(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211113982.6 (22)申请日 2022.09.14 (71)申请人 复旦大学附属中山医院 地址 200032 上海市徐汇区枫林路180号 (72)发明人 梁嘉琪　詹成　毕国澍　黄宜炜　 陈振淙　赵广垠　张欢　王群　 (74)专利代理 机构 上海申浩 律师事务所 31280 专利代理师 贾师英 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种检测肺腺癌铁死亡敏感性的试剂盒 (57)摘要 本发明公开了一种检测肺腺癌铁死亡敏感 性的试剂盒， 其包括： 用于从肺腺癌患者肿瘤组 织中提取分离mRNA的mRNA提取分离系统； 用于 MAFF基因的mRNA表 达量的MAFF基因检测系统； 记 载用于确定MAFF表达量高/低分界标准的数学模 型载体， 当肺腺癌患者肿瘤组织中MAFF表达量高 于所述分界标准时， 提示患者对铁死亡诱导剂药 物治疗敏感； 反之当低于所述分界标准时， 提示 患者对铁死亡诱导剂药物治疗不敏感、 或者出现 治疗抵抗。 权利要求书1页 说明书6页 附图2页 CN 115261481 A 2022.11.01 CN 115261481 A 1.一种检测肺腺癌铁死亡敏感性的试剂 盒， 其特征在于， 包括： 用于从肺腺癌患 者肿瘤 组织中提取分离mRNA的mRNA提取分离系统； 用于MAFF基因的mRNA表达量的MAFF基因检测系 统； 记载用于确定MAFF表达量高/低分界标准的数学模型载体， 当肺腺癌患者肿瘤组织中 MAFF表达量高于所述分界标准时， 提示患者对铁死亡诱导剂药物治疗敏感； 反之当低于所 述分界标准时， 提 示患者对铁死 亡诱导剂药物治疗不敏感、 或者出现治疗抵抗。 2.如权利要求1所述的试剂盒， 其特征在于， 所述数学模型是： 基因MAFFmRNA表达量表 示为qPCR.Ct＝qPCR.Ct.MAFF ‑qPCR.Ct.内参， 即从肺腺癌患者肿瘤组织中提取的MAFF进行 定量PCR的Ct值与内参的Ct值之差 。 3.如权利要求2所述的试剂盒， 其特 征在于， 所述内参选自是ACTB、 GAP DH、 18sRNA。 4.如权利要求3所述的试剂盒， 其特征在于， 当内参是ACTB 时， 基因MAFFmRNA表达量表 示为qPCR.Ct＝qPCR.Ct.MAFF ‑qPCR.Ct.ACTB， 所述分界标准为： qPCR.Ct取13.0为临界值， 如果＜13.0， 则MAFF基因高表达， 提示患者对铁死亡诱导剂药物治疗敏感； 如果≥13.0， 则 MAFF基因低表达， 提 示患者对铁死 亡诱导剂药物治疗不敏感， 或者出现治疗抵抗。 5.如权利 要求1所述的试剂盒， 其特征在于， 还包括用于将mRNA逆转录成cDNA的mRNA逆 转录系统。 6.如权利 要求5所述的试剂盒， 其特征在于， 进一步包括用于进行qPCR实验检测MAFF基 因表达量的qPCR试剂即MAF F基因检测系统。 7.如权利 要求6所述的试剂盒， 其特征在于， 所述qPCR试剂中MAFF基因的qPCR扩增引物 序列包括： 正向引物： 5 ’ ‑GCGAGAGCTGAGCGAGA ACA‑3’； 反向引物： 5 ’ ‑TGCTTGAGCCGTGTCAC CTC‑3’。 8.如权利 要求6所述的试剂盒， 其特征在于， 所述qPCR试剂中内参ACTB基因的qPCR引物 序列为： 正向引物： 5 ’ –TGACGTGGACATCCGCAAAG‑3’； 反向引物： 5 ’ –CTGGAAGGTGGACAGCGAG G‑3’。 9.