(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210778469.2 (22)申请日 2022.06.30 (71)申请人 华南农业大 学 地址 510642 广东省广州市五山路483 (72)发明人 谢青梅　张新珩　巫秀红　封柯宇　 邵冠明　 (74)专利代理 机构 北京高沃 律师事务所 1 1569 专利代理师 吴波 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/6844(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 一种检测鸡传染性支气管炎病毒及基因分 型的RT-RA A引物探针组、 试剂盒及其应用 (57)摘要 本发明提供了一种检测鸡传染性支气管炎 病毒及基因分型的RT ‑RAA引物探针组、 试剂盒及 其应用， 属于分子生物学技术领域。 本发明提供 的RT‑RAA引物探针组， 包 括Vi引物探针组和By引 物探针组中的至少一组； 其中Vi引物探针组中Vi 引物的正、 反引物、 Vi探针的核苷酸序列分别如 SEQIDNO.1‑3所示； By引物 探针组中By引物的正、 反引物、 By探针的核苷酸序列分别如SEQIDNO.4 ‑ 6所示。 本发明提供的Vi引物对能够特异性检测 CHⅠ型‑CHⅤ型或Mass型的鸡传染性支气管炎病 毒， By引物对能够特异性检测CH Ⅵ型鸡传染性支 气管炎病毒， 具有检测时间短、 特异性强的优势。 权利要求书1页 说明书9页 序列表3页 附图3页 CN 115323075 A 2022.11.11 CN 115323075 A 1.一种检测鸡传染性支气管炎病毒 的RT‑RAA引物探针组， 其特征在于， 包括Vi引物探 针组和By引物探针组中的至少一组； 所述V i引物探针组中V i引物的正反引物的核苷 酸序列 如SEQ ID NO.1‑2所示， Vi探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示； 所述B y引物探针组中B y 引物的正反引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.4‑5所示， By探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO.6 所示。 2.权利要求1所述引物探针组在制备检测鸡传染性支气管炎病毒产品中的应用。 3.权利要求1所述引物探针组在制备鸡传染性支气管炎病毒基因分型产品中的应用。 4.一种非诊断目的的检测鸡传染性支气管炎病 毒的方法， 其特征在于， 包括以下步骤： 提取待测样 本的RNA， 以待测样 本的RNA为模板， 用权利要求1所述引物探针组进行RT ‑RAA反 应， 若有荧光扩增曲线出现， 出峰时间≤20min或Ct值≤30， 则待测样本为鸡传染性支气管 炎病毒阳性， 若无荧光扩增曲线出现， 出峰时间＞20min或Ct值＞39， 则待测样本为鸡传染 性支气管炎病毒阴性。 5.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于， 当采用权利要求1中的Vi引物探针组进行 RT‑RAA反应时， 若结果为阳性， 则待测样本为CH Ⅰ型‑CHⅤ型或Mass型鸡传 染性支气管炎病 毒； 当采用权利要求1中的By引物探针组进行RT ‑RAA反应时， 若结果为阳性， 则待测样本为 CHⅥ型鸡传染性支气管炎病毒。 6.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于， 当采用权利要求1中的两组引物探针组进 行RT‑RAA反应时， 若两组引物探针组的结果均为阳性， 则待测样本为CH Ⅰ型‑CHⅥ型或Mass 型鸡传染性支气管炎病毒； 若V i引物探针组的结果为阳性， By引物探针组的结果为阴性， 则 待测样本为CH Ⅰ型‑CHⅤ型或Mass型鸡传染性支气管炎病毒； 若By引物探针组的结果为阳 性， Vi引物探针组的结果为阴性， 则待测样 本为CHⅥ型鸡传染性支气管炎病毒； 若两组引物 探针组的结果均为阴性， 则待测样本为鸡传染性支气管炎病毒阴性。 7.