(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210607890.7 (22)申请日 2022.05.31 (71)申请人 浙江工业大 学之江学院 地址 312030 浙江省绍兴 市柯桥区越州大 道958号 申请人 南京林业大 学 (72)发明人 何倩倩　赵儒楠　祝遵崚　 (74)专利代理 机构 南京灿烂知识产权代理有限 公司 323 56 专利代理师 王江南 (51)Int.Cl. C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6806(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) (54)发明名称 一种基于全基因组数据开发的雷公鹅耳枥 SSR引物及其 鉴定方法 (57)摘要 本发明公开了一种基于全基因组数据开发 的雷公鹅耳枥SSR引物及其鉴定方法， 所述雷公 鹅耳枥SSR引物序列如SEQ  ID NO： 1~8所示的一 种或几种。 本发明基于全基因组序列， 通过生物 信息学分析软件开发雷 公鹅耳枥SSR分子标记引 物， 为开发雷公鹅耳枥SSR标记提供了一个便捷 的有效方法。 权利要求书2页 说明书6页 序列表3页 附图1页 CN 114908088 A 2022.08.16 CN 114908088 A 1.一种基于全基因组数据开发的雷公鹅耳枥SSR引物， 其特征在于： 所述雷公鹅耳枥 SSR引物序列如SEQ  ID NO： 1～8所示的一种或几种： SEQ ID NO ： 1上游 引物 ： tg tcaaa ctca tg tttg tcg ttt ； 下游 引物 ： ttggaggatatggataacgc； SEQ ID NO ： 2上游 引物 ： tta tta tttcttg cttgg cag tt ； 下游 引物 ： tgtaaaattgtattcatacccattgat； SEQ ID NO： 3上游引物： tgta atttttaatgagaaactcaatcg； 下游引物： atatgtca acacaaagggaggg； SEQ ID NO： 4上游引物： atctata gtggtggccggtg； 下游引物： g atcctccaattatttggcact； SEQ ID NO ： 5上游 引物 ： g caa ta ttta caaag tga tgg ca ； 下游 引物 ： tggtttgtttgtagttgttattcttga； SE Q I D N O ： 6 上 游 引物 ： t c ta c ca ca a tg c t t tg ca g a t ； 下 游 引物 ： tgcgccttttaataaagcagt； SEQ ID NO： 7上游引物： atgtg atccacgtgacgc； 下游引物： gc ctcaaaattaaaacagtgtcat； S E Q I D N O ： 8 上 游 引 物 ： t a a a a c a t g g a t t g g g g c a t ； 下 游 引 物 ： aagcacttatattccttgacacca。 2.一种基于全基因组数据开发的雷公鹅耳枥SSR鉴定方法， 其特征在于： 由以下步骤组 成： (1)提取雷公鹅耳枥基因 组DNA； (2)以所述雷公鹅耳枥基因组DNA为模板， 用所述SEQ  ID NO： 1～8引物进行PCR反应， 并 对PCR产物进行检测。 3.根据权利要求2所述的基于全基因组数据开发的雷公鹅耳枥SSR鉴定方法， 其特征在 于： 所述提取雷公鹅耳枥基因 组DNA， 为采用CTAB法提取 雷公鹅耳枥基因 组DNA。 4.根据权利要求3所述的基于全基因组数据开发的雷公鹅耳枥SSR鉴定方法， 其特征在 于： 所述采用CTAB法提取雷公鹅耳枥基因组DNA， 为将雷公鹅耳枥粉末加入 经65℃水浴预热 的CTAB提取液， 然后加入分解 酶， 再加入巯基乙醇混匀， 再放入65℃水浴锅水浴0.5～1h； 常 温12000rpm离心10min， 取上清液， 加入等体积的抽提液， 摇晃混匀5～10min， 离心， 取上清 液， 加入预冷的异丙醇， 置于 –20℃冰箱中沉淀1h； 放入离心机12000rpm离心10min； 倒掉液 体， 加入75％酒精洗涤， 离心， 将沉淀风干， 加入 超纯水溶解。 5.根据权利要求4所述的基于全基因组数据开发的雷公鹅耳枥SSR鉴定方法， 其特征在 于： 所述抽提液， 为氯仿： 异戊醇体积比24： 1。 6.根据权利要求2所述的基于全基因组数据开发的雷公鹅耳枥SSR鉴定方法， 其特征在 于： 所述进行PCR反应， 其PCR反应体系为： 2X  Taq master Mix 10uL， 10 μmo1/L的上游引物： 0.75ul， 10 μmo1/L的下游引物0.75ul， DNA  50ng， 灭菌d dH20 7.5ul。 7.根据权利要求2所述的基于全基因组数据开发的雷公鹅耳枥SSR鉴定方法， 其特征在 于： 所述进行PCR反应， PCR扩增程序为： 94℃5min； 94℃40s， 52℃40s， 72℃120s， 35个循环, 最后72℃10mi n。 8.根据权利要求2所述的基于全基因组数据开发的雷公鹅耳枥SSR鉴定方法， 其特征在 于： 所述对PCR产物进行检测， 为用2％琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114908088 A 29.根据权利要求2所述的基于全基因组数据开发的雷公鹅耳枥SSR鉴定方法， 其特征在 于： 所述雷公鹅耳枥， 包括6种雷公鹅耳枥， 所述6种雷公鹅耳枥的种质居群为浙江 临安雷公 鹅耳枥、 湖北神农架雷公鹅耳枥、 贵州毕节雷公鹅耳枥、 广东乳源雷公鹅耳枥、 重庆南川雷 公鹅耳枥、 西藏 聂拉木雷公鹅 耳枥。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114908088 A 3