如权利 要求1所述的试剂盒， 其特征在于， 所述铁死亡诱导剂药物选自Erastin、 柳氮 磺胺吡啶、 谷氨酸盐、 RSL3、 D P17。 10.如权利要求1所述的试剂盒， 其特征在于， 所述铁死亡诱导剂药物为RSL3或者 Erastin。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115261481 A 2一种检测肺腺癌铁死亡 敏感性的试剂盒 技术领域 [0001]本发明属于生物检测领域， 涉及一种检测肺腺癌铁死 亡敏感性的试剂盒。 背景技术 [0002]肺腺癌作为最为常见、 死亡率最高的肿瘤之一， 发病率和死亡率均排名所有肿瘤 前列。 对于肺腺癌手术后肿瘤合并局部淋巴结转移和晚期患者， 化疗和 放疗是非常重要的 治疗手段。 然而化疗耐药和 放疗抵抗的产生极大程度地限制 了它们的疗效,导致治疗失败 以及肿瘤的复发转移。 新兴的细胞铁死亡机制则可以缓解这种治疗抵抗。 通过在肿瘤中尤 其是耐药 的细胞中诱导铁死亡， 无论是作为单一疗法， 还是与其他化疗药物或放射治疗联 合使用， 对于患者的治疗效果、 减轻患者经济负担和国家财政负担具有重要的临床指导意 义。 [0003]然而， 目前临床 上还缺乏有效的诊断手段用来判定哪些肺 腺癌患者对铁死亡诱导 剂药物治疗具有敏感性， 导 致无法对其实施 精准医疗。 发明内容 [0004]为了寻找可用于诊断肺 腺癌铁死亡敏感性的生物标志物， 发明人基于生物信息学 的统计数据， 对于与肺腺癌、 尤其是肺腺癌铁死亡有关的高表达和低表达的蛋白质或基因 进行了广泛筛选， 意外地发现个别基因在肺腺癌铁死亡事件中发生高表达或者低表达， 经 过实验验证， 确认MAFF基因(NM_012323.4)的高表达可以作为肺腺癌铁死亡敏感性的指征。 因此， 本发明包括如下技 术方案： [0005]一种检测肺腺癌铁死亡敏感性的试剂盒， 其包括： 用于从肺腺癌患者肿瘤组织中 提取分离mRNA的mRNA提取分离系统； 用于MAFF基因(NM_012323.4)的mRNA表达量的MAFF基 因检测系统； 记载用于确定MAFF表达量高/低分 界标准的数学模型载体， 当肺腺癌患者肿瘤 组织中MAFF表达量高于所述分界标准时， 提示患者对铁死亡诱导剂药物治疗敏感； 反之当 低于所述分界标准时， 提 示患者对铁死 亡诱导剂药物治疗不敏感、 或者出现治疗抵抗。 [0006]在一种实施方式中， 上述数学模型载体是说明书， 其可以写在瓶子、 试管和类似物 上， 或者写在一张单独的纸上， 或者在容器的外部或内部， 例如是带有操作演示视频APP下 载窗口比如二维码的纸件， 说明书也可以是多媒体的形式， 比如CD、 U盘、 网盘等 [0007]上述数学模型为： 基因MAFFmRNA表达量表 示为qPCR.Ct＝qPCR.Ct.MAFF ‑qPCR.Ct. 内参， 即从肺腺癌 患者肿瘤组织中提取的MAF F进行定量PCR的Ct值与内参的Ct值之差 。 [0008]所述内参选自是ACTB( β ‑Actin)、 GAPDH、 18sRNA等。 更优选ACTB作为内参对照。 [0009]当内参是ACTB时， 基因MAFFmRNA表达量表示为qPCR.Ct＝qPCR.Ct.MAFF ‑ qPCR.Ct.ACTB， 所述分界标准为： qPCR.Ct取13.0为临界值， 如果＜13.0， 则MAFF基因高表 达， 提示患者对铁死亡诱导剂药物治疗敏感； 如果≥13.0， 则MAFF基因低表达， 提示患者对 铁死亡诱导剂药物治疗不敏感， 或者出现治疗抵抗。 [0010]可选地， 当内参基因是除ACTB外的其它内参基因比如GAPDH、 18sRNA时， qP CR.Ct临说　明　书 1/6 页 3 CN 115261481 A 3