(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210688135.6 (22)申请日 2022.06.17 (71)申请人 厦门健康工程与创新研究院 地址 361000 福建省厦门市海沧区后祥路 71号厦门生物医药产业协同创新创业 中心23号楼第8层0 3单元 (72)发明人 洪晗露　雷洋　汪大明　白佳委　 (74)专利代理 机构 厦门仕诚联合知识产权代理 事务所(普通 合伙) 35227 专利代理师 程劲竹 (51)Int.Cl. C12Q 1/689(2018.01) C12Q 1/6844(2018.01) C12Q 1/04(2006.01) C12N 15/11(2006.01)C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种恒温快速检测阪崎克罗诺杆菌的引物 组合物、 试剂盒及应用 (57)摘要 本发明属于阪崎克罗诺杆检测技术领域， 具 体涉及一种恒温快速检测阪崎克罗诺杆菌的引 物组合物、 试剂盒及应用。 本申请公开的一种恒 温快速检测阪崎克罗诺杆菌的引物组合物， 包括 RPA引物组以及PCR的引物组， 具体为正向引物 RPA‑F、 反向引物RPA ‑R、 探针、 PCR ‑F、 PCR‑R； 本发 明所述的试剂盒， 运用于对婴儿配方奶粉质量安 全的检测， 能够快速确定婴儿配方奶粉中是否含 有阪崎克罗诺杆菌 。 权利要求书1页 说明书3页 序列表1页 CN 115109860 A 2022.09.27 CN 115109860 A 1.一种恒温快速检测阪崎克罗诺杆菌的引物组合物， 其特 征在于， 包括： RPA引物组以及PCR的引物组； RPA引物组： 正向引物RPA ‑F： TGGAAGCGGGATGACGTGAC CGGCCAGTATTT 反向引物RPA ‑R： TTATCAAGCCACCAGCGCATCATGTCGTAG 探针： CATGCACCTGTTCAGCAGC CGTCAGCCCGA(FAM‑dT)(THF)(BHQ1 ‑d CAACTGGGAAAATCA‑SpacerC3。 2.根据权利要求1所述的一种恒温快速检测阪崎克罗诺杆菌的引物组合物， 其特征在 于， 所述PCR的引物组： PCR‑F:GCCGAACCCCGAAAAACT PCR‑R:TGCCAGGCGGTGAAAATG。 3.根据权利要求2所述的一种恒温快速检测阪崎克罗诺杆菌的引物组合物， 其特征在 于， 所述PCR的引物组， 目的片段 大小为28 8bp。 4.根据权利要求1所述的一种恒温快速检测阪崎克罗诺杆菌的引物组合物， 其特征在 于， 所述RPA引物组， 目的片段 大小为128bp。 5.一种恒温快速检测阪崎克罗诺杆菌的试剂 盒， 其特征在于， 包括权利要求1 ‑4任一项 所述的引物组合物。 6.一种恒温快速检测阪崎克罗诺杆菌的试剂 盒的应用， 其特征在于， 将权利要求5的试 剂盒用于检测婴儿配方奶粉是否含有阪崎克罗诺杆菌 。 7.一种恒温快速检测阪崎克罗诺杆菌的试剂盒的应用， 其特征在于， 所述试剂盒的应 用过程， 包括以下步骤： S1.引物与探针的设计 根据C.sakazak ii的gluA基因设计所需的RPA引物组和PCR的引物组； S2.建立实时荧 光RPA反应 体系和qPCR反应 体系 使用TwistA mp exo试剂盒以50 μL的体积进行实时RPA反应； 其他成分包括每个420nM引 物、 120nM 探针、 14mM乙酸镁、 2 μLDNA模板、 无核酸酶水以及荧 光基础缓冲液。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115109860 A 2一种恒温快速检测阪崎克罗 诺杆菌的引物组合物、 试剂盒及 应用 技术领域 [0001]本发明属于阪崎克罗诺杆检测技术领域， 具体涉及一种恒温快速检测阪崎克罗诺 杆菌的引物组合物、 试剂盒及应用。 背景技术 [0002]婴儿配方奶粉(PIF)是作为除母乳之外， 婴幼儿这一特殊人群的主要膳食营养来 源， 其产品的卫生安全与婴幼儿的健康息息相关， 对社会的稳定和发展有着密不可分的关 系。 由于婴儿缺乏发达的免疫系统或竞争性肠道菌群， 因此婴儿食品的微生物学安全性非 常重要。 [0003]而阪崎克罗诺杆菌(C.sakazakii)是PIF中最为常见和频发的致病菌， 可导致罕见 的危及新生儿生命的脑膜炎、 败血症和坏死性小肠结肠炎。 在婴儿配方奶粉食品安全的检 测中， 世界各国将C.sakazak ii列为必须检测的微 生物指标之一。 [0004]当前传统的C.s akazakii检测方法步骤繁琐、 耗时费力， 需要经过从培养富集到血 清型鉴定等一系列冗长的步骤， 整个过程需要耗时4 ‑7天。 而使用最为广泛的PCR技术虽然 具备高效、 特异、 灵敏的优点， 但由于其对复杂的热循环设备的要求和进 行扩增所必需的精 确温度控制导致PCR被局限在实验室的使用范围内， 从而限制了它在资源匮乏的环境中的 应用。 发明内容 [0005]本发明的目的在于克服现有技术中存在的PCR技术被局限在实验室的使用范围 内， 从而限制 了它在资源匮乏的环境中的应用的技术问题， 提供一种恒温快速检测阪崎克 罗诺杆菌的引物组合物、 试剂盒及应用。 [0006]本发明的引物组合物构建的试剂盒， 运用于对婴儿配方奶粉质量安全的检测， 能 够快速确定婴儿配方奶粉中是否含有阪崎克罗诺杆菌 。 [0007]为了实现本发明的上述目的， 本发明采用以下技 术方案， [0008]一种恒温快速检测阪崎克罗诺杆菌的引物组合物， 包括： [0009]RPA引物组以及PCR的引物组； 其中 [0010]RPA引物组： [0011]正向引物RPA ‑F： TGGAAGCGGGATGACGTGAC CGGCCAGTATTT [0012]反向引物RPA ‑R： TTATCAAGCCACCAGCGCATCATGTCGTAG [0013]探针： [0014]CATGCACCTGTTCAGCAGC CGTCAGCCCGA(FAM‑dT)(THF)(BHQ1 ‑d [0015]CAACTGGGAAAATCA‑SpacerC3。 [0016]进一步的， 所述PCR的引物组， [0017]PCR‑F:GCCGAACCCCGAAAAACT说　明　书 1/3 页 3 CN 115109860 A 3