(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210716891.5 (22)申请日 2022.06.23 (71)申请人 山东省动物疫病预防与控制中心 （山东省人畜共患病流调监测中心） 地址 250100 山东省济南市历城区唐冶西 路4566号 申请人 青岛动保国家工程 技术研究中心有 限公司 (72)发明人 王苗利　兰邹然　王艳玲　李云岗　 杨晓雪　袁炜亮　马慧玲　曹振山　 (74)专利代理 机构 济南泉城专利商标事务所 37218 专利代理师 张春连 (51)Int.Cl. C12Q 1/689(2018.01)C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种用于检测鼠鼻罗氏菌的特异 性引物、 探 针及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种用于检测鼠鼻罗氏菌的 特异性引物、 探针及其应用， 所述的上游引物和 下游引物的核苷酸序列分别如SEQ  ID NO.1和 SEQ ID NO.2所示， 探针的核苷酸序列如SEQ  ID  NO.3所示。 所述的特异性探针和引物 应用于制备 检测鼠鼻罗氏菌试剂盒， 实现对鼠鼻罗氏菌的特 异性检测。 本发 明首次提供了用于检测鼠鼻罗氏 菌的特异性引物、 探针， 用于试剂盒的制备和鼠 鼻 罗氏 菌的 检测 ， 在102copise/μL至 107copise/μL的区间内， 线性关系都比较好， 检 测方法简单、 特异性高。 权利要求书1页 说明书3页 序列表1页 附图1页 CN 114875163 A 2022.08.09 CN 114875163 A 1.一种用于检测鼠鼻罗氏菌的特异性引物、 探针， 其特征在于， 上游引物和下游引物的 核苷酸序列分别如SEQ  ID NO.1和SEQ  ID NO.2所示， 探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所 示。 2.根据权利要求1所述的用于检测鼠鼻罗氏菌的特异性引物、 探针， 其特征在于， 所述 的探针5’端标记荧 光基团， 3 ’端标记猝灭基团。 3.根据权利要求2所述的用于检测鼠鼻罗氏菌的特异性引物、 探针， 其特征在于， 所述 的荧光基团为FAM， 所述的猝灭基团为BHQ1。 4.一种权利1~3任一项所述的特异性引物、 探针在制备检测鼠鼻罗氏菌试剂盒中的应 用。 5.一种权利要求1~3任一项所述的特异性引物、 探针在检测鼠鼻罗氏菌中的应用。 6.根据权利 要求5所述的应用， 其特征在于， 检测鼠鼻罗氏菌中PCR扩增反应体系为20 μ L， 包括Premix  Ex TaqTM 10 μL， 上游引物0.2 μM、 1 μL， 下游引物0.2 μM、  1 μL， 探针0.1 μM、 0.5 μ L， 模板5 μL， ddH2O补足。 7.根据权利要求5所述的应用， 其特征在于， 检测鼠鼻罗氏菌中PCR扩增反应程序为95 ℃ 600s， 95℃ 15s， 60℃ 60s， 40个循环。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114875163 A 2一种用于 检测鼠鼻罗氏菌的特异性引物、 探针及其应用 技术领域 [0001]本发明属于生物检测技术领域， 具体涉及一种用于检测鼠鼻罗氏菌的特异性引 物、 探针及其应用。 背景技术 [0002]罗氏菌属 （Rothia） 是革兰氏阳性菌， 兼性厌氧， 不形成孢子， 无动力的细菌。 目前， 该菌属包含六个种， 分别为Rothi a aeria， Rothia amarae， Rothi a dentocariosa， Rothi a  mucilaginosa， Rothia  nasimurium和Rot hia terrae。 其中鼠鼻罗氏菌 （R.  nasimurium） 是 在2000年首次被报道且分离自健康的鼻腔。 [0003]近年来随着抗生素的滥用现象日益严重， 细菌耐药性问题已成为科学研究的热 点， 多重耐药菌的日益增多， 特别是 “超级细菌 ”的出现， 增加了治疗难度和医疗成本， 更使 人类面临的无药可救的尴尬局 面。 鼠鼻罗氏菌一直以来被认为是存在于人、 禽类和鼠上呼 吸道和肠道的共生菌群， 呈严重的泛耐药， 常与金黄 色葡萄球菌协同感染。 鼠鼻罗氏菌的多 重耐药性和协同感染性， 说明该菌具有传播风险， 影响公共健康， 需要引起重视。 但目前检 测鼠鼻罗氏菌方法相对复杂， 缺乏相对应的引物、 探针及试剂盒， 亟 待进一步解决。 发明内容 [0004]针对现有技术中鼠鼻罗氏菌检测方法复杂， 缺乏相对应 的引物、 探针及试剂盒的 问题， 本发 明提供了一种用于检测鼠鼻罗氏菌的特异 性引物、 探针及其应用， 用于检测鼠鼻 罗氏菌， 特异性高， 方法简单。 [0005]本发明通过以下技 术方案实现： 一种用于检测鼠鼻罗氏菌 的特异性引 物、 探针， 上游引 物和下游引 物的核苷酸序 列分别如SEQ  ID NO.1和SEQ  ID NO.2所示， 探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示。 [0006]进一步地， 所述探针的5 ’端标记荧 光基团， 3 ’端标记猝灭基团。 [0007]进一步地， 所述的荧 光基团为FAM， 所述的猝灭基团为BHQ1。 [0008]本发明中， 所述的特异性引物、 探针在制备检测鼠鼻罗氏菌试剂盒中的应用。 [0009]本发明中， 所述的特异性引物、 探针在检测鼠鼻罗氏菌中的应用。 [0010]进一步地， 检测鼠鼻罗氏菌中PCR扩增反应体系为20 μL， 包括P remix Ex TaqTM 10 μ L， 上游引物0.2 μM、 1 μL， 下游引物0.2 μM、 1 μL， 探针0.1 μM、 0.5 μL， 模板 5 μL， ddH2O补足。 [0011]进一步地， 检测鼠鼻罗氏菌中PCR扩增反应程序为95℃  600s， 95℃  15s， 60℃   60s， 40个循环。 [0012]有益效果 本发明首次提供了用于检测鼠鼻罗氏菌 的特异性引 物、 探针， 可用于试剂盒的制 备和鼠鼻罗氏菌的检测， 在102copise/ μL至107copise/ μL的区间内， 线性关系都比较好， 检 测方法简单、 特异性高。说　明　书 1/3 页 3 CN 114875163 A 3