(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210581596.3 (22)申请日 2022.05.26 (71)申请人 贵州医科 大学附属医院 地址 550001 贵州省贵阳市 云岩区贵医街 28号 (72)发明人 王季石　张曦　方琴　 (74)专利代理 机构 北京国坤专利代理事务所 (普通合伙) 11491 专利代理师 赵红霞 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) G01N 21/31(2006.01) C12N 15/11(2006.01) C12M 1/34(2006.01)C12M 1/00(2006.01) (54)发明名称 一种基于血液肿瘤预后基因HO-1的检测试 剂盒 (57)摘要 本发明属于检测试剂盒技术领域， 公开了一 种基于血液肿瘤预后基因HO ‑1的检测试剂盒， 所 述基于血液肿瘤预后基因HO ‑1的检测试剂盒包 括： 30倍浓缩洗涤液 15mL×1瓶； 检测包被板12孔 ×8条； 样品稀释液5mL ×1瓶； 显色剂A液5mL ×1 瓶； 显色剂B液5mL ×1/瓶； 终止 液5mL×1瓶； 标准 品0.6mL×1瓶； 标准品稀释液1.6mL ×1瓶； 封板 膜2张； 密封袋1个； 壳体、 底 板各1个； 所述检测试 剂包括荧光定量PCR探针引物组。 本发明以HO ‑1 作为分子标记， 检测HO ‑1在血液系统肿瘤中的相 对表达量， 解决HO ‑1可作为血液系统恶 性肿瘤预 后判别指标遗留的问题， 并便于开展分子靶点水 平监测。 权利要求书2页 说明书5页 附图1页 CN 115094136 A 2022.09.23 CN 115094136 A 1.一种基于血液肿瘤预后基因HO ‑1的检测试剂盒， 其特征在于， 所述基于血液肿瘤预 后基因HO‑1的检测试剂盒包括： 30倍浓缩洗涤液15mL ×1瓶； 检测包被板12 孔×8条； 样品稀 释液5mL×1瓶； 显色剂A液5mL ×1瓶； 显色剂B液5mL ×1/瓶； 终止液5mL ×1瓶； 标准品0.6mL ×1瓶； 标准品稀释液1.6mL ×1瓶； 封板膜2张； 密封袋1个； 壳体、 底板各1个。 2.如权利要求1所述基于血液肿瘤预后基因HO ‑1的检测试剂 盒， 其特征在于， 所述检测 试剂包括 荧光定量PCR探针引物组； 所述荧光定量PCR探针引物组包括用于扩增血液肿瘤预后 基因HO‑1变异位点的上下游 引物以及针对所述变异位 点的MGB探针。 3.如权利要求1所述基于血液肿瘤预后基因HO ‑1的检测试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒壳体包括上壳体与下壳体， 所述上壳体表面设置样品滴加区与结果显示区， 分别为圆孔 状镂空区域和方 形镂空区域。 4.一种应用如权利要求1～3任意一项所述基于血液肿瘤预后基因HO ‑1的检测试剂盒 的基于血液肿瘤预后基因HO ‑1的检测试剂盒的制备方法， 其特征在于， 所述基于血液肿瘤 预后基因HO ‑1的检测试剂盒的制备 方法包括以下步骤： 步骤一， 采用聚碳 酸酯材料进行试剂盒上壳体、 下壳体以及底板的制备； 步骤二， 将所述 荧光定量PCR探针引物组包被至所述检测包被板并封闭； 步骤三， 使用热压工艺进行底板与所述检测包被板的热压， 使用 胶水进行上壳体与下 壳体的连接后， 得到基于血 液肿瘤预后基因HO ‑1的检测试剂盒。 5.如权利要求4所述的基于血液肿瘤预后基因HO ‑1的检测试剂盒的制备方法， 其特征 在于， 所述步骤一中， 选择可拆卸的上壳体和下壳体作为试剂盒的壳体， 并在上壳体上开设 样品滴加区和反应结果显示区； 所述步骤二中， 将所述荧光定量PCR探针引物组包被至所述检测包被板后， 喷涂封闭 液， 进行静置； 静置后甩掉封闭液， 防湿干燥。 