(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210750602.3 (22)申请日 2022.06.29 (71)申请人 广东海洋大学 地址 524088 广东省湛江市麻章区海大路1 号 (72)发明人 赵志辉　李嘉灵　姜平　于海滨　 (74)专利代理 机构 广州粤高专利商标代理有限 公司 44102 专利代理师 段卉 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种评估奶牛乳汁中乳 糖含量的方法 (57)摘要 本发明公开了一种评估奶牛乳汁中乳糖含 量的方法， 本发明以奶牛为对象， 发现并获得了 影响奶牛乳糖性状相关的分子标记， 即I2 ‑1095G >A， 并且发现GA基因型个体的乳糖含量 极显著高 于GG基因型个体， 可作为奶牛选育的分子遗传标 记位点。 并建立评估奶牛乳汁中乳糖含量的方 法， 该方法技术简单、 结果可靠， 且相较于高通量 测序， 大大降低成本。 可用于我国奶牛生产性能 分子育种， 从而能够建立优良遗传资源的奶牛 群。 权利要求书1页 说明书8页 序列表1页 附图1页 CN 114990234 A 2022.09.02 CN 114990234 A 1.一种评估奶牛乳汁中乳糖含量的试剂， 其特征在于， 所述试剂用于检测ARS ‑UCD1.2 版本NC_037340.1： 67219155的基因型， 其基因型为GA的奶牛个体乳汁中乳糖含量高于基因 型为GG的奶牛个 体乳汁中乳糖含量。 2.权利要求1所述的试剂在评估奶牛乳汁中乳糖含量或制备评估奶牛乳汁中乳糖含量 的试剂盒中的应用。 3.一种评估奶牛乳汁中乳糖含量的方法， 其特征在于， 检测ARS ‑UCD1.2版本NC_ 037340.1： 67219155的基因型， 其基因型为GA的奶牛个体乳汁中乳糖含量高于基因型为GG 的奶牛个 体乳汁中乳糖含量。 4.根据权利 要求3所述的方法， 其特征在于， 使用核苷酸序列如SEQ  ID NO:1～2所示的 引物检测ARS ‑UCD1.2版本NC_037340.1： 67219155的基因型， 其基因型为GA的奶牛个体乳汁 中乳糖含量高于基因型为G G的奶牛个 体乳汁中乳糖含量。 5.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于， 所述引物的PCR产物， 使用内切酶Afl  II进 行酶切， 酶切 后电泳有624bp一条条带的为 GG基因型个体， 有624bp、 234bp和390bp三条条带 的为GA基因型个 体， 有234bp和390bp两条 条带为AA基因型个 体。 6.一种评估奶牛乳汁中乳糖含量的试剂盒， 其特 征在于， 含有权利要求1所述的试剂。 7.根据权利要求5所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂为核苷酸序列如SEQ  ID NO:1 ～2所示的引物。 8.根据权利要求7 所述的试剂盒， 其特 征在于， 还 含有PCR试剂。 9.根据权利要求7或8所述的试剂盒， 其特征在于， 还含有内切酶Afl  II和10× rCutSmar t Buffer。 10.权利要求1所述试剂、 权利要求3所述方法、 或权利要求6所述试剂盒中的一种或几 种在奶牛乳汁中乳糖含量的分子 育种中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114990234 A 2一种评估奶牛乳汁 中乳糖含量的方 法 技术领域 [0001]本发明涉及奶牛的分子育种技术领域， 更具体地， 涉及一种评估奶牛乳汁中乳糖 含量的方法。 背景技术 [0002]由单个碱基发生转换、 颠换、 插入或缺失而导致D NA序列多态性即单核苷酸多态性 是基因多态性的主要来源。 SNP属第三代多态性标记， 是动物品系遗传变异的重要依据， 已 被广泛用于群体遗传学研究。 以凝胶电泳为主的经典SNP检测方法有限制性片段长度多态 性(restriction  fragment  length polymorphism,RF  LP)、 单链构象多态性(single   strand conformation  polymorphism,SSCP)、 变性梯度凝胶电泳(denatured  gradient   gel electrophoresis， DGGE)、 等位基因特异PCR(allele  specific  PCR， AS‑PCR)。 高通量 测序是近年来迅速发展起来的SNP检测法， 包括DNA测序法、 DNA芯片检测、 基于酶切的简化 基因组测序(Restriction ‑site Associated  DNA Sequence， RAD‑Seq)、 飞行质谱仪检测法 (Matrix ‑Assisted  Laser Desorption  Ionization  Time of Flight Mass  Spectrometry， MALDI ‑TOFMS)、 变性高效液相色谱法(denaturing  high performance   liquid chromatography， DHP  LC)等等。 对于一般的分子实验室来 说， 高通量测序法由于设 备昂贵、 所需技术熟 练而不利于在 普通分子实验室广泛展开研究。 传统的研究方法中， SS CP 法存在假阴性结果且操作复杂、 耗时冗 长， 并非理想SNP检测法。 [0003]奶牛生产性能测定(dairy  herd improvement， D HI)通过检测每头牛的生产性能， 把奶牛的数量性状科学化、 数据化， 群体与个体水平两者兼顾， 提高牧场管理水平， 提高经 济效应。 [0004]DHI报告大致分为营养指标、 繁殖指标、 牛奶质量及奶厅管理指标三个方面。 营养 指标包括日产奶量、 脂蛋比、 持续力、 高峰奶、 高峰日、 校正奶、 305天产奶量、 成年当量等。 繁 殖指标包括泌乳天数、 产犊间隔、 尿素氮等。 牛奶质量及奶厅管理指标包括体细胞数、 乳脂 率、 乳蛋白率、 隐形乳房炎比例等。 基础检测指标有日产奶量、 乳脂率、 乳蛋白率、 体细胞数、 乳糖率及总固体率。 [0005](1)日产奶量： 泌乳奶牛测试日的总产奶量， 单位为千克， 反应奶牛当前实际产奶 水平。 [0006](2)乳脂率： 牛奶中所含脂肪百分比。 [0007](3)乳蛋白率： 牛奶中所含蛋白百分比。 [0008](4)乳糖率： 牛奶中所含乳糖百分比。 [0009](5)体细胞数(SCC)： 每毫升牛奶中白细胞的含量， 包括淋巴细胞、 巨噬细胞、 多形 核噬中性细胞等， 是奶牛乳房健康与否的重要标志。 [0010]在自然界中， 乳糖仅存在于哺乳动 物的乳汁中， 是乳汁中三大营养物质之一， 牛奶 中有1/4总热量来自乳糖。 正常牛奶中含有4.6％ ‑5.0％乳糖， 其高低会影 响牛乳品质， 同时 参与维持肠道菌群的稳定， 同时也提示机体发生某些病变。 比如奶牛患有结核病、 乳房炎说　明　书 1/8 页 3 CN 114990234 A 3