(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210824479.5 (22)申请日 2022.07.14 (71)申请人 江苏海洋大学 地址 222005 江苏省连云港市海州区苍梧 路59号 (72)发明人 葛红星　董志国　尼倩　李前方　 窦强　 (74)专利代理 机构 南京专信知识产权代理有限 公司 326 05 专利代理师 郝晓燕 (51)Int.Cl. C12Q 1/6876(2018.01) C12Q 1/6869(2018.01) C12Q 1/6806(2018.01) C12N 15/11(2006.01)G06Q 10/06(2012.01) G06Q 50/02(2012.01) (54)发明名称 一种快速准确评估大水面生态渔业资源多 样性的方法 (57)摘要 本发明涉及大水面生态渔业资源评估的技 术领域， 尤其涉及一种快速准确评估 大水面生态 渔业资源多样性的方法， 包括以下步骤： 采样点 位布设、 样品采集、 环境DNA提取与扩增、 高通量 测序和宏条码检测与渔业资源多样性分析， 本发 明能够快速、 准确评估大水面生态渔业资源多样 性， 有效解决了传统的鱼类监测方法具有的生态 破坏性、 且对调查者专业形态学知识要求高、 调 查工作量大等问题。 权利要求书1页 说明书2页 CN 115044663 A 2022.09.13 CN 115044663 A 1.一种快速准确评估大水面生态渔业资源多样性的方法， 其特征在于： 包括以下步骤： 采样点位布设、 样品采集、 环境DNA提取与扩增、 高通量测序和宏条码检测与渔业资源多样 性分析。 2.根据权利要求1所述的一种快速准确评估大水面生态渔业资源多样性的方法， 其特 征在于： 采样点 位布设应该选取 水库/湖泊典型 水域5个以上采集样品。 3.根据权利要求2所述的一种快速准确评估大水面生态渔业资源多样性的方法， 其特 征在于： 典型 水域包括具有异质性的水域、 水库进水口、 出 水口、 近岸和近中心区域。 4.根据权利要求1所述的一种快速准确评估大水面生态渔业资源多样性的方法， 其特 征在于： 样品采集的样品包括水样和沉积物样品。 5.根据权利要求4所述的一种快速准确评估大水面生态渔业资源多样性的方法， 其特 征在于： 采集水库中的水包括上层水， 且 取水量为0.5 ‑1L， 现场用0.45um的混合纤维素酯膜 滤膜抽滤或冷藏后24h内实验室抽滤。 6.根据权利要求4所述的一种快速准确评估大水面生态渔业资源多样性的方法， 其特 征在于： 沉积物样品采集中使用采泥器在采水样的地点采集沉积物， 沉积物通过晒卷滤池 中的大颗粒物质后分别保存于无菌的可密封广口瓶中， 所述大颗粒物质包括大块石头与者 植物枝干 。 7.根据权利要求1所述的一种快速准确评估大水面生态渔业资源多样性的方法， 其特 征在于： 样品采集中采样器材每次使用前均需要清洗避免交叉感染。 8.根据权利要求1所述的一种快速准确评估大水面生态渔业资源多样性的方法， 其特 征在于： 环境DNA提取与扩增中分别向样品组织中加入裂解缓冲液和蛋白酶K， 56℃水浴裂 解后， 使用DNA提取试剂盒提取水样或沉积物样品DNA； NDA提取试剂盒包括Power  Water  DNA提取试剂 盒与DNeasy  Blood and Tissue DNA提取试剂盒中的任意一种； 样品DNA利用 当地水域物种线粒体细胞色素b， 12S、 16S或者COI中的任意 一个序列设计引物进行扩增。 9.根据权利要求1所述的一种快速准确评估大水面生态渔业资源多样性的方法， 其特 征在于： 高通量测序和宏条码检测： 扩增后的序列经液氮冷冻后加干冰速运到生物公司进 行高通量测序和宏条码检测， 注释每 个序列所代 表的物种信息 。 10.根据权利要求1所述的一种快速准确评估大水面生态渔业资源多样性的方法， 其特 征在于： 渔业资源多样性分析： 根据比对的物种信息， 进行物种相 对丰富度、 Alpha多样性、 Shannon‑Wiener指数、 Simpso n指数和C haol指数分析 渔业资源多样性。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115044663 A 2一种快速准确评估大水面生态 渔业资源多样性的方 法 技术领域 [0001]本发明涉及大水面生态渔业资源评估的技术领域， 尤其涉及一种快速准确评估大 水面生态渔业资源多样性的方法。 背景技术 [0002]大水面渔业在我国水产养殖领域具有重要地位， 其面积、 产量分别占全国淡水渔 业的46％、 15.42％。 然而， 当前大水面渔业面临着投苗靠经验和缺乏有效生态调控的问题 可能导致水库、 湖泊生态失衡， 甚至蓝 藻爆发等问题。 而大水面生态渔业生产过程中无论是 合理投苗还是生态调控， 都需要快速、 准确的评估渔业资源多样性。 当前， 大水面生态渔业 资源评估主要采用现场捕捞和形态学鉴定， 不仅费时费力而且准确度不高， 难以快速准确 评估渔业资源多样性。 发明内容 [0003]本发明的目的是为了解决背景技术中存在的缺点， 而提出的一种快速准确评估大 水面生态渔业资源多样性的方法。 [0004]为达到以上目的， 本发明采用的技术方案为： 一种快速准确评估大水面生态渔业 资源多样性的方法， 包括以下步骤： 采样点位布设、 样品采集、 环境DNA提取与扩增、 高通量 测序和宏条码检测与渔业资源多样性分析。 [0005]优选的， 采样点 位布设应该选取 水库/湖泊典型 水域5个以上采集样品。 [0006]优选的， 典型水域包括具有异质性的水域、 水库进水口、 出水口、 近岸和近中心区 域。 [0007]优选的， 样品采集的样品包括水样和沉积物样品。 [0008]优选的， 采集水库中的水包括上层水， 且取水量为0.5 ‑1L， 现场用0.45um的混合纤 维素酯膜滤膜抽滤或冷藏后24h内实验室抽滤。 [0009]优选的， 沉积物样品采集中使用采泥器在采水样的地点采集沉积物， 沉积物通过 晒卷滤池中的大颗粒物质后分别保存于无菌的可密封广口瓶中， 所述大颗粒物质包括大块 石头与者 植物枝干 。 [0010]优选的， 样品采集中采样器材每次使用前均需要清洗避免交叉感染。 [0011]优选的， 环境DNA提取与扩增中分别向样品组织中加入裂解缓冲液和蛋白酶K， 56 ℃水浴裂解后， 使用DNA提取试剂盒提取水样或沉积物样品DNA； NDA提取试剂盒包括Power   Water DNA提取试剂 盒与 DNeasy Blood and Tissue DNA提取试剂 盒中的任意一种； 样品 DNA 利用当地水域物种线粒体细胞色素b， 12S、 16S或者COI中的任意一个序列设计引物进 行扩增。 [0012]优选的， 高通量测序和宏条码检测： 扩增后的序列经液氮冷冻后加干冰速运到生 物公司进行高通 量测序和宏条码检测， 注释每 个序列所代 表的物种信息 。 [0013]优选的， 渔业资源多样性分析： 根据比对的物种信息， 进行物种相对丰富度、 Alp ha说　明　书 1/2 页 3 CN 115044663 A 3