(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211146880.4 (22)申请日 2022.09.20 (71)申请人 圣湘生物科技股份有限公司 地址 410000 湖南省长 沙市长沙高新技术 产业开发区麓松路680号 (72)发明人 苏静明　娄萍萍　马洪昌　任小梅　 刘佳　戴立忠　 (74)专利代理 机构 北京精金石知识产权代理有 限公司 1 1470 专利代理师 杨佩佩 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 一种多病原体的联合检测试剂盒 (57)摘要 本发明提供了一种病毒检测试剂盒， 可以同 时检测日本乙型脑炎病毒、 森林脑炎病毒、 西尼 罗病毒和登革病毒， 试剂盒中包 括SEQ ID NO:1‑ 13所示的序列组成的脑炎病原 体检测组合物。 本 发明的试剂盒检测时只需进行一次PCR检测， 就 能得出4个检测结果， 且PCR过程无干扰， 检测结 果准确。 提高了检测效率、 缩短了检测周期， 降低 了检测成本， 为临床医生提供较为充分的快速诊 断以及排除不同病原体感染的依据， 缩短临床医 生对患者病情诊断的时间， 加快对患者实施治疗 措施。 权利要求书1页 说明书9页 附图3页 CN 115521995 A 2022.12.27 CN 115521995 A 1.一种脑炎病原体检测引物组合物， 其特征在于， 所述脑炎病原体检测引物组合物包 括SEQ ID NO:1、 SEQ  ID NO:2、 SEQ  ID NO:4、 SEQ  ID NO:5、 SEQ  ID NO:7、 SEQ  ID NO:8、 SEQ  ID NO:10、 SEQ  ID NO:11、 SEQ ID NO:12所示序列的引物。 2.一种脑炎病原体检测组合物， 其特征在于， 包括权利要求1所述的脑炎病原体检测引 物组合物， 还包括序列为SEQ  ID NO:3、 SEQ ID NO:6、 SEQ ID NO:9、 SEQ ID NO:13的探针中 的一种或多种。 3.权利要求1所述的脑炎病原体检测引物组合物或权利要求2所述的脑炎病原体检测 组合物在制备日本乙型脑炎病毒、 森林脑炎病毒、 西尼罗病毒和登革病毒联合检测试剂盒 中的应用。 4.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于， 所述脑炎病原体检测组合物通过单管PCR 反应完成扩增。 5.一种病 毒检测试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒包括权利要求1所述的脑炎病原体检 测引物组合物或权利要求2所述的脑炎病原体 检测组合物。 6.根据权利要求5所述的病 毒检测试剂 盒， 其特征在于， 所述脑炎病原体检测组合物在 试剂盒中分开 提供或混合 提供。 7.根据权利要求6所述的病毒检测试剂盒， 其特征在于， 所述病毒检测试剂盒还包括 PCR buffer、 逆转录酶、 DNA聚合酶、 dNTPs、 催化DNA聚合酶所需要的金属阳离子中的一种或 多种。 8.根据权利 要求7所述的病毒检测试剂盒， 其特征在于， 所述逆转录酶为Neoscript  RT 酶， 所述DNA聚合酶为H ‑Taq酶。 9.一种用于非诊断目的检测脑炎病原体的方法， 其特 征在于， 所述方法包括以下步骤： 1)使用权利要求1所述的脑炎病原体检测引物组合物或权利要求2所述的脑炎病原体 检测组合物或权利要求5 ‑8任一项所述的试剂盒对病原体核酸进行荧 光定量PCR； 2)获得并分析 结果。 10.根据权利要求9所述的非诊断目的检测脑炎病原体的方法， 其特征在于， 所述荧光 定量PCR为单 管荧光定量PCR。