(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210661530.5 (22)申请日 2022.06.13 (71)申请人 郑州大学 地址 450000 河南省郑州市高新 技术开发 区科学大道100号 申请人 河南申友医学检验所有限公司 (72)发明人 郭建成　占闽宁　尚文俊　张静　 冯帅升　朱丹丹　孙晓晓　张悦　 史健翔　许红恩　刘海芳　薛夏　 王丙顺　柳丹华　秦亚平　薛滨雨　 (74)专利代理 机构 北京博识智 信专利代理事务 所(普通合伙) 16067 专利代理师 翁梅玲 (51)Int.Cl. C12Q 1/6881(2018.01)C12Q 1/6869(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种用于HLA-DQA1基因分型的引物组和分 析方法 (57)摘要 本发明公开了一种用于HLA ‑DQA1基因分型 的引物组和分析方法， 引物组包含两种上游引物 和四种下游引物的混合物。 分型方法包括基因组 DNA提取、 基因扩增、 基因扩增产物纯化、 基因扩 增产物打断、 文库构建、 二代测序、 基因分型。 本 发明可以有效提高检测效率， 提高基因分型的准 确率， 同时降低检测成本、 简化操作步骤， 可以广 泛应用在HLA基因分型和检测领域。 权利要求书2页 说明书6页 附图1页 CN 115354072 A 2022.11.18 CN 115354072 A 1.一种用于HLA ‑DQA1基因分型的引物组， 其特征在于， 所述HLA ‑DQA1基因分型使用的 上游引物组是包含两种引物的混合物， 下游引物组是包含四种引物的混合物； 所述上、 下游 引物组序列具体为： 上游引物： HLA‑DQA1‑1F： 5’ ‑AGGTAGGTGGGGTCAGCTTAACATTT‑3’ HLA‑DQA1‑2F： 5’ ‑AGGTAGGTGGGGTCAACTTAACATTT‑3’； 下游引物： HLA‑DQA1‑1R： 5’ ‑TGGCTTCTGTGTTACTGGACATGAA‑3’ HLA‑DQA1‑2R： 5’ ‑TGGCTTCTGTGTTACTGGATATGAC ‑3’ HLA‑DQA1‑3R： 5’ ‑TGGCTTCTGTGTTACTGGACATGAC ‑3’ HLA‑DQA1‑4R： 5’ ‑TGGCTTCTGTGTTACTGGATATGAA‑3’。 2.一种使用权利 要求1所述的HLA ‑DQA1基因分型的引物组的分析方法， 其特征在于， 包 括如下步骤： S1.基因组DNA提取 使用核酸 提取试剂盒提取待测样本的基因 组DNA， 并进行浓度及纯度测定； S2.基因扩增 使用特异性引物及其他相关试剂配置扩增反应体系， 按照 一定扩增程序对基因 的目的 区域进行PCR扩增； S3.基因扩增产物纯化 采用DNA产物纯化试剂盒对扩增得到的目标基因片段进行纯化， 保证片段的浓度和纯 度； S4.基因扩增产物打断 使用超声 波打断的方法打断得到的DNA片段， 使DNA均匀片段化； S5.文库构建 使用建库试剂盒对片段化的DNA进行末端修饰和文库 富集； 制备完成的DNA文库使用生 物分析仪进行长度分布和浓度的检测； S6.二代测序 将所制备文库进行二代测序； S7.基因分型 将测序所 得的序列 与HLA基因数据库进行比对， 确定 HLA‑DQA1的基因型。 3.根据权利要求2所述的一种用于HLA ‑DQA1基因分型的引物组的分析方法， 其特征在 于， 步骤S2中所述反应体系为： 2x  PCR Master Mix 12.5μL， dNTP  0.5μL， Phanta  Max  Super‑Fidelity  DNA Polymer 0.5μL， 上游引物0.5μL， 下游引物0.5μL， 模板DNA  1μL， ddH2O9.5 μL。 4.根据权利要求2所述的一种用于HLA ‑DQA1基因分型的引物组的分析方法， 其特征在 于， 步骤S2中所述PCR扩增程序为：权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115354072 A 25.根据权利要求2所述的一种用于HLA ‑DQA1基因分型的引物组的分析方法， 其特征在 于， 步骤S4中所述产物打断后的片段长度分布在10 0‑400bp之间， 主峰180 ‑220bp。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115354072 A 3