6.一种应用如权利要求1～3任意一项所述的基于血液肿瘤预后基因HO ‑1的检测试剂 盒的基于血液肿瘤预后基因H O‑1的检测方法， 其特征在于， 所述基于血液肿瘤预后基因H O‑ 1的检测方法包括： (1)将试剂盒中的原倍标准品在小试管中进行稀释， 并分别设空白孔、 标准孔、 待测样 品孔； 在检测包被板上标准品准确加样40 μL， 待测样品孔中加样品稀释液30 μL， 再加待测样 品10 μL， 样品最终稀释度为5倍； (2)加样将样品加于检测板孔底部， 不触及孔壁， 轻晃混匀； 用封板膜封板后置36℃温 育30min； 将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水3 0倍稀释后备用； (3)揭掉封板膜， 弃去液体， 甩干； 每孔加满洗涤液， 静置30s后弃去， 重复5次， 拍 干； 每 孔加入检测试剂40 μL， 空白孔除外； 用封板膜封板后置36℃温育30min； 将30倍浓缩洗涤液 用蒸馏水3 0倍稀释后备用； (4)每孔先加入显色剂A40μL， 再加入显色剂B  40μL， 轻轻震荡混匀， 37℃避光显色 15min； 每孔加终止液40 μL， 终止反应； 以空白空调零， 450nm波长依序测量各孔的吸光度OD 值， 测定在加终止液后15mi n内进行。 7.如权利要求6所述的基于血液肿瘤预后 基因HO‑1的检测方法， 其特征在于， 所述标准 品的稀释包括：权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115094136 A 2160ngL， 5号标准品， 140 μL的原倍标准品加入140 μL标准品稀释液； 80ngL， 4号标准品， 140 μL的5号标准品加入140 μL标准品稀释液； 40ngL， 3号标准品， 140pL的4 号标准品加入140 μL标准品稀释液； 20ngL， 2号标准品， 140 μL的3号标准品加入140 μL标准品稀释液； 10ng/L， 1号标准品， 140pL的2号标准品加入140pL标准品稀释液。 8.如权利要求6所述的基于血液肿瘤预后 基因HO‑1的检测方法， 其特征在于， 所述显色 剂A按照质量份数计， 由水杨酸衍生物 40～60份、 金属盐30～40份、 酸催 化剂15～20份、 稳定 剂5～10份、 固化剂5～10份以及余 量灭菌去离 子水组成； 所述显色剂B按照质量份数计， 由水杨酸衍生物30～50份、 金属盐20～30份、 酸催化剂 10～15份、 稳定剂3～5份、 固化剂3～5份以及余 量灭菌去离 子水组成。 9.如权利要求8所述的基于血液肿瘤预后 基因HO‑1的检测方法， 其特征在于， 所述水杨 酸衍生物是苯乙烯化合物加成于水杨酸化合物上而生成的含有1～4个甲基苄基单元 的水 杨酸衍生物； 所述金属盐是Zn、 Mg、 Ca、 Cu或Cd的金属盐中的任意 一种； 所述酸催化剂为盐酸、 硫酸、 磷酸或醋酸中的任意 一种； 所述固化剂为糖类和高分子聚合物的混合物， 所述糖类为海藻糖、 蔗糖、 聚蔗糖和葡聚 糖中的任意一种或几种的混合物， 所述高分子聚合物为聚乙二醇、 聚乙烯吡 咯烷酮、 羧甲基 纤维素和聚丙烯酰胺中的任意 一种或几种的混合物。 10.如权利要求6所述的基于血液肿瘤预后基因HO ‑1的检测方法， 其特征在于， 所述空 白对照孔 不加样品及检测试剂， 其 余各步操作相同。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115094136 A 3