(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210707439.2 (22)申请日 2022.06.21 (83)生物保 藏信息 CGMCC No.45148 202 2.04.21 (71)申请人 泰州博莱得利生物科技有限公司 地址 225300 江苏省泰州市医药高新区檀 香路66号 申请人 中瑞动检 （北京） 生物技 术有限公司 　 北京博莱得利生物技 术有限责任公 司 (72)发明人 张中华　石文达　王金明　董昊　 纪志辉　赵晓　苏煜智　司永芳　 王宏伟　(74)专利代理 机构 北京国贝知识产权代理有限 公司 11698 专利代理师 于倩 (51)Int.Cl. C07K 16/10(2006.01) C12N 15/13(2006.01) C12N 5/20(2006.01) C12Q 1/70(2006.01) C12N 15/11(2006.01) A61K 39/42(2006.01) A61P 31/14(2006.01) (54)发明名称 一种猫杯状病毒的单 克隆抗体及其应用 (57)摘要 本发明提供了一种具有特异性结合猫杯状 病毒的单克隆抗体及编码该抗体的核苷酸分子。 进一步， 本发 明公开了一种产生上述抗体的杂交 瘤细胞株， 该杂交瘤细胞株经连续传代抗体分泌 稳定， 且长期保存后抗体分泌稳定。 本发明还提 供了一种基于所述猫杯状病毒的单克隆抗体在 药物中的应用。 所述用于治疗猫杯状病毒感染药 物为注射液。 基于该抗体的抗猫杯状病毒药物能 起到明显缓解感染的效果， 经治疗病猫食欲恢 复、 无可见眼鼻分泌物、 口腔溃疡创口基 本愈合。 权利要求书1页 说明书9页 序列表8页 附图1页 CN 115141273 A 2022.10.04 CN 115141273 A 1.一种猫杯状病毒的单克隆抗体， 其特征在于， 重链CDR区1 ‑3的氨基酸序列分别如SEQ   ID NO.1、 2和3所示； 和/或其轻链CDR区1 ‑3的氨基酸序列分别如SEQ  ID NO.4、 5和6所示。 2.一种猫杯状病毒的单克隆抗体， 其特征在于， 包含具有与SEQ  ID NO.15氨基酸序列 至少90％序列同一性的重链可变区序列， 和/或包含具有与SEQ  ID NO.16氨基酸序列至少 90％序列同一 性的轻链可变区序列。 3.根据权利 要求2所述的猫杯状病毒的单克隆抗体， 其中， 包含具有与SEQ  ID NO.15氨 基酸序列至少95％， 优选地， 至少98％序列同一性的重链可变区序列， 和/或包含 具有与SEQ   ID NO.16氨基酸序列至少95％， 优选地， 至少98％序列同一 性的轻链可变区序列。 4.一种多核苷酸分子， 其特征在于， 其重链CDR区1 ‑3的核苷酸序列分别如SEQ  ID  NO.17、 18和19所示， 或其反向互补序列； 和/或其轻链CDR区1 ‑3的核苷酸序列分别如SEQ  ID  NO.20、 21和2 2所示， 或其反向互补序列。 5.一种多核苷酸分子， 其特征在于， 其包含具有与SEQ  ID NO.31或其反向互补序列至 少90％序列同一性的重链可变区序列， 和/或包含具有与SEQ  ID NO.32或其反向互补序列 至少90％序列同一 性的轻链可变区序列。 6.根据权利 要求5所述的多核苷酸分子， 其特征在于， 其包含具有与SEQ  ID NO.31或其 反向互补序列至少95％， 优选地， 至少98 ％序列同一性的重链可变区序列； 和 /或包含具有 与SEQ ID NO.32或其反向互补序列至少95％， 优选地， 至少98％序列同一性的轻链可变区 序列。 7.一种多核苷酸分子， 包括编码权利要求1 ‑3任一项所述的单克隆抗体或其功能性片 段的多核苷酸。 8.一种含有权利要求 4‑7任一项所述的多 核苷酸分子的重组宿主细胞。 9.一种杂交瘤 细胞株， 保藏编号 为CGMCC NO.45148。 10.一种权利要求1 ‑3任一项所述单克隆抗体在制备治疗猫杯状病毒感染药物中的应 用。 11.