(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210767426.4 (22)申请日 2022.06.30 (71)申请人 湖南家辉生物技 术有限公司 地址 410205 湖南省长 沙市高新 开发区麓 谷麓景路2号 (72)发明人 曾桥　李婵艺　刘鑫林　 (74)专利代理 机构 北京高沃 律师事务所 1 1569 专利代理师 苏士莹 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种非大疱性先天性鱼鳞病样红皮病的诊 断试剂和试剂盒 (57)摘要 本发明涉及基因诊断技术领域， 特别是涉及 一种非大疱性先天性鱼鳞病样红皮病的诊断试 剂和试剂盒。 本发明通过外显子组测序技术首次 发现了SNP1和SNP2位点复合杂合突变可以导致 非大疱性先天性鱼鳞病样红皮病， 根据该复合杂 合突变制备的诊断试剂， 可以特异性区分非大疱 性先天性鱼鳞病样红皮病 患者、 携带者和正常人 群， 可用于快速、 有效地预测或诊断非大疱性先 天性鱼鳞病样红皮病， 可以提供优生优育和治疗 干预指导。 另 一方面， 本发明为非大疱性先天性 鱼鳞病样红皮病的发病机制研究奠定了重要基 础， 为非大疱性先天性鱼鳞病样红皮病患者的治 疗提供全新的理论依据。 第三方面， 本发明可 以 为治疗非大疱性先天性鱼鳞病样红皮病提供可 能的药物靶点。 权利要求书2页 说明书16页 序列表9页 附图4页 CN 115216534 A 2022.10.21 CN 115216534 A 1.一种用于诊断非大疱性先天性鱼鳞病样红皮病的生物标志物， 其特征在于， 所述生 物标志物为ALOX12B基因的复合杂合 突变； 所述生物标志 物包括SNP1和SNP2； 所述SNP1在登录号 为NM_001139.3的1 1号外显子的第140 5位存在C>T突变； 所述SNP2在登录号 为NM_001139.3的15号外 显子的第20 60位存在A>G突变。 2.利用生物标志物在制备非大疱性先天性鱼鳞病样红皮病诊断试剂或试剂盒中的应 用， 其特征在于， 所述 生物标志 物为ALOX12B基因的复合杂合 突变； 所述生物标志 物包括SNP1和SNP2； 所述SNP1在登录号 为NM_001139.3的1 1号外显子的第140 5位存在C>T突变； 所述SNP2在登录号 为NM_001139.3的15号外 显子的第20 60位存在A>G突变。 3.一种非大疱性先天性鱼鳞病样红皮病的诊断试剂， 其特征在于， 所述试剂包括扩增 生物标志 物的引物； 所述生物标志 物包括SNP1和SNP2； 所述SNP1在登录号 为NM_001139.3的1 1号外显子的第140 5位存在C>T突变； 所述SNP2在登录号 为NM_001139.3的15号外 显子的第20 60位存在A>G突变； 扩增所述SNP1的引物包括ALOX12B ‑1F和ALOX12B ‑1R； 扩增所述SNP2的引物包括ALOX12B ‑2F和ALOX12B ‑2R； 所述ALOX12B ‑1F的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示； 所述ALOX12B ‑1R的核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示； 所述ALOX12B ‑2F的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示； 所述ALOX12B ‑2R的核苷酸序列如SEQ  ID NO.4所示。 4.权利要求3所述试剂在制备非大疱性先天性鱼鳞病样红皮病诊断试剂盒中的应用。 5.一种非大疱性先天性鱼鳞病样红皮病的诊断试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括 权利要求3所述试剂和 测序引物。 6.根据权利要求5所述的诊断试剂盒， 其特征在于， 所述测序引物包括对含有SNP1的扩 增片段进行测序的引物对一和对 含有SNP2的扩增片段进行测序的引物对二； 所述引物对一包括ALOX12B ‑Seq1F和ALOX12B ‑Seq1R； 所述引物对二包括ALOX12B ‑Seq2F和ALOX12B ‑Seq2R； 所述ALOX12B ‑Seq1F的核苷酸序列如SEQ  ID NO.5所示； 所述ALOX12B ‑Seq1R的核苷酸序列如SEQ  ID NO.6所示； 所述ALOX12B ‑Seq2F的核苷酸序列如SEQ  ID NO.7所示； 所述ALOX12B ‑Seq2R的核苷酸序列如SEQ  ID NO.8所示。 7.根据权利要求5或6所述的诊断试剂盒， 其特征在于， 所述诊断试剂盒还包括SNP1位 点阳性突变参考品DNA1和SNP2位 点阳性突变参考品DNA2； 所述DNA1的单链核苷酸序列如SEQ  ID NO.9所示； 所述DNA2的单链核苷酸序列如SEQ  ID NO.10所示。 8.一种鉴定生物标志 物基因型的方法， 其特 征在于， 所述 生物标志 物包括SNP1和SNP2； 所述SNP1在登录号 为NM_001139.3的1 1号外显子的第140 5位存在C>T突变； 所述SNP2在登录号 为NM_001139.3的15号外 显子的第20 60位存在A>G突变；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115216534 A 2所述方法包括以下步骤： 以待测样品DNA为模板， 利用权利 要求3所述诊断试剂中的引物进行PCR扩增， 得到扩增 产物； 将扩增产物进行测序， 确定生物标志 物的基因型。 9.根据权利 要求8所述的方法， 其特征在于， 所述PCR扩增的反应进程包括： 95℃预变性 5min； 95℃变性3 0s， 56℃退火3 0s， 72℃延伸6 0s， 33个循环； 72℃反应7mi n。 10.根据权利要求7所述的方法， 其特征在于， 所述PCR扩增的反应体系以20μL计， 包括 10×PCR缓冲液2μL、 dNTPs  0.4μL、 ALOX12B ‑1F或ALOX12B ‑2F 0.5μL、 ALOX12B ‑1R或 ALOX12B‑2R 0.5 μL、 模板1 μL、 Taq酶0.2 μL和余 量的ddH2O。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115216534 A 3