(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211120241.0 (22)申请日 2022.09.15 (71)申请人 中国农业科 学院兰州畜牧与兽药研 究所 地址 730050 甘肃省兰州市七里河区硷沟 沿335号 (72)发明人 梁春年　刘墨典　马晓明　吴晓云　 喇永福　褚敏　阎萍　郭宪　 包鹏甲　裴杰　 (74)专利代理 机构 北京力量专利代理事务所 (特殊普通 合伙) 11504 专利代理师 毛婷 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01)C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种牦牛MOGAT2 基因CNV标记的检测方法及 其应用 (57)摘要 本发明属于分子生物学检测技术领域， 具体 涉及一种牦 牛MOGAT2 基因CNV标记的检测方法及 其应用。 本发 明提供了一种与牦牛体重性状相关 的CNV标记： 牦牛MOGAT2基因候选区域Chr  15： 1483856‑1497138的拷贝数变异； 并提供了检测 CNV标记的方法： 以牦牛的基因组DNA为模板， 以 引物对P1和P2分别通过QPCR扩增MOGAT2基因的 CNV区域以及内参基因， 定量牦牛MOGAT2基因的 拷贝数变异， 所述方法准确可靠、 操作 简便； 最后 本发明可在DNA水平上检测与牦牛体重性状密切 相关的CNV标记， 用于 牦牛的早期选 育。 权利要求书2页 说明书6页 附图2页 CN 115478112 A 2022.12.16 CN 115478112 A 1.一种与牦牛体重性状相关的CNV标记， 其特征在于， 所述CNV标记为牦牛MOGAT  2基因 候选区域C hr 15： 148385 6‑1497138的拷贝数变异。 2.检测权利要求1所述牦牛体重性状相关的CNV标记的试剂在检测牦牛体重性状或在 牦牛早期育种中的应用； 所述试剂扩增权利要求1所述CNV标记和内参基因BTF。 3.如权利要求2所述的应用， 其特征在于， 所述扩增结果根据2‑ΔΔCt法定义拷贝数变异 类型： 2‑ΔΔCt＞2为插入型； 2‑ΔΔCt<2为缺失型； 2‑ΔΔCt＝2为正常型； 所述正常型和缺失型的牦 牛体重优于插 入型。 4.如权利要求2所述的应用， 其特征在于， 所述试剂包括权利要求1所述CNV标记的扩增 引物对P1： 上游引物F1： 5 ’ ‑CGCTGGTCAAGACTGCCTAT‑3’； 下游引物R 1： 5’ ‑ACAGTGAG GAAAACCCGGTG‑3’； 和内参基因BTF的扩增引物对P2： 上游引物F2： 5 ’ ‑AACCAGGAGAAACTCGCCAA‑3’； 下游引物R2： 5 ’ ‑TTCGGTGAAATGCCCTCTCG‑3’。 5.一种用于检测与牦牛体重性状相关的CNV标记的引物对， 其特征在于， 所述引物对包 括权利要求1所述CNV标记的扩增引物对P1： 上游引物F1： 5 ’ ‑CGCTGGTCAAGACTGCCTAT‑3’； 下游引物R 1： 5’ ‑ACAGTGAG GAAAACCCGGTG‑3’； 和内参基因BTF的扩增引物对P2： 上游引物F2： 5 ’ ‑AACCAGGAGAAACTCGCCAA‑3’； 下游引物R2： 5 ’ ‑TTCGGTGAAATGCCCTCTCG‑3’。 6.用于QPCR检测权利要求1所述CNV标记的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒含有权利 要求4所述的引物对。 7.一种与牦牛体重性状相关的CNV标记的检测方法， 其特征在于， 所述方法包括以下步 骤： 以牦牛的基因组DNA为模板， 通过QPCR分别扩增权利要求1所述CNV标记和参照基因 BTF； 根据2‑ΔΔCt法定量结果将所述拷贝数变异分为三类： 2‑ΔΔCt＞2时， 为插入型； 2‑ΔΔCt<2 时， 为缺失型； 2‑Δ ΔCt＝2为正常型； 所述 正常型和缺失型的牦牛体重性状优于插 入型。 8.如权利要求7所述的方法， 其特征在于， 所述CNV标记的扩增引物对为： 上游引物F1： 5’ ‑CGCTGGTCAAGACTGCCTAT ‑3’； 下游引物R1： 5 ’ ‑ACAGTGAGGAAAA CCCGGTG‑3’； 所述内参基因 BTF的扩增引物对为： 上游引物F2： 5 ’ ‑AACCAGGAGAAACTCGCCAA ‑3’； 下游引物R2： 5 ’ ‑ TTCGGTGAAATGCCCTCTCG‑3’。 9.如权利要求8所述的检测方法， 其特征在于， 所述QPCR扩增体系包括： 50ng/μL模板 DNA1 μL， 0.4pM的引物对P1或引物对P2所对应的上、 下游引物各0.4 μL， SYBR  Premix Ex Taq  II 10 μL以及d dH2O 8.2 μL。 10.如权利要求8所述的检测方法， 其特 征在于， 所述 QPCR所用的反应程序为： (1)预变性： 90℃， 3 0s； (2)扩增反应： 95℃， 5s， 之后6 0℃， 30s， 45个循环；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115478112 A 2(3)绘制熔解曲线： 95℃， 5s， 之后6 5℃， 60s。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115478112 A 3