(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210766741.5 (22)申请日 2022.06.30 (71)申请人 湖南家辉生物技 术有限公司 地址 410205 湖南省长 沙市高新 开发区麓 谷麓景路2号 (72)发明人 曾桥　刘鑫林　薛斌　 (74)专利代理 机构 北京高沃 律师事务所 1 1569 专利代理师 张梦泽 (51)Int.Cl. C12N 15/12(2006.01) C12N 15/57(2006.01) C07K 14/775(2006.01) C12N 9/48(2006.01) C12Q 1/6883(2018.01) G01N 33/68(2006.01)C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6869(2018.01) (54)发明名称 一种家族性高胆固醇血症的致病基因突变 体、 蛋白、 引物对、 试剂、 试剂盒及应用 (57)摘要 本发明属于生物医学技术领域， 具体涉及一 种家族性高胆固醇血症的致病基因突变体、 蛋 白、 引物对、 试剂、 试剂盒及应用。 所述致病基因 突变体包括APOB基因突变体和/或PCSK9基因突 变体； 所述APOB基因突变体与野 生型APOB基因相 比具有c.3998G>A突变， 所述PCSK9基因突变体与 野生型PCSK9基因相比具有c.277C>A突变。 本发 明所述致病基因突变体为与家族性高胆固醇血 症相关的新突变体， 新突变体与家族性高胆固醇 血症的发病密切相关， 所述致病突变体可用于家 族性高胆固醇血症的分子诊断及与相关疾病的 鉴别诊断， 并且快速、 准确、 高效。 权利要求书1页 说明书20页 序列表11页 附图5页 CN 115216477 A 2022.10.21 CN 115216477 A 1.一种家族性高胆固醇血症的致病基因突变体， 其特征在于， 所述致病基因突变体包 括APOB基因突变 体和/或PCSK9基因突变 体； 所述APOB基因突变体与野生型APOB基因相比具有c.3998G>A突变， 所述PCS K9基因突变 体与野生型PCSK9基因相比具有c.27 7C>A突变。 2.一种家族性高胆固醇血症的致病突变体蛋白， 其特征在于， 所述致病突变体蛋白包 括APOB突变 体蛋白和/或PCSK9突变 体蛋白； 所述APOB突变体蛋白与野生型APOB基因编码的蛋白相比， 第1333位氨基酸由精氨酸突 变为谷氨酰胺， 所述PCSK9突变体蛋白与野生型PCSK9基因编码的蛋白相比， 第93位氨基酸 由精氨酸突变为丝氨酸。 3.权利要求1所述的致病基因突变体或权利要求3所述的致病突变体蛋白在制备检测 家族性高胆固醇血症的试剂盒中的应用； 所述试剂 盒包括分子遗传学诊断试剂 盒、 产前基因诊断试剂 盒或辅助防治家族性高胆 固醇血症试剂盒。 4.用于检测权利要求1所述的致病基因突变体或权利要求3所述的致病突变体蛋白的 试剂在制备检测家族性高胆固醇血症的试剂盒中的应用； 所述试剂 盒包括分子遗传学诊断试剂 盒、 产前基因诊断试剂 盒或辅助防治家族性高胆 固醇血症试剂盒。 5.一种用于检测权利要求1所述的致病基因突变体或权利要求3所述的突变体蛋白的 试剂， 其特 征在于， 所述试剂包括 抗体、 探针、 引物对和质谱检测试剂中的至少一种。 6.一种用于检测权利要求1所述的致病基因突变体的引物对， 其特征在于， 用于检测所 述APOB基因突变体的引物对的上游引物APOB ‑F的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示， 下游引 物APOB‑R的核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示； 用于检测所述PCSK9基因突变体 的引物对的上游引物PCSK9 ‑F的核苷酸序列如SEQ  ID  NO.31所示， 下游引物PCSK9 ‑R的核苷酸序列如SEQ  ID NO.32所示。 7.一种用于检测家族性高胆固醇血症的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括权利要 求5所述的试剂。 8.一种用于检测家族性高胆固醇血症的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括权利要 求6所述的引物对。 