根据权利要求10所述的单克隆抗体在制备治疗猫杯状病毒感染药物中的应用， 其 中， 所述药物为注射剂。 12.一种用于检测猫杯状病毒引物， 其特征在于， 包括正向引物以及反向引物， 所述正 向引物的核苷酸序列如SEQ  ID No.33所示， 所述反向引物的核苷酸序列如SEQ  ID No.34所 示。 13.根据权利要求12所述的用于检测猫杯状病 毒引物在制备猫杯状病 毒检测制 剂中的 应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115141273 A 2一种猫杯状病毒 的单克隆抗体及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及 抗体及其在制药领域中的应用， 特别是涉及 一种猫杯状病毒单克隆抗 体， 编码抗体的多核苷酸及其宿主细胞， 以及单克隆抗体在制备治疗猫杯状病毒感染药物 中的应用。 背景技术 [0002]猫杯状病毒(Feline  Calicivirus， FCV)属于杯状病毒科水疱疹病毒属成员， 是感 染家猫及野生猫科动物的常见病原体之一。 FCV为单股、 正链的RNA病毒， 无囊膜， 直径为35 ～39nm， 衣壳由32个中间凹陷的杯状颗粒组成， 这些颗粒由90个壳粒以T＝3二十面体对称 形式组成。 基因组大小约 为7.7kb， 共有三个开放阅读框(open  reading frame， ORF)， ORF1 编码非结构蛋 白， 包括病毒蛋 白酶、 RNA依赖性RNA聚合酶， ORF2大小约2.0kb， 主要编码FCV 的结构蛋白即衣壳 蛋白， ORF3编码次要结构蛋白。 [0003]自1957年Fastier从新西兰的一只猫中首次分离得到FCV， 又相继在狮子、 老虎及 猎豹等猫科动物体内分离到该病毒， 且在欧洲、 美洲、 亚洲都有发现， 目前已呈世界性分布。 并且2009 年Martino等人从患有肠炎的幼犬肛拭子中也分离到该病毒， 表明FCV具有跨种间 传播的风险。 FCV在猫群中高度流行， 引起一种高度传染性的呼吸道疾病， 感染后会引起发 热、 打喷嚏、 鼻炎、 结膜炎、 口腔溃疡等症状。 多数临床健康猫可长期向外排毒， 该病发病率 较高， 死亡率较低。 目前， 疫苗接种是防治本病最有效方法， 但现有疫苗的保护效果并不理 想， 对猫及猫科 珍稀野生动物的生存和健康造成了极大的威胁。 [0004]目前还没有治疗FCV感染的特异性药物， 临床上主要以对症治疗和支持治疗相结 合的方法。 亟需一种对FCV治疗具有特异性高的药物， 用于治疗因FCV引起的猫杯状病毒病。 发明内容 [0005]为解决上述不足， 本发明提供了猫杯状病毒单克隆抗体及其制 备方法， 以及在制 备用于治疗猫杯状病毒感染药物中的应用。 [0006]本发明首先提供了一种猫杯状病毒的单克隆抗体， 其重链CDR 区1‑3的氨基酸序列 分别如SEQ  ID NO.1、 2和3 所示； 其轻链CDR区1 ‑3的氨基酸序列分别如SEQ  ID NO.4、 5和6 所 示。 所述猫杯状病毒的单克隆抗体其重链FR区1 ‑4的氨基酸序列分别如SEQ  ID NO.7、 8、 9和 10所示； 其轻链FR区1 ‑4的氨基酸序列分别如SEQ  ID NO.11、 12、 13和14所示。 [0007]本发明中， 所述猫杯状病毒的单克隆抗体包括重链和轻链， 每条重链包括重链可 变区(VH)和重链恒定区(CH)。 每条轻链包括轻链可变 区(VL)和轻链恒定区(CL)。 VH区和VL 区可进一步分为互补决定区(CDR)， 每两个互补决定区之间插有框架区(FR)。 每个VH和VL包 括三个CDR和四个F R， 从氨基末端到羧基末端的依次连接顺序为： F R1、 CDR1、 FR2、 CDR2、 FR3、 CDR3、 FR4。 [0008]更具体地， 本发明所述的单克隆抗体， 其重链可变区的氨基酸序列如SEQ  ID  NO.15所示； 其轻链可变区的氨基酸序列如SEQ  ID NO.16所示。说　明　书 1/9 页 3 CN 115141273 A 3