(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210743696.1 (22)申请日 2022.06.27 (71)申请人 山东第一医科 大学附属省立医院 （山东省立医院） 地址 250000 山东省济南市经五纬七路324 号 (72)发明人 吕智美　王荣　胡锦绣　刘冰　 (74)专利代理 机构 北京慕达星云知识产权代理 事务所 (特殊普通合伙) 11465 专利代理师 孙光远 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12N 15/113(2010.01) C12N 15/11(2006.01)C12Q 1/6851(2018.01) A61K 45/00(2006.01) A61P 3/10(2006.01) A61P 13/12(2006.01) (54)发明名称 一种血浆 lncRNA检测试剂盒及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种血浆lncRNA检测试剂盒 及其应用。 lncRNA的核苷酸序列如SEQIDNo.1所 示。 通过RNA ‑seq筛选获得糖尿病肾病肾组织中 差异表达的lncRNA(ENST00000436340.2)标记 物， 通过功能实验证实lncRNA调控肾脏固有细胞 足细胞损伤。 用于检测临床血浆样本， 结果显示 糖尿病肾病患者血浆中lncRNA相对表达量显著 高于健康对照组人群 。 权利要求书1页 说明书12页 序列表1页 附图3页 CN 115044669 A 2022.09.13 CN 115044669 A 1.一种检测lncRNA表达量的试剂在制备用于诊断和/或评估糖尿病肾病的试剂盒中的 应用； 其特 征在于， 所述 lncRNA的核苷酸序列如SEQ  ID No.1所示。 2.如权利要求1所述的应用， 其特征在于， 检测lncRNA表达量的试剂包括扩增所述 lncRNA的核苷酸序列的引物， 扩增所述lncRNA的核苷酸序列的引物： ENST00000436340.2F 核苷酸序列如SEQ  ID No.2所示和ENST0 0000436340.2R如SEQ  ID No.3所示。 3.如权利 要求2所述的应用， 其特征在于， 所述表达量为基于lncRNA参比内参基因的相 对表达量。 4.如权利要求3所述的应用， 其特 征在于， 所述内参基因为β ‑actin基因。 5.一种基于lncRNA表达量用于诊断和/或评估糖尿病肾病的试剂盒， 其特征在于， 所述 试剂盒含有扩增lncRNA的核苷酸序列的引物： ENST00000436340.2F核苷酸序列如SEQ  ID  No.2所示和ENST0 0000436340.2R如SEQ  ID No.3所示。 6.一种糖尿病肾病预防和或治疗药物， 其特征在于， 针对lncRNA的siRNA、 shRNA 或启动 子产生抑制作用， 所述 lncRNA的核苷酸序列如SEQ  ID No.1所示。 7.如权利要求6所述的药物， 其特征在于， 所述siRNA的核苷酸序列如SEQ  ID No.4所 示。 8.如权利要求6所述的药物， 其特 征在于， 调控肾脏固有细胞足细胞损伤。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115044669 A 2一种血浆lncRNA检测试剂盒及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物医学技术技术领域， 更具体的说是涉及一种血浆lncRNA  检测试 剂盒及其应用。 背景技术 [0002]近年来， 全球糖尿病患病率急剧上升， 成为危害人类健康的一个公共卫生问题， 糖 尿病肾病(diabetic  kidney disease,DKD)是糖尿病最常见的并发症之一， 是导致终末期 肾脏病(end  stage renal disease,ESRD)的主要原因， 约占终末期肾衰竭的40％。 糖尿病 所导致的肾脏损害几乎可累及包括肾小球、 肾小管和肾间质在内的所有的肾脏结构， 并且 其进展速度之快远远高于非糖尿病肾病患者。 足细胞是位于肾小球基底膜外侧的终末分化 的上皮细胞， 是构成肾小球滤过屏障的关键部 分， 足细胞损伤是DKD发生 发展的关键起始事 件， 在DKD早期即可观测到足细胞结构和功能的改变。 早期准确诊断是DKD  治疗及延缓肾脏 病变进程的重中之重。 DKD诊断以及肾脏病变评估的金标准是肾活检穿刺， 存在有创、 费用 高、 技术要求高等局限性， 临床工作中亟需一个简单易行、 稳定可靠的鉴别方法。 [0003]长链非编 码RNA(long  non‑coding RNA,lncRNA)是一类转录本长度超过  200个核 苷酸的RNA分子的总称， 其缺乏编码蛋白的能力， 在基因表达、 细胞功能、 疾病的发生 发展等 方面发挥重要作用。 近年来， 随着微阵列芯片及高通量测序等技术的快速发展， lncRNA的生 物学特点及功能逐渐被认识， 越来越多的证据表明lncRNA的异常表达与肾脏疾病， 尤其是 糖尿病肾病的发生与发展密切相关。 血清血浆中的LncRNAs性质稳定、 含量丰富、 易于定量 检测， 且存在显著的疾病特异 性， 可以作为疾病的生物标志物。 临床上尚缺乏用于  DKD辅助 诊断的较为稳定的生物标志 物的报道。 [0004]因此， 拓宽该领域研究， 筛选DKD特异或异常表达的血清 血浆LncRNAs  作为生物标 志物， 以提高DKD诊断的灵敏性和预后判断的准确性， 明确其在DKD患者中的临床价值， 为糖 尿病肾病的临床治疗提供新的策略是本领域 技术人员亟需解决的问题。 发明内容 [0005]有鉴于此， 本发明提供了一种血浆lncRNA检测 试剂盒及其应用。 筛选获得糖尿病 肾病肾组织中差异表达的lncRNA， 发现ENST00000436340.2在糖尿病肾病肾组织中表达明 显增高， 主要分布于肾小球足细胞， 功能实验显示  ENST00000436340.2调控足细胞损 伤及 骨架重排。 同时ENST00000436340.2  在糖尿病肾病患者的血浆中表达明显上调， 且其表达 水平与蛋 白尿水平相关。 本发明发现的ENST00000436340.2作为全新的lncRNA分子标记物 在糖尿病肾病患者疾病进 展的预测、 评估方面具有一定的应用前 景。 [0006]为了实现上述目的， 本发明采用如下技 术方案： [0007]一种检测lnc RNA表达量的试剂在制备用于诊断和/或评估糖尿病肾病的试剂盒中 的应用； l ncRNA的核苷酸序列如SEQ  ID No.1所示。 [0008]优选的： 检测 lncRNA表达量的试剂包括扩增所述lncRNA的核苷酸序列的引物， 扩说　明　书 1/12 页 3 CN 115044669 A 3