(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210723795.3 (22)申请日 2022.06.23 (71)申请人 新疆农业大 学 地址 830052 新疆维吾尔自治区乌鲁 木齐 市沙依巴克区南昌路42号 (72)发明人 刘玲玲　刘武军　方超　曹行　 马海玉　陈斌　何海迎　 (74)专利代理 机构 西安鼎迈知识产权代理事务 所(普通合伙) 6126 3 专利代理师 刘喜保 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒及 其应用 (57)摘要 本发明公开了一种用于筛选新疆驴泌乳性 状的试剂盒及其应用， 通过选用新疆驴CA8基因 特定SNP位点作为分子标记物， 匹配特异性引物 及相适应的扩增体系， 制备获得用于筛选新疆驴 泌乳性状的试剂盒， 通过检测能够准确筛选获得 产奶量、 以及驴乳中非脂成分、 蛋白质含量相对 较高的个体， 根据相对应的基因型进行新疆驴优 良产奶形状个体的选育， 从而加快其育种进程， 促进驴产业的进一 步发展。 权利要求书1页 说明书6页 附图1页 CN 114934123 A 2022.08.23 CN 114934123 A 1.用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒， 其特征在于， 所述用于检测CA8基因的SNP位点 为g.89567442。 2.如权利 要求1所述的用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒， 其特征在于， CA8基因的SNP 位点g.89567442等位基型因包括G G、 GT和TT。 3.如权利要求1所述的用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂 盒， 其特征在于， 所述的试剂 盒 通过以下共建体系建成获得： (1)根据新疆驴CA8基因的SNP位 点g.89567442， 自行人工设计特异性引物； (2)PCR反应试剂： 2 ×KASP Mix、 上下游引物、 DNA模板和水。 4.如权利要求2所述用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂 盒， 其特征在于， 所述的特异性引 物序列如下 所示： 上游引物1： 5' ‑GAAGGTCGGAGTCAACGGATTGAAAAGGAGCAATACAATCACACTA ‑3'； 上游引物 2： 5'‑GAAGGTGACCAAGTTCATGCTA AAAGGAGCAATACAATCACACTC ‑3'； 下游引物1： 5' ‑CAACTCTTTTAGCCGATTATTTTATT‑3'。 5.如权利要求1所述的用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂 盒的应用， 其特征在于， 所述试 剂盒的应用中， 通过检测方法体现， 具体包括如下步骤： (1)利用装有枸橼酸钠抗凝剂的采血管， 活体采集新疆驴颈静脉血5ml， ‑20℃保存； 提 取基因组DNA，‑20℃保存待用； (2)采用步骤(1)总共提取获得的新疆驴基因组DNA进行， CA8基因PCR扩增， 根据设计的 引物， 利用权利要求1或2任意一项提供的试剂盒特异性扩增CA8基因； PCR反应体系为， 2 × KASP Mix 5 μL， 100 μM 上游引物1  0.015 μL， 100 μM上游引物2  0.015 μL， 100 μM 下游引物0.04 μ L上下游引物 各0.07 μL， 基因组D NA 2 μL， ddH2O补充至10 μL； 反应条件为， 94℃起始步骤， 1个 循环10mi n； 94℃10个 循环20s； 61℃45s； 94℃3 5个循环20s； 55℃20s； (3)基于步骤(2)中扩增获得的产物进行KASP 分型： 基于引物末端碱基的特异匹配来对 SNP分型， 利用Douglas平台， 对SNP进行双等 位基因判断， 从而 进行基因分型。 6.如权利要求2或5任意一项所述的用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒在产奶量高的 新疆驴的选 育中的应用。 7.如权利要求2或5任意一项所述的用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂 盒在非脂成分、 蛋 白质含量相对较高的新疆驴的选 育中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114934123 A 2一种用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒及其应用 技术领域 [0001]发明涉及动物遗传选育 的鉴定方法， 具体 的， 本发明涉及一种用于筛选新疆驴泌 乳性状的试剂盒及其应用的技 术领域。 背景技术 [0002]驴奶其实也是一种古老的产品， 希罗多德在公元前五世纪饮用它作为一种营养丰 富的饮料。 公元前2500年前的埃及， 也有在浮雕上记载关于驴奶的内容。 而在我国， 唐朝药 王孙思邈在 《千金食治》 中记载驴奶 “主大热， 黄疸， 止渴 ”。 明代医药学家李时珍在 《本草纲 目》 中也有记载过 “驴乳味甘、 冷利、 无毒、 主治小儿热急黄等， 多服便利、 疗 大热、 止消渴、 小 儿热急、 惊邪赤热， 小儿疾， 频热炊之， 治气邪、 解小儿热毒、 不生痘疹 ”。 由此不难看出， 驴奶 不仅有一定的历史， 还有一定的药用价 值。 [0003]但是， 目前未有乳用驴的专门化品种， 且生产用母驴的个体乳产量较低， 远低于牛 奶产量， 甚至低于马奶产量， 无法满足人们对驴奶的乳制品的需要。 新疆驴是一种 具有肉、 皮、 药、 乳、 役等多种 经济用途的畜种。 选育具有高产奶性能的乳用驴既可弥补驴奶的市场 空缺， 又可显著提升新疆驴的饲用价 值及经济价 值， 是促进驴产业发展的重要工作。 发明内容 [0004]针对现有技术中未见报道关于新疆驴泌乳性状筛选准确有效的分子标记以及未 见专门针对CA8基因在新 疆驴泌乳性状筛选中的SNP标记研究 的技术现状， 本发 明旨在提供 了含CA8基因用于提高新 疆驴泌乳性状的检测试剂盒， 利用新 疆驴血液样 本作为测试材料， 利用本发明检测试剂盒通过检测， 用于选育提高新疆驴泌乳性状为提高驴产奶量的选育 中， 期望选择与产奶 性状密切相关的DNA标记， 从而加快育种进程。 [0005]本发明提供用于筛选新疆驴泌乳性状 的试剂盒， 所述试剂盒中含有用于检测CA8 基因的SNP位 点为g.89567442。 [0006]本发明提供用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒， 所述试剂盒中CA8基因的S NP位点 g.89567442等位基型因包括G G、 GT和TT。 [0007]本发明提供用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒， 所述的试剂盒通过以下共建体系 建成获得： [0008](1)根据新疆驴CA8基因的SNP位 点g.89567442， 自行人工设计特异性引物； [0009](2)PCR反应试剂： 2 ×KASPMix、 上下游引物、 DNA模板和水。 [0010]所述的特异性引物序列如下 所示： [0011]上游引物1： 5' ‑GAAGGTCGGAGTCAACGGATTGAAAAGGAGCAATACAATCACACTA ‑3'； [0012]上游引物 2:5'‑GAAGGTGACCAAGTTCATGCTA AAAGGAGCAATACAATCACACTC ‑3'； [0013]下游引物1:5' ‑CAACTCTTTTAGCCGATTATTTTATT‑3'。 [0014]本发明还提供用于筛选新疆驴泌乳性状的试剂盒的应用， 所述试剂盒的应用中， 通过检测方法体现， 具体包括如下步骤：说　明　书 1/6 页 3 CN 114934123 A 3