(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210752604.6 (22)申请日 2022.06.29 (71)申请人 湖北省农业科 学院畜牧兽医研究所 地址 430064 湖北省武汉市洪山区南湖瑶 苑特4号畜牧所 (72)发明人 吴俊静　刘晓哲　彭先文　乔木　 周佳伟　孙华　梅书棋　李梓芃　 徐忠　张宇　宋忠旭　赵海忠　 李良华　 (74)专利代理 机构 武汉智嘉联合知识产权代理 事务所(普通 合伙) 42231 专利代理师 万青青 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12N 15/11(2006.01)C12Q 1/6858(2018.01) C12Q 1/6869(2018.01) (54)发明名称 一种影响猪肌内脂肪含量性状的分子标记 及应用 (57)摘要 本发明公开了一种猪肌内脂肪含量性状相 关基因ADI G的分子标记， 它是含猪ADI G基因第一 内含子的DNA片段， 其核苷酸序列如序列表SEQID   NO： 1(长度为488bp)所示， 其中， 该分子 标记的核 苷酸序列的2 02bp处有 一个G>A突变位点。 本发明 利用现有的PCR和测序技术， 发现此多态位点与 猪肌内脂肪含量性状显著相关， 为猪肌内脂肪含 量性状的分子标记辅助育种提供了一个新的分 子标记， 对猪肉质性状的研究有一定帮助。 权利要求书1页 说明书6页 序列表2页 附图2页 CN 114959066 A 2022.08.30 CN 114959066 A 1.一种影响猪肌内脂肪含量性状的分子标记， 其特征在于： 该分子标记位于ADIG基因 中， 其核苷酸序列如序列表SEQ  ID NO： 1所示， 该分子标记的核苷酸序列的202bp处存在一 个G>A突变位 点。 2.一种用于获得权利要求1所述分子标记的引物对， 其特 征在于： 该引物对为： 正向引物： 5 ’ ‑CAGCCTCTGCCCACTCAT‑3’ 负向引物： 5 ’ ‑CTGGGACTCTAG GTTAAGAAAT‑3’。 3.一种权利要求1所述分子标记 的获得办法， 其特征在于： 以硒都黑猪基因组DNA为模 板， 采用以下引物对： 正向引物： 5 ’ ‑CAGCCTCTGCCCACTCAT‑3’ 负向引物： 5 ’ ‑CTGGGACTCTAG GTTAAGAAAT‑3’ 进行PCR扩增， 其获得的分子标记为SEQ  ID NO： 1或SEQ  ID NO： 2。 4.一种利用权利要求1所述分子标记鉴定猪肌内脂肪含量性状的方法， 其特征在于： 包 括以下步骤： 1)引物对的设计 根据猪ADIG基因的基因 组序列(GenBan k登陆号： NC_010459.5)设计以下引物对： 正向引物 ADIG‑E1‑F： 5'CAGC CTCTGCCCACTCAT 3'， 反向引物 ADIG‑E1‑R： 5'CTGGGACTCTAG GTTAAGAAAT 3'； 2)PCR扩增 利用上述引物在硒都黑猪混合基因组DNA池中进行PCR扩增， PCR反应体系50 μL， 体系中 各组分的浓度为100ng模板DNA、 10 ×buffer(含Mg2+)4 μL、 上述上下游引物各0.5 μM、 2.5 μM   dNTPs、 1U  TaqDNA聚合酶； PCR的运行程序为： 95℃预热2 min； 94℃变性20s， 58℃退火40s， 72℃延伸60s， 共35个循 环； 72℃延伸10mi n； 4℃保存， PCR产物用1.5％琼脂糖凝胶电泳检测； 3)PCR产物纯化及测序， 通过得到如SEQ  ID NO： 1或SEQ  ID NO： 2的核苷酸序列确定分 子标记的基因型。 5.一种权利要求1所述分子标记在猪肌 内脂肪含量性状相关分子标记辅助育种中的应 用， 其特征在于： 携带GA杂合基因型个 体肌内脂肪含量高于其 他基因型个 体。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114959066 A 2一种影响猪肌内脂肪含量性状的分子标记及应用 技术领域 [0001]本发明属于家畜分子标记筛选技术领域， 具体涉及一种影响猪肌内脂肪含量性状 的分子标记及应用。 背景技术 [0002]随着社会经济 发展和人民生活水平的提高， 高品质、 多元化、 个性化消费需求的优 质猪肉市场需求激增， 但是当前综合性状优良、 特色鲜明、 满足中国人口味的猪肉产品不 多， 猪肉产品市场供需不匹配 问题逐渐显现， 因此， 猪肉品质遗传改良已越来越被重视。 肌 内脂肪含量(Intramuscular  Fat,IMF)是影响肉品质性状的一项重要指标， 它与猪肉的嫩 度、 风味、 多汁性存在显著相关(Lu  etal.2008)。 然而， 猪肉质性状较难活体测量， 很难用常 规育种技术进 行遗传改良， 因此寻找控制猪肉质性状(尤其是IMF)的关键分子标记， 应用于 该性状的分子 辅助育种， 对提高猪肉品质性能具有重要意 义。 [0003]ADIG(Adipogenin)脂肪生成素是一种全新的基因， 仅在脂肪细胞中表达， 而不在 基质血管细胞群中表达(Kim  et al.,2005)。 Liu 等(2017)通过对牛肌卫星细胞的诱导分化 发现， ADIG过表达可以促进转分化并增加肌卫星细胞中的脂肪积累。 Zhang等(2021)在对云 岭牛背最长肌转录组分析中也发现， ADIG基因在脂肪细胞质膜中特异性表达， 可以调节脂 肪组织分化和增殖， ADIG基因在体外的过表达会促进脂肪堆积， 相反， 缺乏ADIG基因则会抑 制脂肪生成。 而 有关猪ADIG基因对脂肪细胞的影响还未 见报道。 [0004]申请人前期利用RNA ‑seq技术对比分析了IMF极端个体背最长肌组织基因表达差 异， 发现ADIG基因显著差异表达。 因此， 申请人扩增了猪ADIG基因的部分核苷酸序列， 利用 该序列进 行了多态性变异 位点的筛选鉴定及与IMF性状的关联分析研究， 以期获得与猪IMF 性状相关的新分子 育种标记。 发明内容 [0005]本发明的目的在于扩增猪ADIG基因的第一内含子DNA序列， 以寻找该基因序列突 变位点多态性， 获得一种与猪肌内脂肪含量性状相关的分子标记， 并利用该分子标记辅助 选择目标性状的猪， 提高育种效率。 [0006]本发明通过以下技 术方案实现： [0007]第一方面， 本发明获得了一种猪肌内脂肪含量性状相关基因ADIG的分子标记， 它 是含猪ADIG基因第一内含子的DNA片段， 其核苷酸序列如序列表SEQ  ID NO： 1(长度为 488bp)所示， 其中， 该分子标记的核苷酸序列的202bp处有一个G>A突变位 点。 [0008]第二方面， 本发明还提供了一种用于获得 上述分子标记的引物对， 该引物对为： [0009]正向引物： 5 ’ ‑CAGCCTCTGCCCACTCAT‑3’(SEQ ID NO： 3)， [0010]负向引物： 5 ’ ‑CTGGGACTCTAG GTTAAGAAAT‑3’(SEQ ID NO： 4)。 [0011]第三方面， 本发明还提供了一种上述分子标记的获得办法， 以硒都黑猪基因组D NA 混合池为模板， 采用以下引物对：说　明　书 1/6 页 3 CN 114959066 A 3