(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210375058.9 (22)申请日 2022.07.11 (71)申请人 重庆大学附属肿瘤医院 地址 400030 重庆市沙坪坝区汉渝路181号 (72)发明人 向廷秀　孙冉　程兆博　 (74)专利代理 机构 重庆市嘉允启行专利代理事 务所(普通 合伙) 50243 专利代理师 胡柯 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种基于ZNF334基因的检测试剂盒及应用 (57)摘要 本发明公开了一种基于ZNF334基因的检测 试剂盒及应用， 所述检测试剂盒包含ZNF334基因 的甲基化检测试剂及常规试剂， 所述ZNF334基因 的甲基化检测试剂对ZNF334基因在实体肿瘤中 的甲基化水平进行检测， 特异性甲基化引物对可 以与ZNF334基因DNA甲基化位点序列特异性结 合， 灵敏、 快速、 准确地检测ZNF334的甲基化水 平。 利用本发明的试剂盒， 可以在实体肿瘤的一 种或多种本中检测ZNF334的甲基化状态， 为实体 肿瘤的诊断、 风险预测、 预后判断提供依据， 效率 高、 成本低。 权利要求书1页 说明书10页 附图14页 CN 114990213 A 2022.09.02 CN 114990213 A 1.一种基于ZNF334基因的检测试剂盒， 其特征在于， 所述检测试剂盒包含ZNF334基因 的甲基化检测试剂及常规试剂； 所述常规试剂包括有聚合酶、 PCR反应缓冲液、 dNTPs、 去离 子水、 DNA修饰试剂； 所述ZNF334基因的甲基化检测试剂包含用于检测ZNF334基因表达的特异性引物对、 用 于检测ZNF334基因启动子甲基化状态的特异性引物对、 用于检测ZNF334基因启动子非甲基 化状态的特异性引物对、 用于提取样本DNA的提取 试剂； 所述用于检测ZNF3 34基因表达的特异性引物对的序列如下： 上游引物序列为5 ’ ‑GTCTCTGTG GGGTATCATGT ‑3’， 如SEQ ID No.1所示； 下游引物序列为5 ’ ‑GGCATCATCA ATGTCTGGGT‑3’， 如SEQ ID No.2所示； 所述用于检测ZNF3 34基因启动子甲基化状态的特异性引物对的序列如下： 上游引物序列为5 ’ ‑TGTGGTTCGGAAAGTCGGC‑3’， 如SEQ ID No.3所示； 下游引物序列为5 ’ ‑ACCTAACGAACCGAAAAAACG‑3’， 如SEQ ID No.4所示； 所述用于检测ZNF3 34基因启动子非甲基化状态的特异性引物对的序列如下： 上游引物序列为5 ’ ‑ATTGTGGTTTGGAAAGTTGGT‑3’， 如SEQ ID No.5所示； 下游引物序列为5 ’ ‑AAAACCTAACAAACCAAAAAAACA‑3’， 如SEQ ID No.6所示。 2.根据权利 要求1所述的一种基于ZNF334基因的检测试剂盒， 其特征在于， 所述样本选 自外周血、 粪便、 组织和细胞中的一种或多种。 3.根据权利要求2所述的ZNF334基因的甲基化检测试剂在制备用于实体肿瘤的辅助诊 断、 风险预测、 预后判断的试剂盒中的应用。 4.根据权利要求3所述的ZNF334基因的甲基化检测试剂在制备适用于以下检测方法的 试剂盒中的应用， 所述检测方法具体步骤 包括： S1、 提取待测个 体的样本DNA； S2、 利用甲基化检测试剂检测样本DNA中的ZNF3 34基因的启动子甲基化状态； S3、 根据S2检测得到的 甲基化状态， 对待测个 体的实体肿瘤情况进行评判。 5.根据权利要求3所述的ZNF334基因的甲基化检测试剂在制备用于实体肿瘤的辅助诊 断、 风险预测、 预后判断的试剂盒中的应用， 其特征在于， 所述实体肿瘤包括有结肠癌和乳 腺癌。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114990213 A 2一种基于ZNF3 34基因的检测试剂盒及应用 技术领域 [0001]本发明属于生物医学诊断技术领域， 具体涉及一种基于ZNF334基因的检测试剂盒 及应用。 背景技术 [0002]癌症是严重威胁人类生存和社会发展的重大疾病， 是21世纪最严重的公共个卫生 问题之一。 我国居民的癌症发病率总体呈现上升趋势。 在我国， 最常见的肿瘤为肺癌、 胃癌、 肝癌、 结肠癌和乳腺癌。 [0003]结肠癌是我国最常见的消化道恶性肿瘤之一， 发病率和肿瘤相关死亡率在各类恶 性肿瘤中均位居第三。 早期发现， 早期诊断， 早期治疗是提高结肠癌治疗效果的最有效方 法。 由于结肠癌早期无特异性临床表现且缺 乏高灵敏度和特异性的早期诊断技术， 大部分 患者确诊时已是癌症晚期， 术后5年存活率极低(低于20％)。 而乳腺癌是女性最常见的恶心 肿瘤之一， 近年来 发病率逐年增高， 但近30年来乳腺癌死亡率并未明显增加。 这说明通过开 展乳腺癌筛查及早诊早治工作， 及治疗效果的提高， 可以逐步降低乳腺癌对女性健康的威 胁。 [0004]肿瘤早期诊断通常取决于两个关键因素： 检查指 标的高度特异敏感和检测方法的 无创易行。 粪便隐血检测和钡剂灌肠气钡双重造影是当前结肠癌筛查最为广泛的方法， 但 由于各自技术限制， 特异性差、 漏诊率高。 电子结肠镜检查是结肠癌诊断的金标准， 但属于 侵入性操作， 不适宜早期筛查。 而现行结肠癌筛查应用的经典肿瘤标志物如CEA、 CA199特异 性及敏感性较差。 常见的乳 腺癌筛查方法包括： X线检查、 超声检查等， 但灵敏度和特异度均 有待提高。 因此， 亟需寻找及开发出经济简 便、 高灵敏度特异度的分子标志物进 行肿瘤癌的 早期筛查和诊断。 [0005]近年来， DNA甲基化在结肠癌中的研究取得较大进展， 为实体肿瘤的早期诊 断、 风 险评估、 预后判断和干预治疗提供了新的思路和靶点。 以往的研究主要侧重于探索单个抑 癌基因的甲基化状态与肿瘤癌临床病理学指标的相关性， 以及其在实体肿瘤发生 发展中的 作用和机制， 验证这些基因可否作为实体肿瘤早期诊断或预测预后的分子标志物。 目前已 经通过独立研究证实的具有较高甲基化频率的基因包括： APC、 SEPT9、 SFRP1/2、 RASSF1A、 MGMT和WIF1等。 [0006]随着分子生物学和分子检测技术的发展， 使用一些高通量的甲基化检测方法可以 实现同时检测多个甲基化位点， 但不同的高通量方法检测的甲基化位点各不相同， 结果的 重复性较差。 并且大多 数研究只是检测肿瘤中基因的甲基化情况， 缺少正常对照， 无法评价 其作为诊断指标的敏感性和特异性。 发明内容 [0007]本发明的目的是提供一种基于ZNF334基因的检测 试剂盒及其在辅助诊断待测个 体是否患有癌或预测待测个 体是否具有患 癌风险或判断待测个 体的癌预后情况中的应用。说　明　书 1/10 页 3 CN 114990213 A 3