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115521995 A 2一种多病原体的联合检测试剂盒 技术领域 [0001]本发明属于病毒检测领域， 具体涉及脑炎致病微生物的核酸诊断， 更具体涉及日 本乙型脑炎病毒、 森林脑炎病毒、 西尼罗病毒和登革病毒联合检测试剂盒及检测方法。 背景技术 [0002]日本乙型脑炎病毒(Japanese  encephalitis  virus， JEV)简称乙脑病毒， 是一种 造成人类乙型脑炎(俗称大脑炎)的病原体。 在分类学上， 乙脑病毒属于披膜病毒科 (Togaviridae)， 黄病毒属第 1亚群(Flavivirus  belongs to subgroup  1)， 为单股RNA病 毒， 它会造成高热、 意识障碍、 抽搐、 呼吸衰竭及脑膜刺激征等， 通过蚊虫媒介快速传播， 且 病死率高。 [0003]森林脑炎病毒是一种能够引起森林地区的自然疫源性疾病即森林脑炎的病原体， 为单股正链RNA病毒， 属黄病毒科黄病毒属， 因为蜱虫是其主要传播媒介， 又称蜱传脑炎病 毒(tick‑borne encephalitis virus， TEV)。 森林脑炎病 毒感染主要表现为高热、 头痛、 意 识障碍、 脑 膜刺激征等， 严重者可在数小时内因昏迷、 抽搐、 延髓麻痹 而死亡。 [0004]西尼罗病毒(West  nile virus， WNV)属 黄病毒科黄病毒属， 为单股正链RNA病毒， 能够导致急性传染的人畜共患病西尼罗病毒病。 感染西尼罗病毒后会伴有头痛、 发热、 皮 疹、 淋巴结肿大等症状， 少数 人可表现为西尼罗病毒性脑炎、 脑 膜脑炎和脑 膜炎。 [0005]登革病毒(Dengue  virus， DENV)属于黄病毒科黄病毒属的一个血清型亚群， 为单 股正链RNA病毒， 以抗原性为依据可将其分为1、 2、 3、 4共 四个血清型， 主要通过埃及伊蚊和 白纹伊蚊进行传播， 能够引起人类登革热以及发病率和致死率都较高的登革出血热和登革 休克综合征。 [0006]病毒性脑炎是指一大类能够导致中枢神经系统感染性疾病， 累及脑膜和脑实质的 炎症， 导致病毒性脑炎的病原体种类多种多样， 其中主要的病原体有肠道病毒、 疱疹病毒、 虫媒病毒、 副黏病毒、 弹状病毒以及腺病毒等， 临床上常见的有肠道病毒71型、 柯萨奇病毒 A16型、 脊髓灰质炎病毒、 日本乙型脑炎病毒、 登革病毒、 西尼罗病毒、 圣路易脑炎病毒、 森林 脑炎病毒、 东方马 脑炎病毒、 西方马 脑炎病毒、 麻疹病毒、 风疹病毒等。 该类病原体引起的疾 病临床表现大致相似， 患者均 表现为发热、 头痛、 意识障碍、 抽搐以及 肢体活动障碍等症状， 单从临床表现和体征很难区分感染病原体， 不同病原体引起的感染， 其治疗方案不同。 [0007]病毒性脑炎病原体可以通过粪便、 飞沫、 蚊虫、 鸟类进行传播， 引起严重病毒性脑 炎的病原体具有感染力强、 传播范围广、 发病率和病死率较高等特点， 可引起广泛的脑炎和 脑膜炎疾病， 早诊断、 早治疗、 早隔离是防治的根本。 但由于病毒 型脑炎致病原种类繁多， 给 疾病诊断和预防带来巨大 的挑战， 建立一种准确快速的鉴别诊断方法意义重大。 在实验室 诊断手段中， 一般采取对单个病原体或少数几个病原体进行核酸检测或者病毒分离和鉴 定， 这样时间较长， 不利于对疫情快速采取应对措施。 因此亟需一种不但准确 性高、 病原体 覆盖广的快速检测方法。 [0008]申请号为CN201710204099.0的中国专利中公开了一种用于病毒性脑炎快速诊断说　明　书 1/9 页 3 CN 115521995 A 3