(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210748853.8 (22)申请日 2022.06.29 (71)申请人 宁波大学 地址 315211 浙江省宁波市江北区风 华路 818号 (72)发明人 马欣怡　孟小丹　赵一锴　姚群圣　 李乐怡　何翊瑜　 (74)专利代理 机构 宁波奥圣专利代理有限公司 33226 专利代理师 何仲 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种用于非小细胞肺癌早期诊断或检测的 ceRNA调控网络及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种用于非小细胞肺癌早期 诊断或检测的ceRNA调控网络及其应用， 特点是 为circRNA‑miRNA调控网络， circRNA基因为hsa_ circ_0008167和/或hsa_c irc_0003317， miRNA基 因为hsa‑miR‑4482‑3P和/或hsa ‑miR‑146a‑3p； ceRNA调控网络在制备非小细胞肺癌早期 诊断或 检测药物和试剂盒方面的应用； 药物或试剂盒在 肺癌早期诊 断或检测中促进hsa_circ_0008167 和/或hsa_circ_0003317的表达， 同时抑制hsa ‑ miR‑4482‑3p和/或hsa ‑miR‑146a‑3p基因的表 达； 优点是 特异性强、 灵敏度高。 权利要求书1页 说明书9页 序列表4页 附图3页 CN 115125304 A 2022.09.30 CN 115125304 A 1.一种用于非小细胞肺癌早期诊断或检测的ceRNA调控网络， 其特征在于： 所述的 ceRNA调控网络为circRNA ‑miRNA调控网络， 所述的circRNA基因为  hsa_circ_0008167和/ 或hsa_circ_0 003317， 所述的miRNA基因为hsa ‑miR‑4482‑3P和/或hsa ‑miR‑146a‑3p。 2.一种权利要求1所述的用于非小细胞肺癌早期诊断或检测的ceRNA调控网络在制备 非小细胞肺癌早期诊断或检测药物方面的应用。 3.根据权利要求2所述的用于非小细胞肺癌早期诊断或检测的ceRNA调控网络在制备 非小细胞肺癌早期诊断或检测药物方面的应用， 其特征在于： 所述的药物在肺癌早期诊断 或检测中促进hsa_cir c_000816 7和/或hsa_circ_0003317的表达， 同时抑制hsa ‑miR‑4482‑ 3p和/或hsa ‑miR‑146a‑3p基因的表达 。 4.一种权利要求1所述的用于非小细胞肺癌早期诊断或检测的ceRNA调控网络在制备 非小细胞肺癌早期诊断或检测试剂盒方面的应用。 5.根据权利要求4所述的用于非小细胞肺癌早期诊断或检测的ceRNA调控网络在制备 非小细胞肺癌早期诊断或检测试剂盒方面的应用， 其特征在于： 所述的试剂盒包括hsa_ circ_0008167荧光定量PCR特异性上游引物： 5 ’ ‑CATCTTGAGGGAAACAGCAAATG‑3’； hsa_circ_0 008167荧光定量PCR特异性下游引物： 5 ’ ‑TAAGGACTTGCAGGACCACC‑3’； hsa_circ_0 003317荧光定量PCR特异性上游引物： 5 ’ ‑CCCGGAGTTCTTGTATGTG G‑3’； hsa_circ_0 003317荧光定量PCR特异性下游引物： 5 ’ ‑CCGTAGCTTGGTAATTCTGACA‑3’； hsa‑miR‑4482‑3p特异性逆转录茎环引物： 5 ’ ‑CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTT GAGCGAGC CCC  ‑3’； hsa‑miR‑4482‑3p荧光定量PCR特异性上游引物： 5 ’ ‑TCGGCAGGTTTCTATTTCTCAG‑3’； hsa‑miR‑146a‑3p特异性逆转录茎环引物： 5 ’ ‑CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTT GAGCCTGAAGA‑3’； hsa‑miR‑146a‑3p荧光定量PCR特异性上游引物： 5 ’ ‑TCGGCAGGCCTCTGAAATTC‑3’。 