(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210685255.0 (22)申请日 2022.06.14 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 115011723 A (43)申请公布日 2022.09.06 (73)专利权人 中国农业科 学院果树研究所 地址 125100 辽宁省葫芦岛市 兴城市兴海 南街98号 (72)发明人 欧春青　姜淑苓　王斐　张艳杰　 马力　 (74)专利代理 机构 北京格汇 专利代理事务所 (特殊普通 合伙) 16088 专利代理师 罗小亮 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01)C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) A01H 1/04(2006.01) 审查员 陈果 (54)发明名称 与梨果皮红色性状连锁的分子标记在梨果 皮红色/绿 色性状辅助选择育种中的应用 (57)摘要 本发明涉及与梨果皮红色性状连锁的位点、 分子标记及其应用。 位点的核苷 酸序列包括位于 ‘中矮1号’梨参考基因组的Chr 5的26527817碱基 处的位点的核苷酸序列， 参考基因组的GeneBank 登录号： SMOL00000000。 该处的碱基序列为 ATAACTAGCAAAAATAAGACACGAAA TGTTAAATACT或A。 上述位点及基于上述位点开发的分子标记可以 用于梨果皮红色/绿色性状辅助选择育种， 在杂 交苗的幼苗期快速淘汰绿果皮单株， 节省后续杂 交苗维护和鉴定评价成本， 显著提高红皮梨育种 效率， 具有 适用品种广泛、 红株检出率高、 错误率 低、 表型与带 型一致率高等优点。 权利要求书1页 说明书9页 序列表2页 附图6页 CN 115011723 B 2022.12.09 CN 115011723 B 1.与梨果皮红色性状连锁的分子标记在梨果皮红色/绿色性状辅助选择育种中的应 用， 其特征在于， 所述分子标记扩增产 物的内部包含与梨果皮红色性状连锁的位点； 所述位 点位于‘中矮1号’梨参考基因组的Chr5的26527817碱基处， 参考基因组的GeneBank  登录 号： SMOL0 0000000。 2.根据权利要求1所述应用， 其特征在于， 碱基处的碱基序列为ATAACTAGCAAAAATAAGA CACGAAATGTTAAATACT或A。 3.根据权利要求1或2所述应用， 其特征在于， 所述分子标记的上游引物序列为SEQ  ID  NO:1所示的序列， 分子标记的下游引物序列为SEQ  ID NO:2所示的序列。 4.引物在梨果皮红色/绿色性状辅助选择育种中的应用， 其特征在于， 所述引物为用于 扩增与梨果皮红色性状连锁的分子标记的引物； 所述分子标记扩增产 物的内部包含与梨果 皮红色性状连锁的位点； 所述位点位于 ‘中矮1号’梨参考基因组的Chr5的26527817碱基处， 参考基因组的GeneBan k 登录号： SMOL0 0000000。 5.根据权利要求4所述应用， 其特征在于， 碱基处的碱基序列为ATAACTAGCAAAAATAAGA CACGAAATGTTAAATACT或A。 6.根据权利要求4或5所述应用， 其特征在于， 所述引物包括上游引物和下游引物， 上游 引物序列为SEQ  ID NO:1所示的序列， 下游引物序列为SEQ  ID NO:2所示的序列。 7.试剂盒在梨果皮红色/绿色性状辅助选择育种中的应用， 其特征在于， 所述试剂 盒包 括引物； 所述引物为用于扩增与梨果皮红色性状连锁的分子标记的引物； 所述分子标记扩 增产物的内部包含与梨果皮红色性状连锁的位点； 所述位点位于 ‘中矮1号’梨参考基因组 的Chr5的26527817碱基处， 参 考基因组的GeneBan k 登录号： SMOL0 0000000。 8.根据权利要求7所述应用， 其特征在于， 碱基处的碱基序列为ATAACTAGCAAAAATAAGA CACGAAATGTTAAATACT或A。 9.根据权利要求7或8所述应用， 其特征在于， 所述引物包括上游引物和下游引物， 上游 引物序列为SEQ  ID NO:1所示的序列， 下游引物序列为SEQ  ID NO:2所示的序列。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115011723 B 2与梨果皮红色性状连锁的分子标记在梨果皮红色/绿色性状 辅助选择育种中的应用 技术领域 [0001]本发明属于梨分子遗传育种领域， 尤其涉及与梨果皮红色性状连锁的位点、 分子 标记及其应用。 背景技术 [0002]梨(Pyrus  L.)是一种重要的蔷薇科(Rosaceae)果树， 为我国三大水果之一， 据联 合国粮农组织统计数据库(FAOSTAT)数据显示， 2020年我国梨栽培面积为87万公顷， 产量 1610万吨， 分别占世界总 面积和产量的67％和70％， 在果树产业中居重要地位。 近年来， 红 梨因其诱人的外观和丰富的营养价值， 越来越受消费者青睐。 然而， 在实际生产中， 能够在 我国栽培的红梨品种不多， 尤其是我国主栽的梨品种为东方梨， 缺少品质优良、 着色稳定的 红色品种， 因此， 红皮梨一 直以来都是我国乃至全世界梨育种工作者的重要育种目标。 [0003]目前， 杂交育种是梨育种中最常用的育种方式。 由于梨为多年生果树， 性状遗传机 制复杂， 杂交后代的优选率低， 实生苗通常还需要渡过3 ‑5年甚至更长时间的童期才能开花 结果， 育种过程中 需要大量的土地和人力、 物力成本， 育种成本高。 [0004]前人开发的标记多需要采用荧光定量PCR或普通PCR加聚丙烯酰胺凝胶电泳的方 式才能区分不同供试样品的表型， 分别具有成本高和实验程序繁琐等缺点。 因此， 开 发能够 用普通PCR加 琼脂糖凝胶电泳就能成功区分不同样品表型 的分子标记， 则能极大地降低实 验成本并提高育种效率。 [0005]分子标记辅助选择育种技术应用于梨育种的重要前提是开发与梨重要性状紧密 连锁的分子标记。 果皮红色作为梨果 实重要的外观品质性状， 该性状遗传机制复杂， 不同红 梨品种红色性状的形成机制不同， 并且现有的分子标记存在准确 率低的问题， 需要开发更 为广泛有效的标记位 点， 以应用于梨育种工作。 [0006]梨的染色体存在很多位点但是并非所有的位点都适合作为分子标记， 也并非所有 的分子标记都可以用于梨果皮红色/绿色性状辅助选择， 因此， 如何筛选出合适的分子标 记， 并能够进一 步提高准确率及筛 选效率、 降低错 误率是亟待解决的技 术难点。 发明内容 [0007]鉴于现有技术所存在的问题， 本发明提供与梨果皮红色性状连锁的位点、 分子标 记及其应用， 上述位点、 分子标记可以用于梨果皮红色/绿色性状辅助选择育种中， 在杂交 苗的幼苗期快速淘汰绿果皮单株， 节省后续杂交苗维护和 鉴定评价成本， 显著提高红皮梨 育种效率， 具有适用品种 广泛、 准确率高、 红株检出率高、 错误率低、 表型与带型一致率高等 优点。 [0008]本发明解决上述 技术问题的技 术方案如下： [0009]与梨果皮红色性状连锁的位点， 位点的核苷酸序列包括位于 ‘中矮1号’梨参考基 因组的Chr5的26527817碱基处的位点的核苷酸序列， 参考基因组的GeneBank登录号：说　明　书 1/9 页 3 CN 115011723 B 3