ICS71.100.70 Y42 中华人民共和国国家标准 GB/T30926—2014 化 妆品中7种维生素C衍生物的测定 高效液相色谱-串联质谱法 Determinationof7kindsofvitaminCderivativesinCosmetics— Highperformanceliquidchromatography-tandemMassspectrometry 2014-07-08发布 2014-11-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中国轻工业联合会提出。 本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会(SAC/TC257)归口。 本标准起草单位:大连市产品质量监督检验所(国家日化产品质量监督检验中心)、大连标准检测技 术研究中心、上海市日用化学工业研究所、上海香料研究所。 本标准主要起草人:毛希琴、郑顺利、胡侠、潘炜、沈敏、钱茵。 ⅠGB/T30926—2014 化妆品中7种维生素C衍生物的测定 高效液相色谱-串联质谱法 1 范围 本标准规定了化妆品中7种维生素C衍生物[抗坏血酸葡萄糖苷、3-O-乙基抗坏血酸、抗坏血酸磷 酸酯盐(以抗坏血酸磷酸酯计)、抗坏血酸硬脂酸酯、抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸二棕榈酸酯、抗坏血酸 四异棕榈酸酯]的测定———高效液相色谱串联质谱法。 本标准规定的高效液相色谱串联质谱法适用于化妆品中7种维生素C衍生物的定量测定。 本标准方法对所有目标化合物检出限均为3μg/g,对所有目标化合物定量限均为10μg/g。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 利用水和二氯甲烷双液相体系将水溶性维生素C衍生物(抗坏血酸葡萄糖苷,3-O-乙基抗坏血酸, 抗坏血酸磷酸酯盐)与化妆品中油溶性成分及表面活性剂初步分离,水提物用C18固相萃取小柱脱除其 中的非极性强的干扰成分后,用反相高效液相色谱分离,串联四级杆质谱检测,标准曲线外标法定量。 油溶性维生素C衍生物(抗坏血酸硬脂酸酯,抗坏血酸棕榈酸酯,抗坏血酸二棕榈酸酯,抗坏血酸 四异棕榈酸酯)用有机溶剂溶解提取,必要时用硅胶固相萃取小柱脱除蜡基基质后,用反相高效液相色 谱分离,串联四级杆质谱检测,标准曲线外标法定量。 4 试剂和材料 除非另有说明,所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682中规定的一级水。 4.1 标准物质:7种维生素C衍生物的化合物名称、INCI名称、CAS号、分子式、结构式、相对分子质量 和纯度参见附录A。 4.2 甲醇:色谱纯。 4.3 异丙醇:色谱纯。 4.4 甲酸:色谱纯。 4.5 二氯甲烷。 4.6 无水乙醇。 4.7 四氢呋喃。 4.8 环己烷。 4.9 丁基羟基茴香醚(BHA)。 4.10 2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)。 1GB/T30926—2014 4.11 维生素E醋酸酯。 4.12 柠檬酸。 4.13 亚硫酸氢钠(NaHSO3)。 4.14 甲酸。 4.15 乙二胺四乙酸(EDTA)二钠。 4.16 C18固相萃取小柱:200mg/3mL。使用前,依次用3mL甲醇和3mL水活化。 4.17 硅胶固相萃取小柱:200mg/3mL。使用前,用3mL环己烷(4.8)活化。 4.18 溶液Ⅰ:称取0.0037gEDTA二钠,0.5gNaHSO3,用500mL蒸馏水溶解。 4.19 溶液Ⅱ:称取0.0037gEDTA二钠,0.5gNaHSO3,用500mL20%甲醇水溶液(以100mL 甲醇+400mL水配制)溶解。 4.20 溶液Ⅲ:称取BHA,BHT,VE醋酸酯,柠檬酸各0.1g,用500mL无水乙醇(4.6)溶解。 4.21 溶液Ⅳ:称取BHA,BHT,VE醋酸酯,柠檬酸各0.1g,用500mL四氢呋喃(4.7)溶解。 4.22 溶液Ⅴ:称取BHA,BHT,VE醋酸酯各0.1g,用500mL环己烷(4.8)溶解。 4.23 溶液Ⅵ:向200mL溶液Ⅲ(4.20)中加入1mL甲酸(4.14)。 4.24 溶液Ⅶ:称取0.0037gEDTA二钠(4.15),0.5gNaHSO3(4.13),用500mL40%甲醇水溶液(以 200mL甲醇+300mL水配制)溶解。 注:溶液Ⅰ~Ⅶ配制均应尽量选择棕色瓶,配制后应注意避光保存,建议保存时间不超过2周。 4.25 0.05%甲酸的水溶液:向1L水中加入0.5mL甲酸(4.4)。 4.26 0.05%甲酸的甲醇异丙醇溶液:500mL甲醇+500mL异丙醇+0.5mL甲酸(4.4)。 