(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210765933.4 (22)申请日 2022.06.30 (71)申请人 河南农业大 学 地址 450000 河南省郑州市文化路95号 (72)发明人 康国章　李鸽子　刘金　柳海涛　 王鹏飞　韩巧霞　刘国芹　葛强　 (74)专利代理 机构 北京高沃 律师事务所 1 1569 专利代理师 黄明光 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种小麦钾高效利用的dCAPS分子标记及其 应用 (57)摘要 本发明提供了一种小麦钾高效利用的dCAPS 分子标记及其应用， 属于生物技术领域， 所述 dCAPS分子标记是TaHAK1 ‑2B的分子特异检测标 记， 所述dCAPS分子标记的核苷酸序列如SEQ  ID  NO:1所示。 该分子标记特异性强， 能精准、 快速的 鉴定出钾高效利用小麦品种。 权利要求书1页 说明书7页 序列表5页 附图5页 CN 114891921 A 2022.08.12 CN 114891921 A 1.一种小麦钾高效利用的dCAPS分子标记， 其特征在于， 所述dCAPS分子标记是TaHAK1 ‑ 2B的分子特异检测标记， 所述dCAP S分子标记的核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示。 2.权利要求1所述的dCAP S分子标记在鉴定钾高效利用小麦中的应用。 3.一种用于检测权利要求1所述的dCAPS分子标记的引物组， 其特征在于， 所述引物组 由如SEQ ID NO:2所示的上游引物dCAPS ‑F序列和SEQ  ID NO:3所示的下游引物dCAPS ‑R序 列组成。 4.权利要求3所述的引物组在鉴定钾高效利用小麦中的应用。 5.用于鉴定钾高效利用小麦的试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒包含权利要求3所述的 引物组。 6.一种鉴定小麦钾高效利用的dCAP S分子标记方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： (1)提取小麦样本基因 组DNA； (2)以权利要求3所述引物组对步骤(1)基因 组DNA进行PCR扩增； (3)将步骤(2)的PCR产物回收， 连接载体后转入大肠杆菌过夜培养， 挑取阳性克隆， 提 取质粒； 进行双酶切， 经酶切后电泳， 得到酶切产物； (4)若得到两条电泳条带， 则该小麦样本为钾高效利用小麦， 若仍为一条电泳条带， 则 该小麦样品为非钾高效利用小麦 。 7.如权利 要求6所述的方法， 其特征在于， 所述双酶切采用HgaI酶和载体上自带XbaI酶 进行酶切。 8.如权利要求6所述的方法， 其特征在于， 所述PCR扩增的反应体系包含： 2 ×KOD OneTM  PCRMasterMix  25 μL， 10 μM上游引物0.3 μL， 10 μM下游引物0.3 μL， 样本DNA200  ng， 补充ddH2O 至总体积5 0 μL。 9.如权利要求6所述的方法， 其特征在于， 所述PCR扩增的反应程序为： 94℃预变性 3min； 98℃变性10s， 5 5℃退火3 0s， 68℃延伸3mi n， 循环32次； 68℃延伸5mi n。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114891921 A 2一种小麦钾高效利用的dCAPS分子标记及其应用 技术领域 [0001]本发明属于生物技术领域， 尤其涉及一种小麦钾高效利用的dCAPS分子标记及其 应用。 背景技术 [0002]钾是植物生长发育所必需的大量营养元素之一， 它参与了植物一系列生理和生化 反应， 对植物生长发育具有重要的作用。 但由于土壤次生矿物固定以及植物对根际有效钾 耗竭等因素 的影响， 目前已导致耕地土壤中植物可利用的有效钾含量偏低， 造成了部分地 区严重缺钾的现象。 并且钾肥当季利用效率仅有40％， 已成为困扰中国农业可持续发展的 重要因素。 因此， 提高土壤中钾吸收利用效率， 培育钾高效利用小麦新品种， 是我国农业可 持续发展 亟待解决的问题。 [0003]基于目前分子标记辅助育种技术已在不同作物中应用， 如作物中也有一些关键农 艺性状被开发出相关的功 能标记， 且应用于相关性状的遗传改良、 种质资源创制和 新品种 选育等。 然而， 目前小麦钾胁迫耐性基因功能标记开 发还很匮乏， 关于小麦HAK1在钾胁迫耐 性中的分子标记的研究还未 见报道。 发明内容 [0004]有鉴于此， 本发明的目的在于提供一种小麦钾高效利用的dCAPS分子标记及其应 用， 该分子标记能够快速、 高效、 准确地筛 选出小麦钾高效利用新品种。 [0005]为了实现上述发明目的， 本发明提供了以下技 术方案： [0006]本发明提供了一种小麦钾高效利用的dCAPS分子标记， 所述dCAPS分子标记是 TaHAK1‑2B的分子特异检测标记， 所述dCAP S分子标记的核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示。 [0007]本发明提供了所述的dCAP S分子标记在鉴定钾高效利用小麦中的应用。 [0008]本发明提供一种用 于检测所述的dCAPS分子标记的引物组， 所述引物组由如SEQ   ID NO:2所示的上游引物dCAP S‑F序列和SEQ  ID NO:3所示的下游引物dCAP S‑R序列组成。 [0009]本发明提供 所述的引物组在鉴定钾高效利用小麦中的应用。 [0010]本发明提供用于鉴定钾高效利用小麦的试剂盒， 所述试剂盒包 含所述的引物组。 [0011]本发明提供一种鉴定小麦钾高效利用的dCAP S分子标记方法， 包括如下步骤： [0012](1)提取小麦样本基因 组DNA； [0013](2)以所述引物组对步骤(1)基因 组DNA进行PCR扩增； [0014](3)将步骤(2)的PCR产物回收， 连接载体后转入大肠杆菌过夜培养， 挑取阳性克 隆， 提取质粒； 进行双酶切， 经酶切后电泳， 得到酶切产物； [0015](4)若得到两条电泳条带， 则该小麦样本为钾高效利用小麦， 若仍为一条电泳条 带， 则该小麦样品为非钾高效利用小麦 。 [0016]优选的， 步骤(3)所述双酶切采用Hg aI酶和载体上自带 XbaI酶进行酶切。 [0017]优选的， 所述P CR扩增的反应体系包含： 2 ×KOD OneTM PCR Master Mix 25 μL， 10 μ说　明　书 1/7 页 3 CN 114891921 A 3