(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210616039.0 (22)申请日 2022.05.31 (71)申请人 宁波大学 地址 315211 浙江省宁波市江北区风 华路 818号 (72)发明人 蓝航镇　徐好仪　潘道东　吴振　 (74)专利代理 机构 宁波诚源专利事务所有限公 司 33102 专利代理师 王莹　袁翊朦 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) G01N 33/558(2006.01) G01N 33/58(2006.01) (54)发明名称 一种用于检测鸡肉掺假的试剂盒及检测方 法 (57)摘要 本发明公开了一种用于检测鸡肉掺假的试 剂盒， 包括用于扩增鸡Cytb基因的正向引物PF2 和反向引物PR2， 具有检测成本低、 操作简单、 特 异性好、 灵敏度高、 可视化程度高的优点。 本发明 还公开一种应用有用于检测鸡肉掺假试剂盒的 检测方法， 同样具有检测成本低、 操作 简单、 特异 性好、 灵敏度高、 可视化程度高的优点， 可以用于 肉制品中鸡源性成分掺 假的检测。 权利要求书1页 说明书5页 序列表1页 附图2页 CN 114752691 A 2022.07.15 CN 114752691 A 1.一种用于检测鸡肉掺假的试剂盒， 其特征在于： 包括用于扩增鸡Cytb基因的正向引 物PF2和反向引物PR2， 正向引物PF2： 5 ’ ‑Biotin‑CATGACCCAAATCCTCACCG‑3’； 反向引物PR2： 5 ’ ‑Fam‑TCCTTGAAGGTAGGACCGTA‑3’。 2.根据权利要求1所述的用于检测鸡肉掺假试剂 盒， 其特征在于： 所述试剂 盒还包括胶 体金试纸， 该胶体金试纸包括PVC背板、 设置在PVC背板上且依次沿样品流动方向从下往上 分布、 且依次部分重 叠的样品垫、 金 标垫、 硝酸纤维素膜、 吸水垫； 所述金标垫上标记有胶体金颗粒和胶体金蛋白的复合物； 所述硝酸纤维素膜上沿样品流动方向分别标记有兔抗Fam抗体的检测线T线、 标记有 BSA‑Biotin的质控线C线。 3.一种应用有如权利要求2所述的用于检测鸡肉掺假试剂 盒的检测方法， 其特征在于： 包括 步骤S1、 提取待检测样品的DNA， 并采用所述 正向引物PF2和反向引物PR2进行PCR扩增； 步骤S2、 制备胶体金 试纸； 步骤S3、 将所述步骤S1扩增后的PCR产物滴在胶体金试纸上， 将胶体金试纸的样品垫进 入展开液中， 5mi n内观察； 如果检测线和质控线 同时显红色， 则表示胶体金试纸有效， 并且检测到样品含有鸡源 性成分； 如果质控线为红色， 检测线为无色， 则表示胶体金试纸有效， 并且未检测到样品含有鸡 源性成分。 4.根据权利要求3所述的检测方法， 其特 征在于： 所述 步骤S2包括 步骤S2‑1、 在金标垫加入金 标垫处理液后， 于40℃干燥1h； 步骤S2‑2、 再在金 标垫上加入胶体金蛋白溶 液， 于40℃干燥1h； 步骤S2‑3、 将1mg/mL的兔抗Fam抗体划在硝酸纤维素膜 表面作为检测线 T线； 步骤S2‑4、 将1mg/mL的BSA ‑Biotin划在硝酸纤维素膜 表面作为质控线C线。 5.根据权利要求4所述的检测方法， 其特征在于： 所述步骤S2 ‑1中， 所述金标垫处理液 包括BSA、 海藻糖、 蔗糖、 吐温 ‑20、 Triti onX‑100； 其中， BSA的质量分数为5％， 海藻糖的质量分数为10％， 蔗糖的质量分数为2％、 吐温 ‑ 20的质量分数为2％、 Triti onX‑100的质量分数为2％。 