6.根据权利要求5所述的用于非小细胞肺癌早期诊断或检测的ceRNA调控网络在制备 非小细胞肺癌早期诊断或检测试剂盒方面的应用， 其特征在于： 所述的hsa ‑miR‑4482‑3p 和/或hsa ‑miR‑146a‑3p基因表达量与非小细胞肺癌患病呈负相关， 所述的hsa_circ_ 0008167和/或hsa_circ_0 003317基因表达量与肺癌 患病风险呈正相关。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115125304 A 2一种用于非小细胞肺癌早期诊断或检测的ceRNA调控网 络及 其应用 技术领域 [0001]本发明涉及肺癌辅助诊断技术领域， 尤其是涉及 一种用于非小细胞肺癌早期诊断 或检测的ceRNA调控网络及其应用。 背景技术 [0002]众所周知， 肺癌是世界范围内癌症死亡的主要原因， 5年生存时间只有20% ‑30%。 非 小细胞肺癌(Non ‑small cell lung cancer, NSCLC)是肺癌最常见的组织学亚型(约占 85%)， 其中肺腺癌(lung  adenocarcinoma,  LUAD)和肺鳞癌(lung  squamous  cell  carcinoma,  LUSC)是两种主要亚型。 肺癌的高致死率和低生存率是由于大多数肺癌患者被 诊断为晚期， 从而失去了手术机会。 因此， 肺癌的早期 筛查对提高生存率和降低肺癌死亡率 至关重要。 [0003]事实上， 除了传统的肿瘤标志物， 如癌胚抗原 （CEA） 、 CA125、 神经元特异性烯醇化 酶 （NSE） 、 细胞角蛋 白19片段 （CYFRA21 ‑1） 等， 肺癌的非侵入性早期筛查主要基于低剂量CT 和液体活检生物标志物， 包括循环肿瘤细胞 （circulating  tumor cells， CTCs） 、  微小RNA （microRNAs） ， 长链非编码RNA （lncRNAs） ， 环 状RNA （circRNAs） 和外泌体 （exo somes） 。 在过去 的二十年中， 大量的文献表明循环miRNAs、 lncRNAs和circRNAs在非小细胞肺癌的早期发 现、 治疗管理和预后预测中具有广阔的潜力。 [0004]大量的研 究表明， 非编码RNA(如miRNAs、 lncRNAs和circRNAs)作为液体活检的非 侵袭性生物标志物， 在癌症的诊断和预后价值中发挥着重要作用。 特别 是在癌症中， ceRNA 模式极大地扩展了人类生理和病理条件下的基因调控网络。 最近， circRNA ‑miRNA‑mRNA信 号级联已被证实参与了肿瘤的发生和发展， 因此被认为具有作为一种新的肿瘤生物标志物 的潜力， 其与单纯的circRNA或miRNA相比， 具有更高的敏感性和特异性。 有重要研 究表明， circRNAs通过与MREs结合在NSCLC的发生和发展中发挥重要作用， 导致miRNAs对其靶肿瘤 相关基因的去抑制。 例如， 据 报道， 在NSCLC组织中， 高表达的circ ‑CPA4作为let ‑7 miRNA海 绵， 从而上调程序性细胞死亡配体 ‑1 （programmed  cell death ligand‑1， PD‑L1） ， 从而促 进细胞生长、 迁移和上皮 ‑间充质转化。 Zhu和同事在体外和体内鉴定了一种新型circRNA   hsa_circRNA _103809， 该RNA可以通过解除miR ‑377‑3p对天冬氨酸转氨 基酶1的抑制来增加 NSCLC细胞的顺铂耐药。 因此， 考虑到circRNA ‑miRNA‑mRNA信号级联对NSCLC的重要贡献， 我 们认为circRNA ‑miRNA调控轴可能反映一个更全面的调控网络， 从而对NSCLC有更高的敏感 性和特异性。 目前， 国内外鲜有关于 ceRNA网络分析与非小细胞肺癌相关的研究报道。 发明内容 [0005]本发明所要解决的技术问题是提供一种特异性强、 灵敏度高的用于非小细胞肺癌 早期诊断或检测的ceRNA调控 网络及其应用， 其中hsa ‑miR‑4482‑3p和hsa‑miR‑146a‑3p表 达量与非小细胞肺癌患病呈负相关， hsa_circ_000816 7和hsa_circ_0003317表达量与非小说　明　书 1/9 页 3 CN 115125304 A 3