱图和紫外吸收光谱图参见附录B。 6.4 测定 按6.2的测定条件对待测样液中4种禁用着色剂进行测定,用外标法定量。待测样液中4种禁用 着色剂的响应值应在标准曲线的线性范围内,超过线性范围则应稀释后再进样分析。进行样品测定时, 如果检出禁用着色剂的色谱峰的保留时间与标准品相一致,并且在扣除背景后的样品色谱图中,该物质 的紫外可见吸收光谱与标准品的紫外可见吸收光谱相一致,则可初步确认样品中存在被测禁用着色剂。 必要时,阳性样品需用液相色谱-质谱进行确认试验(参见附录C)。 6.5 空白试验 除不称取样品外,均按上述测定条件和步骤进行。 7 结果计算 结果按式(1)计算,计算结果保留两位小数(计算结果应扣除空白值): W=c×V m…………………………(1) 式中: W———试样中着色剂的含量,单位为毫克每千克(mg/kg); c———从标准工作曲线上查出的样液中着色剂的浓度,单位为微克每毫升(μg/mL); V———样液最终定容体积,单位为毫升(mL); m———试样的质量,单位为克(g)。 8 检出限和定量限 本标准的检出限和定量限:罗丹明B的检出限为2mg/kg,定量限为4mg/kg;散粉类、水剂类和唇 膏类样品中酸性黄26的检出限为4mg/kg,定量限为8mg/kg,膏霜类和香波类样品中酸性黄36的检 出限为3mg/kg,定量限为6mg/kg;散粉类、水剂类和唇膏类样品中颜料红53∶1的检出限为 6mg/kg,定量限为10mg/kg,膏霜类和香波类样品中颜料红53∶1的检出限为4mg/kg,定量限为 8mg/kg;颜料橙5的检出限为3mg/kg,定量限为6mg/kg。 9 回收率和精密度 在添加浓度4mg/kg~300mg/kg范围内,回收率在86.6%~99.3%之间,相对标准偏差小于5%。 10 允许差 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。 3GB/T30927—2014 附 录 A (资料性附录) 4种禁用着色剂的中文名称、英文名称、结构式、CAS号、CI号、分子式、相对分子质量 表A.1 4种禁用着色剂的中文名称、英文名称、结构式、CAS号、CI号、分子式、相对分子质量 中文 名称英文名称 结构式 CAS号CI号 分子式相对分 子质量 罗 丹 明 BRhodamine B 81-88-945170C28H31N2O3Cl479.02 酸 性 黄 36Acid Yellow36 587-98-413065C18H14N3O3SNa375.38 颜 料 红 53∶1Pigment Red53∶1 5160-02-115585:1C34H24N4O8S2Cl2Ba888.94 颜 料 橙 5Pigment Orange5 3468-63-112075 C16H10N4O5338.27 4GB/T30927—2014 附 录 B (资料性附录) 4种禁用着色剂标准品色谱图和紫外可见吸收光谱图 说明: 1———颜料红53∶1(504nm,7.507min); 2———酸性黄36(417nm,10.472min); 3———罗丹明B(547nm,13.739min); 4———颜料橙5(483nm,15.918min)。 图B.1 4种禁用着色剂标准品色谱图 图B.2 罗丹明B标准