(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210669409.7 (22)申请日 2022.06.14 (71)申请人 厦门健康工程与创新研究院 地址 361000 福建省厦门市海沧区后祥路 71号厦门生物医药产业协同创新创业 中心23号楼第8层0 3单元 (72)发明人 汪大明　雷洋　白佳委　石岩　 陈斌　陈伟川　 (74)专利代理 机构 厦门仕诚联合知识产权代理 事务所(普通 合伙) 35227 专利代理师 程劲竹 (51)Int.Cl. C12Q 1/689(2018.01) C12Q 1/6816(2018.01) C12Q 1/6804(2018.01)C12N 15/11(2006.01) C12R 1/35(2006.01) (54)发明名称 一种肺炎支 原体核酸检测试剂盒及其应用 (57)摘要 本发明属于肺炎支原体检测技术领域， 具体 涉及一种肺炎支原体核酸检测试剂盒及其应用。 本申请公开的一种肺炎支原体核酸检测试剂盒 MP探针溶液、 MP荧光标记物质、 MP 核酸释放液、 MP 检测卡； 所述MP探针溶液包括MP探针1和MP探针 2， 具体的使用方法包括以下步骤： S1.将试剂盒 各组分拿出来， 检查是否完好无损； S2.将适量样 本10μL， 5μLMP探针溶液， 5μLMP荧光标记物 质， 50μLMP 核酸释放液均加入到0.5mL的离心管 中， 进行混匀； S3.将反应 管放入孵育区； S4.放入 荧光分析仪中进行结果读取； S5.5分钟后自动检 测并显示判读结果。 本发明所述的试剂盒， 相比 一般的荧光PCR和测序检测， 信号强度更 强， 特异 性更好， 灵敏度和PCR一 致。 权利要求书1页 说明书5页 序列表1页 CN 115058527 A 2022.09.16 CN 115058527 A 1.一种肺炎支 原体核酸检测试剂盒， 其特 征在于， 包括： MP探针溶 液、 MP荧光标记物质、 MP核酸释放液、 MP检测卡； 所述MP探针溶 液包括MP探针1和MP探针2； 所述MP探针1的DNA序列为： GGGGTAACGGCCTACCAAGGCAATGACGTGTAGCTATGCT 所述MP探针2的DNA序列为： CGTAGATATATGA AGGAACACCAGTGGCGAAGGCGAAAAC。 2.根据权利要求1所述的一种肺炎支原体核酸检测试剂盒， 其特征在于， 所述MP探针溶 液还包括5‑8％的RNAlater、 20 0‑500mg/mL的Rnsi n。 3.根据权利要求1所述的一种肺炎支原体核酸检测试剂盒， 其特征在于， 所述MP荧光标 记物质为包括0.2 ‑0.08mg/mL的DNA ‑RNA抗体、 0.2ug/mL ‑0.9ug/mL的荧 光微球。 4.根据权利要求1所述的一种肺炎支原体核酸检测试剂盒， 其特征在于， 所述MP核酸释 放液包括3mM ‑6mM的盐酸胍、 2mM ‑8mM的异硫氰酸胍、 5 ‑15％的TX ‑100、 0.05 ‑0.08％的Nacl、 20‑50ug/mL的蛋白酶K、 5 ‑10％的SDS。 5.根据权利要求1所述的一种肺炎支原体核酸检测试剂盒， 其特征在于， 所述MP检测卡 包括DNA‑RNA抗体、 NC膜。 6.一种肺炎支原体核酸检测试剂盒的应用， 其特征在于， 将权利要求1 ‑5任一项所述的 试剂盒用于检测肺炎支 原体核酸。 7.一种肺炎支原体核酸检测试剂盒的应用， 其特征在于， 试剂盒的使用方法包括以下 步骤： S1.将试剂盒各组分拿出来， 检查是否 完好无损； S2.将适量样本10μL， 5μL  MP探针溶液， 5μL  MP荧光标记物质， 50μLMP核酸释放液均加 入到0.5mL的离心管中， 进行混匀； S3.将反应管放入孵 育区， 仪器自动启动程序， 5 5℃孵育10分钟； S4.孵育结束后取以上反应溶液， 加入到MP检测卡样本孔中； 放入荧光分析仪中进行结 果读取； S5.5分钟后自动检测并显示判读结果。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115058527 A 2一种肺炎支原体核酸检测试剂盒及其应用 技术领域 [0001]本发明属于肺炎支原体检测技术领域， 具体涉及 一种肺炎支原体核酸检测试剂盒 及其应用。 背景技术 [0002]肺炎支原体(Mycoplasma  pneumoniae)主要通过呼吸道传播， 一年四季均可发病， 以夏秋季为主。 每年均会小流行， 2 ‑6年出现大流行。 肺炎导致死亡的病例约占5岁以下小儿 死亡总数的20％。 MP占各类肺炎总数的8.5％ ‑27.9％。 [0003]MP感染在小儿呼吸道感染中达30％以上。 现有的检测技术， 主要通过核酸扩增(荧 光PCR法)的原理进行核酸提取纯化， 需要的时间为1 ‑3小时， 且实用环境需要满足： 需三间 专业PCR实验室、 需大型中心实验室； 若污染， 长期无法使用， 还需要专门经过培训的技术人 员来进行操作； 一般情况 下， 只有大 型三甲医院中心实验室才 满足该条件； [0004]而且， 现有的检测方法， 还容易造成核酸扩增， 容易引起实验室阳性产物污染、 且 污染长期无法消除的风险， 核酸扩增(荧 光PCR法)需要 ‑20℃储存， 不易运输和储 存 发明内容 [0005]本发明的目的在于克服现有技术中存在的核酸扩增， 容易引起实验室阳性产物污 染、 且污染长期无法消除， 不容易运输和储存， 且使用环境要求高的技术问题， 提供一种肺 炎支原体核酸检测试剂盒及其应用。 [0006]为了实现本发明的上述目的， 本发明采用以下技 术方案， [0007]一种肺炎支 原体核酸检测试剂盒， 包括： [0008]MP探针溶 液、 MP荧光标记物质、 MP核酸释放液、 MP检测卡； [0009]所述MP探针溶 液包括MP探针1和MP探针2； [0010]所述MP探针1的DNA序列为： [0011]GGGGTAACGGCCTACCAAGGCAATGACGTGTAGCTATGCT [0012]所述MP探针2的DNA序列为： [0013]CGTAGATATATGA AGGAACACCAGTGGCGAAGGCGAAAAC [0014]进一步的， 所述MP探针溶 液还包括5％‑8％的RNAlater、 20 0/mL‑500/mL的Rnsi n； [0015]在本发明 中， MP探针1、 MP探针2和肺炎支 原体16S RNA靶核酸进行 结合。 [0016]RNAlater和Rnasin通过抑制环境溶液中RNA酶， 稳定核酸结构， 可以起到常温存放 RNA核酸探针的作用。 [0017]进一步的， 所述MP荧光标记物质为包括.02mg/mL ‑0.08mg/mL的DNA ‑RNA抗体、 0.2ug/mL ‑0.9ug/mL的荧 光微球； [0018]在本发明中， 如有靶核酸存在的情况： MP荧光标记物质和该MP  DNA‑RNA复合物相 结合。 如未有靶核酸存在的情况： 溶液中无MP  DNA‑RNA复合物， 则MP荧光标记物质不能和 DNA‑RNA复合物形成复合体。 具体 反应如下： 如果检测样 本中存在靶核酸， 则靶核酸RNA和MP说　明　书 1/5 页 3 CN 115058527 A 3