(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210760293.8 (22)申请日 2022.06.30 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114958837 A (43)申请公布日 2022.08.30 (73)专利权人 鲲鹏基因 （北京） 科技有限责任公 司 地址 102206 北京市昌平区生命科 学园生 命园路4号院7号楼5层5 01 (72)发明人 柳丽萍　潘彦鹏　郭求真　 (74)专利代理 机构 北京博观达知识产权代理事 务所(普通 合伙) 11977 专利代理师 曹阳 (51)Int.Cl. C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12R 1/72(2006.01) (56)对比文件 CN 110804671 A,2020.02.18CN 112063747 A,2020.12.1 1 US 2022017973 A1,202 2.01.20 无.[Candida] auris tRNA- dihydrouridi ne(20a/20b) synthase [NAD(P) +](CJI97_ 005716), partial mRNA. 《NCBI Reference Sequence: XM _029037611.1》 .202 2, 序列. S. Mahmoudi 等.Methods for identi fi cation of Candida auris, the yeast of global publ ic health co ncern: A review. 《Journal de Myco logie Medicale》 .2019,第2 9 卷174-179. Emily K. Den nis等.So Many Dia gnostic Tests, So L ittle Time: Review and Preview of Candida auris Testi ng in Clinical and Public Health Laboratories. 《Fro ntiers i n Microbiology》 .2021,第12卷1-13. 方文捷.高发、 新发侵 袭性酵母感 染临床流 行病学和早期诊断技 术研究. 《中国博士学位 论 文电子期刊网 医药卫 生科技》 .2019,143 -144. 审查员 韩沛 (54)发明名称 一种快速精准检测耳念 珠菌的引物组合物、 试剂盒及方法 (57)摘要 本发明提供用于检测耳念 珠菌的PCR引物组 合物， 包括上引物和下引物， 所述上引物具有如 序列1所示的核苷酸序列， 下引物具有如序列2所 示的核苷 酸序列。 本发明的有益效果是本发明可 以快速、 精准的检测出耳念珠菌， 该检测体系的 最低检测限可以达到1  CFU/PCR的反应， 在样品 处理后4小时内获得结果， 显著缩短了检出时间， 本发明的检测方法特异性更高， 灵敏度更好。 权利要求书1页 说明书6页 序列表2页 附图1页 CN 114958837 B 2022.10.18 CN 114958837 B 1.一种快速精准检测耳念珠菌的试剂盒， 其特征在于： 包括上引物、 下引物及探针， 所 述上引物具有如序列1所示的核苷酸序列， 所述下引物具有如序列2所示的核苷酸序列， 所 述探针具有如序列3所示的核苷酸序列。 2.根据权利要求1所述的快速精准检测耳念珠菌的试剂盒， 其特征在于： 所述探针的5 ’ 端标记有荧 光基团， 所述探针的3 ’端标记有淬灭基团。 3.根据权利要求2所述的快速精准检测耳念珠菌的试剂 盒， 其特征在于： 所述荧光基团 为FAM， 所述淬灭基团为TAMRA。 4. 根据权利要求1 ‑3任一所述的快速精准检测耳念珠菌的试剂盒， 其特征在于： 该试 剂盒的检测最低检测限为1  CFU/PCR。 5.一种检测耳念珠菌的方法， 该方法以非疾病诊断为目的， 其特征在于： 包括如下步 骤： 第一步， 以待测样品DNA为模板， 利用权利要求1 ‑4任一项所述的试剂盒对所述待测样 品DNA进行PCR检测； 第二步， 基于检测结果， 确定待测样品中是否含有耳念珠菌 。 6.根据权利要求5所述的方法， 其特征在于： 所述第一步中PCR检测的反应体系为反应 酶混合液为13 ‑14 μL， 引物和探针的混合物的加入量 为2‑3 μL， DNA模板的加入量 为5‑6 μL。 7.根据权利要求5所述的方法， 其特 征在于： 所述第一 步中PCR的扩增条件为： 。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114958837 B 2一种快速精准 检测耳念珠菌的引物组合物、 试剂盒及方 法 技术领域 [0001]本发明涉及 生物检测领域， 更具体地说涉及一种快速精准检测耳念珠菌的引物组 合物、 试剂盒及方法。 背景技术 [0002]耳念珠菌 （Candida  auris） 一种新兴的在2009年发现的多重耐药酵母菌， 出现和 传播的确切机制目前尚不清楚， 大多数耳念珠菌对至少一种抗真菌药物类具有抗性， 超过 三分之一的菌株对两种抗真菌药物具有抗药性， 而部分菌株对所有三种抗真菌药物的最低 抑菌浓度升高， 因其具有多重耐药和致死率高的特征， 也被称为 “超级真菌。 耳念珠菌感染 通常会在医院等环境内传播， 并可引起侵 袭性感染， 血 液感染致死率高。 [0003]在通用、 传统的生化鉴定、 显微镜观察等微生物鉴别方法别中， 耳念珠菌和普通的 念珠菌几乎没有分别， 致使鉴别困难， 因此误诊 可能性较大， 而且传统培养鉴别时间一般要 4‑14天， 鉴别周期时间长 。 [0004]分子生物学技术， 尤其是是PCR技术可以实现对耳念珠菌简单快速灵敏准确的有 效检测。 常用的检测方法是针对核糖体基因转录间隔区ITS2区域设计引物， 但是鉴于ITS2 区在真菌间的保守性高， 针对耳念珠菌的序列特异性并不高。 [0005]因此， 急需一种实时PCR检测方法， 高效快速地检测耳念珠菌 。 发明内容 [0006]本发明克服了现有技术中的不足， 提供了一种快速精准检测耳念珠菌的引物组合 物， 还提供了快速精准检测耳念珠菌的试剂盒以及其检测方法。 [0007]本发明的目的通过 下述技术方案予以实现。 [0008]一种快速精准检测耳念珠菌的试剂盒， 包括上引物、 下引物及探针， 所述上引物具 有如序列1所示的核苷酸序列， 所述下引物具有如序列2所示的核苷酸序列， 所述探针具有 如序列3所示的核苷酸序列。 [0009]优选的， 所述探针的5 ’端标记有荧 光基团， 所述探针的3 ’端标记有淬灭基团。 [0010]由上述任一方案优选地是， 所述 荧光基团为FAM， 所述淬灭基团为TAMRA。 [0011]由上述任一方案优选地是， 该 试剂盒的检测最低检测限为1  CFU/PCR。 [0012]一种检测耳念珠菌的方法， 包括如下步骤： [0013]第一步， 以待测样品D NA为模板， 利用快速精准检测耳念珠菌的试剂盒对所述待测 样品DNA进行PCR检测； [0014]第二步， 基于检测结果， 该方法以非疾病诊断为目的， 确定待测样品中是否含有耳 念珠菌； [0015]一种快速精准检测耳念珠菌的试剂盒， 包括上引物、 下引物及探针， 所述上引物具 有如序列1所示的核苷酸序列， 所述下引物具有如序列2所示的核苷酸序列， 所述探针具有 如序列3所示的核苷酸序列。说　明　书 1/6 页 3 CN 114958837 B 3