(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210747145.2 (22)申请日 2022.06.28 (71)申请人 湖南丰晖生物科技有限公司 地址 410081 湖南省长 沙市高新 开发区麓 云路100号兴工科技园3 栋4层402房 (72)发明人 黄河清涛 　蒋明贵　王德鹏　 刘彩云　 (74)专利代理 机构 长沙大珂知识产权代理事务 所(普通合伙) 4323 6 专利代理师 王琼琦 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6844(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种快速鉴定细胞种属的检测试剂盒 (57)摘要 本发明属于基因检测领域， 涉及一种能够快 速鉴定实验室常用细胞的种属是否为人源、 小鼠 源、 大鼠源的试剂盒， 可 以用来判断细胞是否出 现种属混杂的污染。 本发明提供了鉴定种属的引 物组合物、 其应用以及一站式试剂盒， 试剂盒同 时附有3个种属的阴阳性样 本， 方便比对 结果， 检 测速度快， 引物的特异性好。 使用该试剂盒可 以 完整的进行细胞种属鉴定实验， 可以在5小时内， 拿到种属鉴定结果， 及时对实验进行调整。 通常 不需要额外操作步骤， 并且快速得到种属鉴定结 果。 权利要求书2页 说明书8页 序列表2页 附图1页 CN 114891899 A 2022.08.12 CN 114891899 A 1.一种种属鉴定的引物组合物， 其特征在于， 所述的引物组合物选自以下的一种或者 几种： mouse‑F： ATTACAGCCGTACTGCTC CTAT， mouse‑R： CCCAAAGAATCAGAACAGATGC， rat‑F： AGACACTCTGACGACTGTCA ACA， rat‑R： CATGGTAGAGAAAATCTGTTCCG， Human‑F： GTGGGCTGAAAAGCTCCCGATTAT， Human‑R： GTGATTCCCATTGGCCTGTTCCTC。 2.根据权利要求1所述的引物组合物， 其特 征在于， 所述的引物成对使用； 所述的引物组合物选自以下的一对或者几对： 第一对： mouse ‑F： ATTACAGCCGTACTGCTC CTAT和mouse ‑R： CCCAAAGAATCAGAACAGATGC， 第一对： rat ‑F： AGACACTCTGACGACTGTCA ACA和rat ‑R： CATGGTAGAGAAAATCTGTTCCG， 第一对： uman ‑F： GTGGGCTGAAAAGCTCCCGATTAT和Human ‑R： GTGATTCCCATTGGCCTGTTCCTC。 3.权利要求1所述的引物组合物的应用， 其特征在于， 使用所述的引物 组合物扩增待检 测细胞的基因组DNA， 鉴定待检测细胞的种属来源， 或者判断待检测细胞是否存大鼠、 小鼠 或者人类种属的细胞的种间污染。 4.一种种属鉴定的试剂盒， 其特 征在于， 所述的试剂盒含有权利要求1的引物组合物。 5.如权利要求 4所述的试剂盒， 其特 征在于， 所述的试剂盒含有C helex‑100。 6.一种鉴定细胞种属的方法， 其特征在于， 使用权利要求1的引物组合物扩增检测细胞 的基因组DNA， 根据检测结果 鉴定待检测细胞的种属来源。 7.如权利要求6所述的方法， 其特 征在于， 所述的方法包括以下步骤： S1,获取检测细胞的基因 组DNA， S2,使用权利要求1的引物组合物扩增检测细胞的基因 组DNA， S3,根据检测结果 鉴定待检测细胞的种属。 8.如权利要求6所述的方法， 其特 征在于， 获取检测细胞的基因 组DNA包括以下步骤： S1.1,消化、 漂洗并收集细胞， S1.2,加入10 0‑300 μl、 质量体积比为5％的C helex‑100， 震荡混匀， S1.3,加入8 ‑100 μl、 浓度为20mg/ μl蛋白酶K， 混匀， 45 ‑65℃保温2 ‑5小时， 取 出后震荡， S1.4,90‑110℃保温5 ‑10分钟,振荡后8000 ‑12000rpm离心2 ‑5分钟,收集上清或者放0 ‑ 10℃备用。 9.如权利要求6所述的方法， 其特 征在于， PCR反应的步骤 包括： S2.1,将权利 要求1所述的引物组合物中的每条引物稀释成终浓度 为100nmol/L的储藏 液与10nmo l/L的工作液， S2.2,在反应管中按以下组份配制PCR预混液， 每个细胞样本配制3种不同的PCR预混 液： PCR Mix， 22 μl， Primer Mix， 2 μl， S2.3,向以上反应混合液中加入1μl检测样品， 使总体积达到25μl， 检测样品中检测细 胞的基因 组DNA浓度为80 ‑200ng/ μl，权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114891899 A 2S2.4,把反应管放入PCR仪中， 设定以下 条件， 进行PCR反应： 其中， 检测小鼠细 胞使用Tm为58℃、 检测大鼠细胞使用Tm为60℃、 检测人源细胞使用Tm 为62℃。 10.如权利要求6所述的方法， 其特 征在于， 鉴定待检测细胞的种属的步骤 包括： S3.1,制备琼脂糖凝胶， 以便进行电泳， S3.2， 将完成扩增的PCR反应液依次加入到琼脂糖胶的胶孔中， 并选择合适的分子量标 记， S3.3,通电进行电泳， 保持电压120V， S3.4,待PCR产物中条 带发生分离后， 采用凝胶成像系统拍照， S3.5将PCR产物中条 带与阳性对照或者阴性对照的条 带比对。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114891899 A 3