4.27 0.05%甲酸的甲醇溶液:向1L甲醇中加入0.5mL甲酸(4.4)。 4.28 标准储备液 4.28.1 油溶性维生素C衍生物标准储备液 准确称取油溶性维生素C衍生物(抗坏血酸硬脂酸酯,抗坏血酸棕榈酸酯,抗坏血酸二棕榈酸酯, 抗坏血酸四异棕榈酸酯)各标准物质250mg分别置于4个25mL的棕色容量瓶中,用溶液Ⅳ(4.21)溶 解定容,配制浓度为10mg/mL的标准储备溶液,于4℃~6℃条件下避光保存,抗坏血酸硬脂酸酯、抗 坏血酸棕榈酸酯和抗坏血酸二棕榈酸酯的保存期为3天,抗坏血酸四异棕榈酸酯的保存期为2周。 4.28.2 水溶性维生素C衍生物标准储备液 准确称取3种水溶性维生素C衍生物(抗坏血酸葡萄糖苷,3-O-乙基抗坏血酸,抗坏血酸磷酸酯 钠)各标准物质250mg分别置于4个25mL的棕色容量瓶中,用溶液Ⅱ(4.19)溶解定容,配制浓度为 10mg/mL标准储备液,于4℃~6℃条件下避光保存,保存期为3天。 4.29 系列标准溶液 4.29.1 系列标准溶液A 将4种油溶性维生素C衍生物的标准储备液(4.28.1)等体积混合并用溶液Ⅳ(4.21)稀释10倍,配 制1mg/mL的混合标准溶液。用溶液Ⅳ(4.21)逐级稀释,配制成浓度分别为1000μg/L,800μg/L, 600μg/L,200μg/L,100μg/L的系列标准混合溶液。需现用现配。 4.29.2 系列标准溶液B 将3种水溶性维生素C衍生物的标准储备液(4.28.2),等体积混合并用溶液Ⅰ(4.18)稀释10倍, 配制1mg/mL的混合标准溶液。用溶液Ⅰ(4.18)逐级稀释,配制成浓度分别为1000μg/L, 2GB/T30926—2014 800μg/L,600μg/L,200μg/L,100μg/L的系列标准混合溶液。需现用现配。 注:鉴于本方法中抗坏血酸磷酸酯盐(一般为镁盐或钠盐形式)均以抗坏血酸磷酸酯形式被检出,方法无法分辨是 抗坏血酸的哪种盐形式。为统一测试结果,建议选择抗坏血酸磷酸酯钠作为标准物质,测试结果则报告以抗坏 血酸磷酸酯计的含量[按式(2)进行]。 4.30 0.2μm微孔聚丙烯滤膜针式过滤器。 4.31 0.2μm微孔尼龙滤膜针式过滤器。 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱串联四级杆质谱联用仪(ESI源)。 5.2 分析天平:感量0.1mg;0.01mg。 5.3 漩涡混合器。 5.4 超声波清洗器。 5.5 离心机:转速不小于5000r/min,离心试管容量10mL,15mL。 5.6 离心机:转速不小于12000r/min,离心试管容量2mL。 5.7 移液枪或移液器。 6 分析步骤 6.1 油溶性维生素C衍生物的分析 6.1.1 试样制备 6.1.1.1 膏霜、乳液、化妆水、粉基类等化妆品样品的制备 称取0.1g样品(精确至0.001g)于10mL具塞离心管中,准确加入5mL溶液Ⅳ(4.21),涡旋混合 1min,室温超声10min后,移取1mL~2mL于2mL塑料离心管中,12000r/min离心5min,转入进 样瓶中待测,或涡旋混匀后的溶液5000r/min离心10min后经聚丙烯滤膜过滤(4.30)转入进样瓶中 待测。 6.1.1.2 甲油类化妆品样品的制备 称取0.1g样品(精确至0.001g)于10mL具塞离心管中,向离心管中分别准确加入4mL溶液Ⅳ (4.21)和1mL溶液Ⅴ(4.22),涡旋混合1min,移取1mL~2mL于2mL具塞塑料离心管中, 12000r/min离心5min,转入进样瓶中待测,或涡旋混匀后的溶液5000r/min离心10min后经聚丙 烯滤膜过滤器(4.30)转入进样瓶中待测。 6.1.1.3 唇膏等蜡基化妆品样品的制备 称取0.1g样品(精确至0.001g)于10mL具塞离心管中,向离心管中准确加入2mL溶液 Ⅴ(4.22)于50℃水浴中超声分散至澄清透明,然后向离心管中准确加入3mL溶液Ⅲ(4.20),涡旋混匀 1min,移取1mL~2mL于2mL塑料离心管中,12000r/min离心5min,转入进样瓶中待测,或涡旋 混匀后的溶液5000r/min离心10min后经聚丙烯滤膜过滤器(4.30)转入进样瓶中待测。 必要时,用硅胶固相萃取小柱脱除蜡基基质。具体操作如下: 称取0.1g样品(精确至0.001g)于10mL具塞离心管中,向离心管中加入3mL溶液Ⅴ(4.22)于 50℃水浴中超声分散至澄清透明。将所有溶液趁热过硅胶固相萃取小柱(4.17),再用1mL~2mL环 己烷(4.8)(50℃水浴中预热)润洗离心管,润洗溶液一并加入硅胶固相萃取小柱,待上述所有溶液通过 3GB/T30926—2014 固相萃取小柱后,用3mL~5mL环己烷(4.8)(50℃水浴