(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210593164.4 (22)申请日 2022.05.27 (71)申请人 广东省农业科 学院水稻研究所 地址 510640 广东省广州市天河区五山路 金颖东一街3号 (72)发明人 刘志霞　栾鑫　余宁　苟亚军　 张强　李文龙　 (74)专利代理 机构 西安汇恩知识产权代理事务 所(普通合伙) 6124 4 专利代理师 张伟花 (51)Int.Cl. C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) (54)发明名称 一种氮高效基因NRT1.1B的功能标记引物及 其应用 (57)摘要 本发明提供了一种氮高效基因NRT1.1B的功 能标记引物， 包 括记引物NRT1.1B ‑Caps‑F和引物 NRT1.1B‑Caps‑R， 核苷酸序列如SEQ  ID NO:1‑2 所示， 还提供了应用， 用于分辨水稻NRT1.1B的基 因型， 对氮高效等位基因NRT1.1B和氮低效等位 基因nrt1.1b进行区分。 本发明可快速分辨水稻 NRT1.1B的基因型。 权利要求书1页 说明书4页 序列表3页 附图1页 CN 114921460 A 2022.08.19 CN 114921460 A 1.一种氮高效基因NRT1.1B的功能标记引 物， 其特征在于， 所述氮高效基因NRT1.1B的 功能标记引物包括记引物NRT1.1B ‑Caps‑F和引物NRT1.1B ‑Caps‑R， 所述引物NRT1.1B ‑ Caps‑F的核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示， 所述引 物NRT1.1B ‑Caps‑R的核苷酸序列如SEQ   ID NO:2所示。 2.一种如权利要求1所述的氮高效基因NRT1.1B的功能标记引物的应用， 其特征在于， 所述氮高效基因NRT1.1B的功能标记引物用于分辨水稻NRT1.1B的基因型， 对氮高效等位基 因NRT1.1B和氮低效等 位基因nr t1.1b进行区分。 3.根据权利要求2所述的应用， 其特征在于， 所述氮高效基因NRT1.1B的功能标记引物 用于分辨水稻NRT1.1B的基因型， 对氮高效等位基因NRT1.1B和氮低效等位基因nrt1.1b进 行区分的方法为： S1、 提取水稻叶片的DNA， 得到待测基因 组DNA； S2、 将S1中得到的待测 基因组DNA用引物NRT1.1B ‑Caps‑F和引物NRT1.1B ‑Caps‑R进行 PCR扩增， 得到PCR产物； 所述PCR扩增的反应体系为： T3  Super PCR Mix 17 μL、 10 μM的引物NRT1.1B ‑Caps‑F 1 μ L、 10 μM的引物NRT1.1B ‑Caps‑R 1 μL、 待测基因 组DNA 1 μL； 所述PCR扩增的反应程序为： 94℃预变性1min； 98℃变性10s， 58℃退火10s， 72℃延伸 5s， 共34个 循环； 72℃延伸3mi n， 12℃2mi n； S3、 对S2中得到的PCR产物用SalI内切酶在温度为37℃的条件下进行酶切反应3h～6h， 将酶切后的PCR产 物进行电泳， 电泳得到大小为26bp和140b p的条带的对应的水稻具有氮低 效等位基因nrt1.1b， 电泳得到大小为162bp的条带的对应的水稻具有氮高效等位基因 NRT1.1B； 所述酶切反应体系为： PCR产物2μL、 SalI内切酶0.2μL、 cutsmart  buffer 1μL、 ddH2O  6.8 μL。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114921460 A 2一种氮高 效基因NRT1.1B的功能标记引物及其应用 技术领域 [0001]本发明属于水稻基因型鉴定技术领域， 具体涉及一种氮高效基因NRT1.1B的功能 标记引物及其应用。 背景技术 [0002]水稻是我国乃至世界上最重要的粮食作物 之一， 稻米产量在我国粮食供给侧发挥 着举足轻重的作用。 化肥能显著 提高水稻产量高达40～50％， 其中尤以氮肥的贡献率最大， 最为直接。 在稻米生产中习惯性多施、 重施氮肥， 这一方面在一定范围内显著 提高了水稻单 产， 对保障粮食安全起到了积极的作用； 然而， 另一方面， 过量施用氮肥也造成生产成本不 断提高、 土壤板结、 水体富营养化等一系列的生态问题和社会问题。 因此， 提高水稻品种的 氮肥利用效率进而减少农业生产中的氮肥施用量， 对降低农产品生产成本、 保护生态环境， 以及实现农业可持续高质量发展均具有重要意 义。 [0003]水稻的氮素利用效率是一个受多基因控制的复杂数量性状， 通过定位和聚合氮高 效基因， 培育具有较高氮吸收和利用能力的水稻品种， 是提高水稻氮肥利用效率的最经济、 最直接有效的途径。 前期， 我国科学家在籼稻品种中克隆了提高水稻氮素利用的主效基因 NRT1.1B， 其编码一个硝酸盐转运蛋白， 能增加硝酸盐从根 向茎的运输能力， 以及上调硝酸 盐应答相关基因的表达， 进而显著提高硝酸盐利用效率和水稻产量， 设计开发NRT1.1B基因 的功能标记， 能极大地便利在种质资源中进行氮高效等位基因N RT1.1B的筛选鉴定， 同时可 以助力分子标记辅助培 育氮高效水稻品种。 发明内容 [0004]本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足， 提供一种氮高效基 因 NRT1.1B的功能标记引物及其应用， 该氮高效基因N RT1.1B的功能标记引物可快速分辨水稻 NRT1.1B的基因型。 [0005]为解决上述技术问题， 本 发明采用的技术方案是： 一种氮高效基因NRT1.1B的功能 标记引物， 所述氮高效基因NRT1.1B的功能标记引物包括记引物NRT1.1B ‑Caps‑F和引物 NRT1.1B‑Caps‑R， 所述引物NRT1.1B ‑Caps‑F的核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示， 所述引物 NRT1.1B‑Caps‑R的核苷酸序列如SEQ  ID NO:2所示。 [0006]本发明还提供了上述 的氮高效基因NRT1.1B的功能标记引物的应用， 所述氮高效 基因NRT1.1B的功能标记引物用于分辨水稻NRT1.1B的基因型， 对氮高效等位基因NRT1.1B 和氮低效等 位基因nr t1.1b进行区分； [0007]所述氮高效等位基因NRT1.1B的核苷酸序列如SEQ  ID NO:3所示， 所述氮低效等位 基因nrt1.1b的核苷酸序列如SEQ  ID NO:4所示。 [0008]优选地， 所述氮高效基因NRT1.1B的功能标记引物用于分辨水稻NRT1.1B的基因 型， 对氮高效等 位基因NRT1.1B和氮低效等 位基因nr t1.1b进行区分的方法为： [0009]S1、 提取水稻叶片的DNA， 得到待测基因 组DNA；说　明　书 1/4 页 3 CN 114921460 A 3