(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210707913.1 (22)申请日 2022.06.21 (71)申请人 华中农业大 学 地址 430070 湖北省武汉市洪山区狮子山 街1号 (72)发明人 苗义良　徐天　刘鑫　张霞　 (74)专利代理 机构 北京慕达星云知识产权代理 事务所 (特殊普通合伙) 11465 专利代理师 田立媛 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6879(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种用于鸵鸟性别鉴定的PCR引物及鉴定方 法 (57)摘要 本发明公开了一种用于鸵鸟性别鉴定的PCR 引物及鉴定方法， 属于生物技术领域。 本发明公 开的一种用于鸵鸟性别鉴定的PCR引物， 引物序 列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示。 通过本发明的 PCR引物进行PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳， 利用电 泳结果的条带数来确定新生鸵鸟的性别； 此方法 操作简单方便， 鉴定结果快速准确， 具有较高的 实际应用价 值。 权利要求书1页 说明书3页 序列表1页 附图1页 CN 114891898 A 2022.08.12 CN 114891898 A 1.一种用于鸵鸟性别鉴定的PCR引物， 其特 征在于， 所述引物序列如下： 正向引物： 5 ’ ‑TGCTGTAGCGT TGGTCAGTGTA ‑3’； SEQ ID NO.1； 反向引物： 5 ’ ‑GCCACTTTCAGTTACAGCCCAC‑3’； SEQ ID NO.2。 2.一种鉴定鸵鸟性别的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)提取待鉴定鸵鸟的基因 组DNA； (2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板， 利用权利要求1所述的用于鸵鸟性别鉴定的 PCR引物进行PCR扩增， 得到PCR产物； (3)利用凝胶电泳检测步骤(2)得到的PCR产物， 并观察电泳结果； 根据电泳结果鉴定鸵 鸟性别： 若电泳结果出现两条条带， 则鸵鸟鉴定为雌性； 若电泳结果仅出现一条条带， 则鸵 鸟鉴定为 雄性。 3.根据权利 要求2所述的一种鉴定鸵鸟性别的方法， 其特征在于， 步骤(2)所述PCR扩增 的反应体系为： 2 ×Taq PCR Mix 10μL， 10μmol/L正向和反向引物各0.6μL， 50 ‑100ng/μL   DNA模板2 μL， 超纯 水6.8 μL。 4.根据权利 要求2所述的一种鉴定鸵鸟性别的方法， 其特征在于， 步骤(2)所述PCR扩增 的反应条件为： 95℃预变性2min； 95℃变性30s， 56℃退火30s， 72℃延伸2min， 重复34个循 环。 5.根据权利要求2所述的一种鉴定鸵鸟性别的方法， 其特征在于， 步骤(3)所述根据电 泳结果鉴定鸵鸟性别具体为： 电泳结果鉴定为雌性鸵鸟的两条条带的大小分别为 1463bp和 1108bp； 鉴定为 雄性鸵鸟的一条 条带的大小为146 3bp。 6.权利要求1所述的一种用于鸵鸟性别鉴定的PCR引物在鉴定鸵鸟性别中的应用。 7.权利要求1所述的一种用于鸵鸟性别鉴定的PCR引物在鸵鸟养殖业中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114891898 A 2一种用于鸵鸟性别鉴定的PCR引物及鉴定方 法 技术领域 [0001]本发明涉及生物技术领域， 更具体 的说是涉及一种用于鸵鸟性别鉴定的PCR引物 及鉴定方法。 背景技术 [0002]鸵鸟的早期性别鉴定有利于鸵鸟雌雄分群饲养， 从而加快繁育进程、 提高雏鸟存 活率、 保证合适的雌雄比例。 然而雌雄鸵鸟在性成熟前的外形相同， 难以区分雌雄， 造成鸵 鸟早期分群饲养困难， 常引起交易双方 的经济纠纷。 因此鸵鸟早期性别鉴定具有重要的生 产经济价 值。 [0003]传统方法在鸵鸟4月龄时才能进行性别鉴定， 有经验者可在鸵鸟1月龄左右通过翻 肛检查法进 行鉴定。 这些方法受主观影响大、 过程繁琐， 导致效率低下且准确率不高。 此外， 鸵鸟与家禽基因组差异大， 针对家禽的PCR鉴定引物并不适用于鸵鸟。 基于此， 需要借助分 子生物技 术针对鸵鸟开发一种简单 方便、 快速准确的鸵鸟性别鉴定方法。 [0004]因此， 提供一种用于鸵鸟性别鉴定的PCR引物及鉴定方法是本领域技术人员亟需 解决的问题。 发明内容 [0005]有鉴于此， 本发明提供了一种用于鸵鸟性别鉴定的PCR引物及鉴定方法。 [0006]为了实现上述目的， 本发明采用如下技 术方案： [0007]一种用于鸵鸟性别鉴定的PCR引物， 所述引物序列如下： [0008]正向引物： 5 ’ ‑TGCTGTAGCGT TGGTCAGTGTA ‑3’； SEQ ID NO.1； [0009]反向引物： 5 ’ ‑GCCACTTTCAGTTACAGCCCAC‑3’； SEQ ID NO.2。 [0010]所述引物结合利用聚合酶链式反应(PCR)检测试剂， 能准确地鉴定出鸵鸟的性别， 可以将其应用到鸵鸟的繁 育生产中。 [0011]进一步， 一种鉴定鸵鸟性别的方法， 包括以下步骤： [0012](1)提取待鉴定鸵鸟的基因 组DNA； [0013]提取待测鸵鸟的基因组DNA可以按照本领域常规方法提取， 例如可以选用待鉴定 鸵鸟的毛囊、 血 液、 组织等进行基因 组DNA的提取； [0014](2)以步骤(1)提取的基因组D NA为模板， 利用所述的用于鸵鸟性别鉴定的PCR引物 进行PCR扩增， 得到PCR产物； [0015](3)利用凝胶电泳检测步骤(2)得到的PC R产物， 并观察电泳结果； 根据电泳结果鉴 定鸵鸟性别： 若电泳结果出现两条条带， 则鸵鸟鉴定为雌性； 若电泳结果仅出现一条条带， 则鸵鸟鉴定为 雄性。 [0016]进一步， 步骤(2)所述PCR扩增的反应体系为： 2 ×Taq PCR Mix 10 μL， 10 μmol/L正 向和反向引物各0.6 μL， 5 0‑100ng/ μL DNA模板2 μL， 超纯 水6.8 μL。 [0017]进一步， 步骤(2)所述PCR扩增的反应条件为： 95℃预变性2min； 95℃变性30s， 56℃说　明　书 1/3 页 3 CN 114891898 A 3