(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210654426.3 (22)申请日 2022.06.10 (71)申请人 青海省农林科 学院 地址 810016 青海省西宁市宁大路25 3号 (72)发明人 张得芳　夏涛　王占林　 (74)专利代理 机构 北京纪凯知识产权代理有限 公司 11245 专利代理师 张立娜 (51)Int.Cl. C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) (54)发明名称 一种花叶海棠S SR标记的开发和应用 (57)摘要 本发明公开了一种花叶海棠SSR标记的开发 和应用。 本发明提供了用于检测花叶海棠的SSR 引物组合由18个引物对中的全部或部分组成， 所 述部分为2个以上17个以下。 18个引物对是从根 据花叶海棠转录组测序数据设计的10 730组引物 中筛选出来的。 实验证明本发明由这18个引物对 组成的SSR引物组合能有效的对花叶海棠群体进 行遗传多样性分析。 本发明对于构建花叶海棠遗 传图谱和种质鉴定具有重要意 义。 权利要求书2页 说明书9页 序列表6页 附图2页 CN 114836417 A 2022.08.02 CN 114836417 A 1.用于检测花叶海棠的SSR引物 组合， 由如下18个引物对中的全部或部分组成， 所述部 分为2个以上17个以下： 引物对1： 由SEQ  ID No.1和SEQ ID No.2所示的两条 单链DNA组成； 引物对2： 由SEQ  ID No.3和SEQ ID No.4所示的两条 单链DNA组成； 引物对3： 由SEQ  ID No.5和SEQ ID No.6所示的两条 单链DNA组成； 引物对4： 由SEQ  ID No.7和SEQ ID No.8所示的两条 单链DNA组成； 引物对5： 由SEQ  ID No.9和SEQ ID No.10所示的两条 单链DNA组成； 引物对6： 由SEQ  ID No.11和SEQ ID No.12所示的两条 单链DNA组成； 引物对7： 由SEQ  ID No.13和SEQ  ID No.14所示的两条 单链DNA组成； 引物对8： 由SEQ  ID No.15和SEQ  ID No.16所示的两条 单链DNA组成； 引物对9： 由SEQ  ID No.17和SEQ  ID No.18所示的两条 单链DNA组成； 引物对10： 由SEQ  ID No.19和SEQ  ID No.20所示的两条 单链DNA组成； 引物对11： 由SEQ ID No.21和SEQ  ID No.22所示的两条 单链DNA组成； 引物对12： 由SEQ  ID No.23和SEQ  ID No.24所示的两条 单链DNA组成； 引物对13： 由SEQ  ID No.25和SEQ  ID No.26所示的两条 单链DNA组成； 引物对14： 由SEQ  ID No.27和SEQ  ID No.28所示的两条 单链DNA组成； 引物对15： 由SEQ  ID No.29和SEQ ID No.30所示的两条 单链DNA组成； 引物对16： 由SEQ  ID No.31和SEQ  ID No.32所示的两条 单链DNA组成； 引物对17： 由SEQ  ID No.33和SEQ ID No.34所示的两条 单链DNA组成； 引物对18： 由SEQ  ID No.35和SEQ ID No.36所示的两条 单链DNA组成。 2.用于检测花叶海棠的S SR引物， 为权利要求1中所述18个引物对中的任意 一个。 3.用于检测花 叶海棠的SSR标记组合， 由18个SSR标记中的全部或部分组成， 所述部分 为2个以上17个以下； 所述18个SSR标记 为以花叶海棠基因组DNA为模板， 分别采用权利要求 1中所述18个引物对进行PCR扩增后所 得的18份扩增产物序列。 4.用于检测花叶海棠的S SR标记， 为权利要求3中所述18个S SR标记中的任意 一个。 5.用于检测花叶海棠的试剂盒， 含有权利要求1所述的SSR引物组合或权利要求2所述 的SSR引物。 6.权利要求1所述的SSR引物组合或权利要求2所述的SSR引物或权利要求3所述的SSR 标记组合或权利要求 4所述的S SR标记或权利要求5所述的试剂盒在 如下任一中的应用： (A1)对花叶海棠进行遗传多样性检测； (A2)对花叶海棠进行遗传图谱构建； (A3)对花叶海棠进行种质鉴定 。 7.一种对花叶海棠进行遗传多样性检测的方法， 包括如下步骤： (B1)分别以不同待测花叶海棠基因组DNA为模板， 采用权利要求1所述的SSR引物组合 或权利要求2所述的S SR引物进行PCR扩增， 得到扩增产物； (B2)将所述扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳， 根据 所述不同待测花叶海棠间的条带 多态性进行花叶海棠进行遗传多样性分析。 8.根据权利要求7所述的方法， 其特征在于： 步骤(B1)中， 进行所述PCR扩增时， 组成所 述引物对的两条单链DNA分子和作为模板的花叶海棠基因组DNA的配比为5pmol： 5pom：权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114836417 A 2125ng。 9.根据权利要求7或8所述的方法， 其特征在于： 步骤(B1)中， 进行所述PCR扩增时， 组成 所述引物对的两条单链DNA分子在反应体系中的终浓度均为0.5 μmol/L； 作为模板的花叶海 棠基因组DNA在反应 体系中的终浓度为12.5ng/ μL。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114836417 A 3