(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210711368.3 (22)申请日 2022.06.22 (71)申请人 湖南大学 地址 410082 湖南省长 沙市岳麓区麓山 南 路2号 (72)发明人 谭蔚泓　叶茂　彭天欢　李小东　 (74)专利代理 机构 长沙市融智专利事务所(普 通合伙) 43114 专利代理师 袁靖 (51)Int.Cl. C12N 15/115(2010.01) C12N 15/11(2006.01) C12N 5/078(2010.01) (54)发明名称 一种特异性识别并结合循环胎儿有核红细 胞的核酸 适体、 互补序列及它 们的应用 (57)摘要 本发明公开了一种特异性识别并结合循环 胎儿有核红细胞的核酸适体、 互补序列及它们的 应用； 利用核酸适体与外周血中胎儿细胞的特异 性结合实现稀有细胞的分离富集。 本发明方法具 有以下显著优势： 1)发展了新型胎儿细胞捕获及 无损释放方法， 具有重要临床意义； 2)基于临床 样本筛选的特异性探针， 具有更强的临床适用 性； 3)核酸适体在识别过程中对循环胎儿有核红 细胞特异性强、 亲和 力高， 准确性和灵敏度好； 4) 核酸适体探针生产制备简单、 重复性好， 稳定性 好、 易存储运输。 为产前疾病筛查与诊断提供了 新的方法与途径。 权利要求书2页 说明书9页 序列表2页 附图5页 CN 115109780 A 2022.09.27 CN 115109780 A 1.一种特异性识别并结合循环胎儿有核红细胞的核酸适体， 其特征在于， 能特异性识 别并结合孕妇外周血中的循环胎儿有 核红细胞， 所述的核酸 适体LXD‑11序列如下： 5’ ‑ATCCAGAGTGACGCAGCAAAGTCGTCTTTGCCAAATACCGGTCTGTCGGTGGGTATTGTGGACACGGTG GCTTAGT‑3’。 2.根据权利要求1所述的特异性识别并结合循环胎儿有核红细胞的核酸适体， 其特征 在于， 通过对所述的核酸适体LXD ‑11部分增加或者删减碱基， 或者碱基替换获得具有相同 功能的核酸 适体LXD‑11b序列如下： 5’ ‑TCCAGAGTGACGCAGCAAAGTCGTCTTTGCCAAATACCGGTCTGTCGGTGGGTATTGTGGACACTCTG GC‑3’。 3.根据权利要求1或2所述的特异性识别并结合循环胎儿有核红细胞的核酸适体， 其特 征在于， 所述的核酸适体标记上荧光物质、 放射性物质、 治疗性物质、 生物素、 或酶标记物 质， 得到与所述核酸 适体具有相同功能的核酸 适体衍生物。 4.权利要求1 ‑3任一项所述的核酸适体在制备特异性识别并结合循环胎儿有核红细胞 制剂中的应用。 5.一种基于核酸适体的循环胎儿有核红细胞识别与富集方法， 其特征在于， 所述核酸 适体包括权利要求1 ‑3任一项所述的核酸 适体。 6.一种基于互补核酸序列无损释放循环胎儿有 核红细胞的方法， 其特 征在于， 利用互补释放序列释放被权利要求1 ‑3任一项所述的核酸适体识别与富集的循环胎儿 有核红细胞， 针对所述的核酸 适体LXD‑11的互补释放序列RA1和/或RA 2如下： RA1： 5’ ‑ACTAAGCCACCGTGTCCACAATACCCACCGACAGAC CGGTAT‑3’。 RA2： 5’ ‑ACCGGTATTTGGCAAAGACGACT TTGCTGCGTCACTCTG GAT‑3’； 针对所述的核酸 适体LXD‑11b的互补释放序列RA3和/或RA4如下： RA3： 5’ ‑GCCAGAGTGTC CACAATACCCACCGACAGAC CGGTATTTGGC‑3’； RA4： 5’ ‑GACCGGTATTTGGCAAAGACGACT TTGCTGCGTCACTCTG GA‑3’。 7.权利要求6中所述的互补释放序列在制备被权利要求1 ‑3任一项所述的核酸适体识 别与富集的循环胎儿有 核红细胞 无损释放制剂中的应用。 8.一种无损释放循环胎儿有核红细胞的互补释放序列， 其特征在于， 所述的互补释放 序列RA1和/或RA 2如下： RA1： 5’ ‑ACTAAGCCACCGTGTCCACAATACCCACCGACAGAC CGGTAT‑3’； RA2： 5’ ‑ACCGGTATTTGGCAAAGACGACT TTGCTGCGTCACTCTG GAT‑3’； 互补释放序列RA3和/或RA4如下： RA3： 5’ ‑GCCAGAGTGTC CACAATACCCACCGACAGAC CGGTATTTGGC‑3’； RA4： 5’ ‑GACCGGTATTTGGCAAAGACGACT TTGCTGCGTCACTCTG GA‑3’。 9.一种无损释放循环胎儿有核红细胞的制剂， 其特征在于， 包括所述的互补释放序列 RA1和/或RA 2如下： RA1： 5’ ‑ACTAAGCCACCGTGTCCACAATACCCACCGACAGAC CGGTAT‑3’； RA2： 5’ ‑ACCGGTATTTGGCAAAGACGACT TTGCTGCGTCACTCTG GAT‑3’； 互补释放序列RA3和/或RA4如下： RA3： 5’ ‑GCCAGAGTGTC CACAATACCCACCGACAGAC CGGTATTTGGC‑3’；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115109780 A 2RA4： 5’ ‑GACCGGTATTTGGCAAAGACGACT TTGCTGCGTCACTCTG GA‑3’。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115109780 A 3