(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210716077.3 (22)申请日 2022.06.22 (71)申请人 江苏申基生物科技有限公司 地址 210000 江苏省南京市江北新区智能 制造产业园 （智合园） 科创大道9号A2 栋402-28室 (72)发明人 黄磊　赵万年　沈奇　肖潇　 缪佳颖　 (74)专利代理 机构 南京材智汇知识产权代理事 务所(特殊普通 合伙) 32449 专利代理师 乔淑媛　吴玲燕 (51)Int.Cl. C07H 19/207(2006.01) C07H 21/02(2006.01) C07H 1/00(2006.01)C12N 15/11(2006.01) C12P 19/34(2006.01) (54)发明名称 一种含六元糖环结构的起始加帽寡核苷酸 引物及其制备方法和应用 (57)摘要 本发明提供了一种含六元糖环结构的起始 加帽寡核苷 酸引物及其制备方法和应用， 该含六 元糖环结构的起始加帽寡核苷酸引物的分子式 为m7GpppA2’OMepG， 其中m7G为N7‑甲基化的鸟苷或 任何鸟苷类似物， A为任何天然的、 修饰的或非天 然的腺苷或任何腺苷类似物。 本发 明提供的含六 元糖环结构的起始加帽寡核苷酸引物合成的 mRNA具有更低的免疫原性和更高的蛋白翻译效 率、 更高的稳定性。 权利要求书2页 说明书14页 附图1页 CN 115109110 A 2022.09.27 CN 115109110 A 1.一种含六 元糖环结构的起始加帽寡核苷酸引物， 其特 征在于， 其包 含以下结构： 其中， X1、 X2和X3分别独立的为O、 C H2或NH； Y1、 Y2和Y3分别独立的为O、 S、 Se或BH3； Ra为 Rb为 且当Ra为 时， Rb为 R1、 R2和R3、 R6、 R7、 R8独立的为氢、 羟基、 取代或未取代的O ‑烷基、 取代或未取代的S ‑烷 基、 取代或未取代的NH ‑烷基、 取代或未取代的N ‑二烃基、 取代或未取代的O ‑芳香基、 取代或 未取代的S ‑芳香基、 取代或未取代的NH ‑芳香基、 取代或未取代的O ‑芳烷基、 取代或未取代 的S‑芳烷基、 取代或未 取代的NH ‑芳烷基； R4和R5独立的为H、 OH、 烷基、 O ‑烷基、 卤素； B1和B2独立的为天然的、 或修饰的、 或非 天然的核苷碱基。 2.权利要求1所述的含六元糖环结构的起始加帽寡核苷酸引物的制备方法， 其特征在 于， 包括以下步骤： (1)中间体K的合成： 从山梨糖醇出发合成化合物A， 在化合物A的基础上 依次进行糖苷化、 磷酸化、 单磷酸咪唑化， 二磷酸化、 N7的甲基化、 多磷酸的咪唑化等反应， 合成中间体K； (2)磷酸酯 键连接的二核苷酸的制备： 通过亚磷酰胺单体与双取代核苷单体， 在四氮唑的作用下偶联形成第一个磷酸酯键， 通过酸作用， 脱除保护基， 然后引入第二个磷 酸， 最终水解得到磷酸酯 键连接的二核苷酸； (3)含六元糖环结构的起始加帽寡核苷酸引物 的合成： 中间体K与磷酸酯键连接的二核苷酸反应制备含六元糖环结构的起始加帽寡核苷 酸引物； 所述亚磷酰胺单体结构式为：权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115109110 A 2其中， R9为H、 OH、 烷基、 O ‑烷基、 卤素； R10为 氢、 羟基、 取代或未取代的O ‑烷基、 取代或未取代的S ‑烷基、 取代或未取代的NH ‑烷基、 取代 或未取代的N ‑二烃基、 取代或未取代的O ‑芳香基、 取代或未取代的S ‑芳香基、 取代或未取代 的NH‑芳香基、 取代或未取代的O ‑芳烷基、 取代或未取代的S ‑芳烷基、 取代或未取代的NH ‑芳 烷基； B3和B4独立的为天然的、 或修饰的、 或非 天然的核苷碱基。 3.权利要求1所述的含六元糖环结构的起始加帽寡核苷酸引物的应用， 其特征在于： 该 含六元糖环结构的起始加帽寡核苷酸引物的mRNA加帽， 使用T7  RNA聚合酶。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115109110 A 3