6.根据权利 要求3所述的检测方法， 其特征在于： 在所述步骤S3中， 扩增后的PCR产物取 15 μL滴在胶体金试纸的样品垫上。 7.根据权利 要求3所述的检测方法， 其特征在于： 在所述步骤S3中， 所述展开液由0.01M   PBS组成， pH为7.4。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114752691 A 2一种用于 检测鸡肉掺 假的试剂盒及检测方 法 技术领域 [0001]本发明涉及鸡肉掺假检测领域， 具体涉及 一种用于检测 鸡肉掺假的试剂盒及检测 方法。 背景技术 [0002]肉类产品不仅是人们餐桌上的重要组成部分， 也是人体 的重要营养来源。 随着人 民生活水平以及生活质量的日益提高， 人们对于食品安全问题也越来越重视。 许多无良商 家在高成本的牛羊肉中掺入成本较低的鸡肉等以获取高额利益， 这一现象给消费者和相关 食品安全监督部门造成了严重的困扰。 因此为了维护消费者的合法权益， 保护消费者的生 命健康， 维持市场经济可持续发展， 我们需要研发出一种简单、 低 成本、 特异性高的肉制品 掺假现场检测方法。 [0003]肉制品作为最具掺假风险的食品之一， 其检测手段主要是基于蛋白质水平和核酸 水平。 蛋白质水平的检测方法主要包括 酶联免疫法、 光谱、 质谱、 色谱和蛋白电泳等。 但蛋白 质不稳定容易在预处理和加工过程中变性， 导致实验结果重复性差且灵敏度低。 核酸扩增 是分子生物学研究中一个重要的工具， 其极高的稳定性和扩增能力完美的克服了蛋白质分 析的局限性， 使其更适合于鉴定掺假的肉类产品。 常用的基于核酸的掺假检测方法包括聚 合酶链式反应( PCR)、 实时荧光PCR、 数字PCR、 交叉引物扩增(CPA)、 循环介导的等温扩增 (LAMP)和重组酶聚合酶扩增(RPA)。 PCR被认为是鉴定掺假肉制品的"黄金标准"， 并已成功 用于鉴定牛肉、 羊肉、 猪肉和鸡肉。 [0004]而PCR扩增产物的分析技术， 例如琼脂糖凝胶电泳法， 需要配置凝胶电泳仪而成本 较高、 操作相对比较复杂、 检测时间相对较长， 又如荧光定量PCR技术需要昂贵的仪器而成 本较高、 操作相对复杂、 检测时间相对较长 。 [0005]因此， 可继续改进。 发明内容 [0006]本发明所要解决的第一个技术问题是针对现有技术的现状， 提供一种 成本较低、 操作简单 方便、 检测时间较短的用于检测鸡肉掺 假的试剂盒。 [0007]本发明所要解决的第一个技术问题是针对现有技术的现状， 提供一种应用有上述 的用于检测鸡肉掺 假试剂盒的检测方法。 [0008]本发明解决上述第一个技术问题所采用的技术方案为： 一种用于检测 鸡肉掺假试 剂盒， 其特 征在于： 包括用于扩增鸡Cytb基因的正向引物PF2和反向引物PR2， [0009]正向引物PF2： 5 ’ ‑Biotin‑CATGACCCAAATCCTCACCG‑3’； [0010]反向引物PR2： 5 ’ ‑Fam‑TCCTTGAAGGTAGGACCGTA‑3’。 [0011]胶体金试纸的结构具体是， 所述试剂盒还包括胶体金试纸， 该胶 体金试纸包括PVC 背板、 设置在PVC背板上且依次沿样品流动方向从下往上分布且依次部 分重叠的样品垫、 金 标垫、 硝酸纤维素膜、 吸水垫；说　明　书 1/5 页 3 CN 114752691 A 3