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于， 所述RT ‑RAA反应的程序为： 40℃60s； 40℃ 30s， 40个循环。 8.一种检测鸡传染性支气管炎病毒或鸡传染性支气管炎病 毒基因分型的试剂 盒， 其特 征在于， 所述试剂盒包括权利要求1所述引物探针组。 9.根据权利要求8所述的试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒中引物和探针的浓度比例关 系为1:1， Vi引物和By引物的体积比为1:1 ‑2， Vi探针和By探针的体积比为2:3 。 10.根据权利要求8所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒还包括阳性对照品和阴性 对照品， 所述阳性对照品包括核苷酸序列如SEQ  ID NO.7和SEQ  ID NO.8所示的核酸， 所述 阴性对照品包括d dH2O。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115323075 A 2一种检测鸡传染性支气管炎病毒及 基因分型的RT ‑RAA引物探 针组、 试剂盒及其应用 技术领域 [0001]本发明属于分子生物学技术领域， 尤其涉及一种检测鸡传染性支气管炎病毒及基 因分型的RT ‑RAA引物探针组、 试剂盒及其应用。 背景技术 [0002]鸡传染性支气管炎(Infectious  Bronchitis， IB)是由鸡传染性支气管炎病毒 (Infectious  Bronchitis  Virus， IBV)引起的一种急性、 高度接触性呼吸道传染病。 IBV是 禽类冠状病毒Y ‑冠状病毒属(Ganmmacor onavirus)的一员， 感染后以呼吸道症状、 肾炎和生 产性能下降为特征。 S1蛋白是IBV主要的免疫原 蛋白， 能介导细胞融合， 刺激机体产生病毒 中和抗体和血凝抑制抗体； S1蛋白基因具有较强的型特异性， 但很容易发生变异， 使IBV不 断的出现新的血清型。 疫苗是我国预防控制IBV的主要手段， 但 IBV基因组极易 发生变异， 导 致基因型、 血清型、 致病性和免疫原性多样化， 在面对不同基因型或血清型的毒株之间， 疫 苗的交叉保护效果 不理想。 [0003]目前， 针对不同基因型的IBV检测主要是运用PC R方法检测后送到生物公司进行测 序， 在对测序结果进行分析， 得出结论， 这一过程需要2 ‑3天的时间。 对于争分夺秒的IBV疫 情防控措施下， 该方法耗时太长。 目前IBV分离株S1基因包括7个基因型： CH Ⅰ型‑CHⅥ型和 Mass型， 如 何快速确 定S1基因分型， 进而快速区分IBV的流行趋势， 能够为疫苗等生物制品 的发展， 疫情防控措施提供 快速的诊断手段。 发明内容 [0004]有鉴于此， 本发明的目的在于提供一种不仅能够检测鸡传染性支气管炎病毒而且 还能够对该病毒基因进行分型 的RAA引物探针组， 采用本发明引物探针组进行鸡传染性支 气管炎病毒的检测及基因的分型， 具有检测方法简单、 灵敏度高、 不需要昂贵仪器设备、 检 测时间短、 适于大规模推广应用的优势。 [0005]为了实现上述发明目的， 本发明提供了以下技 术方案： [0006]本发明提供了一种检测 鸡传染性支气管炎病毒的RT ‑RAA引物探针组， 包括Vi引物 探针组和By引物探针组中的至少一组； 所述V i引物探针组中V i引物的正反引物的核苷 酸序 列如SEQ ID NO.1‑2所示， Vi探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示； 所述By引物探针组中 By引物的正反引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.4‑5所示， By探针的核苷酸序列如SEQ  ID  NO.6所示。 [0007]本发明还提供了一种上述引物探针组在制备检测鸡传染性支气管炎病毒产品中 的应用。 [0008]本发明还提供了一种上述引物探针组在制备鸡传染性支气管炎病毒基因分型产 品中的应用。 [0009]本发明还提供了一种非诊断目的的检测鸡传染性支气管炎病毒的方法， 包括以下说　明　书 1/9 页 3 CN 115323075 A 3