(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211179268.7 (22)申请日 2022.09.27 (71)申请人 江苏迅睿生物技 术有限公司 地址 221000 江苏省徐州市经济技 术开发 区新微半导体加速 器17、 19、 2 2号楼 (72)发明人 陈新利　魏爱琪　李美琼　傅明华　 张亭　聂晶　 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) G01N 33/569(2006.01) G01N 33/543(2006.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 一种引物、 探针、 组合物、 层析试纸及制备方 法、 试剂盒 (57)摘要 本申请公开了一种引物、 探针、 组合物、 层析 试纸及制备方法、 试剂盒； 属于生物检测技术领 域； 所述检测SARS ‑nCoV病毒 的引物探针组合特 异性扩增并检测SARS ‑nCoV病毒的E基因。 本申请 研发的引物探针可 以保证快速、 高效、 特异性地 对目的片段进行扩增， 扩增时间仅需10min， 最低 检测拷贝数可达200  copies/ml； 扩增产物检测 型式为试纸条， 肉眼鉴定， 无需仪器辅助； 且扩增 过程无需变温和类似于PCR仪等复杂装置， 只需 要将反应温度控制在42℃即可。 权利要求书2页 说明书9页 附图3页 CN 115537473 A 2022.12.30 CN 115537473 A 1.一种引物， 用于检测2019 ‑nCoV的E基因， 其特 征在于， 核苷酸序列为： 上游引物序列： CGT TTCGGAAGAGAYAG GTACGTTAATAGT； 下游引物序列： [5’ ‑Biotin]‑AGATCAGGAACTCTAGA AGAATTCAGATTTTTA。 2.一种探针， 用于检测2019 ‑nCoV的E基因， 其特 征在于， 核苷酸序列为： 探针序列： [5’FAM]‑TCGATTGTGTGCGTACTGCTGCA ATATTGT[THF]A ACGTGAGTCT TGT‑[3’C3spacer]。 3.一种组合物， 是用于检测SA RS‑nCoV病毒的引物探针组合物， 所述引物探针组合物特 异性扩增并检测SARS ‑nCoV病毒的E基因； 其特征在于： 扩增所述E基因的特异性引物的核苷酸序列为： 上游引物序列： CGT TTCGGAAGAGAYAG GTACGTTAATAGT； 下游引物序列： [5’ ‑Biotin]‑AGATCAGGAACTCTAGA AGAATTCAGATTTTTA； 所述探针的核苷酸序列为： 探针序列： [5’FAM]‑TCGATTGTGTGCGTACTGCTGCA ATATTGT[THF]A ACGTGAGTCT TGT‑[3’C3spacer]。 4.一种层析试纸， 其特征在于， 包括PVC底板、 样品垫、 结合垫、 检测垫、 吸水垫； 样品垫、 结合垫、 检测垫、 吸水垫沿着溶液流动方向依次布置在所述底板上， 样品垫与结合垫部 分重 合， 结合垫与检测垫部 分重合， 吸水垫与检测垫部 分重合； 结合垫与检测垫重合 1mm， 吸水垫 与检测垫 重合1mm； 其中， 所述结合垫中包含： FAM抗体 ‑显色颗粒复合物、 DNP ‑显色颗粒复合物， 所述FAM抗 体‑显色颗粒复合物经由显 色乳胶微球与FAM抗体 混合反应形成； 所述DNP ‑显色颗粒复合物 经由显色乳胶微球与DNP混合反应形成； 其中， 所述检测垫包括硝酸纤维素膜， 在检测垫上设置检测区域、 、 质控区域； 检测区域 经由链霉亲和素加载在硝酸纤维素膜上形成； 质控区域其经 由对DNP抗体加载在硝酸纤维 素膜上形成。 5.根据权利 要求4所述的一种层析试纸， 其特征在于， DNP抗体由DNP多克隆抗体与磷酸 缓冲液组成。 6.根据权利要求5所述的一种层析试纸， 其特征在于， 所述的显色颗粒均为红色乳胶微 球。 7.根据权利要求6所述的一种层析 试纸， 其特 征在于， 所述乳胶微球粒径为 400nm。 8.如权利要求 4所述的一种层析 试纸的制备 方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： 第一步骤， 制备显色颗粒溶液， 将显色颗粒溶液与FAM抗体混合反应形成FAM抗体 ‑显色 颗粒复合物， 将 显色颗粒溶液与DNP混合反应形成DNP ‑显色颗粒复合物， 将FAM抗体 ‑显色颗 粒复合物、 DNP ‑显色颗粒复合物加载到结合垫上； 第二步骤， 链霉亲和素和DNP抗体分别加载在检测垫上的检测区域和质控区域； 第三步骤， 制备试纸大板： 样本垫、 结合垫、 检测垫、 吸水垫依次布置在PVC底板上形成 试纸大板； 其中， 结合垫与检测垫 两者部分重合， 吸水垫与检测垫 两者部分重合；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115537473 A 2第四步骤， 制备层析 试纸， 将步骤三中制备的试纸大板进行裁切， 制备成检测试纸。 9.一种试剂盒， 其特 征在于， 所述试剂盒包括如权利要求3所述的组合物。 10.一种试剂盒， 其用于检测2019 ‑nCoV， 其特征在于， 所述试剂盒包括： 扩增反应液、 酶 冻干粉及 层析试纸； 所述扩增反应液中包 含： 缓冲液                29.4 μl 10 μM上游引物           2 μl 10 μM下游引物           2 μl 10 μM探针              0.6 μl DEPC‑H2O              3.5 μl 激活剂                2.5 μl 总RNA                 10 μl； 上游引物序列为： CGT TTCGGAAGAGAYAG GTACGTTAATAGT； 下游引物序列为： [5’ ‑Biotin]‑AGATCAGGAACTCTAGA AGAATTCAGATTTTTA； 探针序列： [5’FAM]‑TCGATTGTGTGCGTACTGCTGCA ATATTGT[THF]A ACGTGAGTCT TGT‑[3’C3spacer]； 所述层析 试纸包括如权利要求 4至7任意 一项所述的层析 试纸。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115537473 A 3