(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210659520.8 (22)申请日 2022.06.13 (71)申请人 济宁医学院附属医院 地址 272100 山东省济宁市任城区古槐路 89号 (72)发明人 陈树雄　班博　杨万岭　张梅　 孙海玲　赵强　 (74)专利代理 机构 北京高沃 律师事务所 1 1569 专利代理师 吴波 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种检测Turner综合征患者是否携带Y染色 体物质的多重PCR引物组及其应用 (57)摘要 本发明提供了一种检测Turner综合征患者 是否携带Y染色体物质的多重PCR引物组及其应 用， 属于生物检测技术领域。 本发明提供的检测 Turner综合征患者是否携带Y染色体物质的多重 PCR引物组的核苷酸序列如SEQIDNO .1 ‑ SEQIDNO.18所示。 用本发明提供的引物组检测 Turner综合征患者是否携带Y染色体物质， 具有 检测成本低、 效率高、 操作简便易推广、 特异性 强、 检测灵敏度高、 检测周期短的优势， 能够在 Turner综合征患者生长激 素治疗前对Y染色体物 质进行筛查， 为Turner综合征患者是否需要预防 性性腺切除提供诊断依据。 权利要求书1页 说明书6页 序列表3页 附图7页 CN 115247209 A 2022.10.28 CN 115247209 A 1.一种检测Turner综合征患者是否携带Y染色体物质的多重PCR引物组， 其特征在于， 所述引物组的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1‑SEQ ID NO.18所示。 2.权利要求1所述引物组在制备检测Turner综合征患者是否携带Y染色体物质产品中 的应用。 3.权利要求1所述引物 组在制备评估Turner综合征患者性腺母细胞瘤风险产品中的应 用。 4.根据权利要求2或3所述的应用， 其特 征在于， 所述产品包括试剂、 试剂盒。 5.根据权利要求2所述的应用， 其特征在于， 所述检测包括如下步骤： 获取样本DNA， 采 用权利要求 1所述引物组进行多重P CR扩增， 电泳 分离观察结果； 若电泳结果仅出现499bp和 294bp两条带， 则表明为Y染色体物质阴性的Turner综合征患者， 若电泳结果出现所述两条 带以外的其 他条带， 则表明为携带Y染色体物质的T urner综合征患者。 6.根据权利 要求5所述的应用， 其特征在于， 所述多重PCR的反应体系以50 μl计为： 引物 组混合液5 μl， 多重PCR缓冲液25 μl， 多重PCR  DNA聚合酶1μl， 基因组DNA  100ng， 水补至50 μ l； 所述引物组混合液中各引物上 下游终浓度均为0.1 μM 。 7.根据权利要求5所述的应用， 其特征在于， 所述多重PCR的反应程序为： 预变性95℃ 5min； 变性95℃3 0s， 退火6 0℃90s， 延伸72℃6 0s， 共30个循环； 彻底延伸72℃10mi n。 8.一种检测Turner综合征患者是否携带Y染色体物质的试剂盒， 其特征在于， 包括权利 要求1所述引物组。 9.根据权利要求8所述的试剂盒， 其特 征在于， 还 包括正常对照和空白对照。 10.根据权利要求9所述的试剂盒， 其特征在于， 所述正常对照包括核型正常男性样本 和核型正常女性样本 。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115247209 A 2一种检测Tu rner综合征患者是否 携带Y染色体物质的多重PCR 引物组及其应用 技术领域 [0001]本发明属于生物检测技术领域， 尤其涉及一种检测Turner综合征患者是否携带Y 染色体物质的多重PCR引物组及其应用。 背景技术 [0002]Turner综合征(Turner  Syndrome)又称先天性卵巢发育不全综合征， 是由于全部 或部分体细胞中一条X染色体完全或部分缺失， 或X染色体存在其他结构异常所致。 在活产 女婴中的发病率为1/2000 ‑1/4000， 是常见的人类染色体异常疾病之一。 Turner综合征的典 型临床特征主要有身 材矮小、 性腺发育不良， 以及肘外翻、 颈蹼、 盾状胸、 后发际低等特殊体 征。 Turner综合征患者的核型约50％为45,X， 20％ ‑30％为嵌合体， 其余为X染色体结构异常 (如染色体长臂或短臂缺失46,X,del(Xq)或46,X,del(Xp)， X 染色体长臂或短臂等臂46,X,i (Xq)或46,X,i(Xp)， 环 状X染色体46,X,r(X))。 此外还有5％的Turner综合征患者含有Y染色 体， 另有3％的Turner综合征患 者含有无法辨认的标记染色体(marker  chromosome， mar)， 用传统细胞遗传学显带技术无法辨认 其特征与来源， 可能来源于纯Y染色体或嵌合型Y染色 体。 [0003]Turner综合征患者发生性腺母细胞瘤的几率较低(约1％左右)， 但若患者含有Y 染 色体或来源于Y染色体的片段， 其 发生性腺母细胞瘤的风险增加5％ ‑30％， 所以对这部 分患 者的及时筛查甄别尤为重要。 但临床仅推荐对有男性化特征但传统细胞遗传学和FIS H分析 中Y染色体物质阴性的个体， 或含有标记染色体、 环状染色体的Turner综合征患者， 使用分 子检测技术筛查Y染色体序列。 因此， 及时检出Turner综合征患者是否含有Y染色体或来源 于Y染色体的片段， 进 而确定是否预防性切除双侧性腺， 可 预防性腺母细胞瘤的发生。 [0004]完整的Y染色体可直接通过核型分析检测， 而来源于Y染色体的mar及Y 染色体片段 则无法识别， 需要其他分子检测方法的辅助。 目前常用的检测方法主要有： 荧光原 位杂交技 术(fluorescence  in situ hybridization， FISH)， 染色体微阵列技术(chromosome   microarray， CMA)、 全基因组测序等。 这些技术普遍存在操作复杂、 检测成本较高、 检测周期 长等缺点。 多重PCR是一种可在同一反应体系中同时对多个DNA目的片段进行扩增的技术。 相较于普通PCR和其它分子检测技术， 多重PCR具有操作简便、 检测周期短、 低成本、 检测效 率高等优点， 特别适用于微量样本的多位点检测。 目前本领域尚无采用多重P CR的方法检测 Turner综合征患者Y染色体物质的有关报道。 发明内容 [0005]有鉴于此， 本发明的目的在于提供一种检测Turner综合征患者是否携带Y染色体 物质的多重PCR引物组， 设计多对Y染色体引物， 通过多重PCR的检测方法， 从外周血基因组 中快速筛查Y染色体物质， 为T urner综合征患者是否预防性 性腺切除提供诊断依据。 [0006]为了实现上述发明目的， 本发明提供了以下技 术方案：说　明　书 1/6 页 3 CN 115247209 A 3