9.根据权利要求8所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒中还包括测序引物和PCR扩 增所需要的试剂。 10.权利要求5所述的试剂、 权利要求6所述的引物对或权利要求7～9任一项所述的试 剂盒在制备检测家族性高胆固醇血症的试剂盒中的应用； 所述试剂 盒包括分子遗传学诊断试剂 盒、 产前基因诊断试剂 盒或辅助防治家族性高胆 固醇血症试剂盒。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115216477 A 2一种家族性高胆固醇血症的致病基因 突变体、 蛋白、 引物对、 试剂、 试剂盒及应用 技术领域 [0001]本发明属于生物医学技术领域， 具体涉及 一种家族性高胆固醇血症的致病基因突 变体、 蛋白、 引物对、 试剂、 试剂盒及应用。 背景技术 [0002]家族性高胆固醇血症又称家族性高β 脂蛋白血症， 是儿童期最常见的遗传性高脂 血症， 也是脂质代谢疾病中最严重的一种， 可导致各种危及生命的心血管疾病并发症出现， 是冠状动脉疾病的一种重要危险因素。 家族性高胆固醇血症包括纯合子型和杂合子型， 两 者发病率存在较大差异， 纯合子型极为罕见， 发病率约为百万分之一， 杂合子型发病率约为 1/500。 常见的临床表现有： 1)高脂血症、 皮肤及跟腱黄色瘤、 角膜弓或角膜老年环、 动脉粥 样硬化、 早发性心血管疾病以及出现反复性的多关节炎和腱鞘炎， 主要累及踝关节、 膝关 节、 腕关节和近端指间关节， 抗炎药物不能抑制。 [0003]目前已发现三种基因缺陷可导致家族性高胆固醇血症： 低密度脂蛋白受体 (LDLR)、 载脂蛋白B(APOB， MIM  144010)以及枯草溶菌素转化酶(PCSK9， MIM  603776)。 由 APOB基因突变所致家族性高胆固醇血症属常染色体显性遗传。 APOB基因位于染色体 2p24.1， 基因全长42.6kb， 包含29个外显子和28个内含子， 编码4563个氨基酸； 在血浆中 ApoB以两种形式的亚型存在， 一种为ApoB48， 另一种为ApoB100， 前一种由肠专门合 成， 而后 一种则是由肝脏专门合 成， 这两种形式的ApoB蛋白都是由同一个基因同一个长度超过16kb 的mRNA前转录子进行编码的， 具有共用相同的氨基末端。 而从结构研究中看， ApoB48具有与 ApoB100的氨基末端47％的相似度， 而其羧基末端在成熟的ApoB100的2151氨基酸残基附 近。 也就是说可以将ApoB48 理解为一个缺少LDL受体 区域的ApoB100蛋 白。 ApoB蛋 白是乳糜 微粒和低密度脂蛋白上最主要的载脂蛋白， 可以形成低密度脂蛋白胆固醇， 通过肝脏细胞 表面的低密度脂蛋白受体(LDLR)介导的细胞内吞作用将 脂质代谢的残 余物进行清除。 已有 的研究发现， APOB基因上的多个位点的改变可引起的基因结构变化可能导致编 码的载脂蛋 白ApoB和胆固醇构成的脂蛋白复合物与肝脏细胞上的低密度脂蛋白受体(LDLR)结合能力 下降， 导致低密度脂蛋白胆固醇在血浆中聚积而 无法被排出体外， 从而发生高脂血症， 严重 者可引起动脉粥样硬化和冠心病。 [0004]家族性高胆固醇血症也可由PCSK9基因突变引起， 属常染色体显性遗传。 PCSK9基 因位于染色体1p32.3， 全长约32kb， 包含12个外显子， 其启动子区域含有保守的Sp1和SRE (sterolregulatory element)位点， 受细胞内胆固醇水平的调节。 该基因可转录并翻译大 小 约 6 9 2 个 氨 基 酸 的 蛋 白 ，即 神 经 细 胞 凋 亡 调 节 转 化 酶 1 ( n e u r a l   apoptosisregulate dconvertase1， NARC ‑1)， 是哺乳动物前蛋白转化酶的第9种， 隶属于枯 草溶菌素蛋白酶中蛋白酶K亚家族。 PCSK9基因突变可以导致其编码蛋白的功能发生改变， 使得血液中胆固醇水平出现完全相反的变化， 与CHD的发生密切相关。 功能获得型突变通过 增加PCSK9的功能， 降低LDLR的表达， 升高血浆LDL ‑C浓度， 促使脂质在血管内皮堆积而诱发说　明　书 1/20 页 3 CN 115216477 A 3