(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210737325.2 (22)申请日 2022.06.27 (71)申请人 爱科睿特生物医疗科技 （南京） 有限 公司 地址 210000 江苏省南京市江北新区华康 路142号加速 器六期03栋1-2层 (72)发明人 闫泉　熊永清　张浩淼　甄博文　 王莹　梁宁孝　 (74)专利代理 机构 南京众联专利代理有限公司 32206 专利代理师 王荷英 (51)Int.Cl. C12Q 1/689(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01)C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种同时检测肺炎衣原 体和沙眼衣原体DNA 的试剂盒及其应用 (57)摘要 本发明涉及一种同时检测肺炎衣原体和沙 眼衣原体DNA的试剂盒， 所述引物组、 探针组及试 剂盒可实现一次反应同时检测肺炎衣原体和沙 眼衣原体DNA， 是目前少见的同时检测两种衣原 体的试剂盒， 效率高、 特异性强， 为临床检验提供 辅助诊断的依据； 通过本技术方案的公开， 可 以 为非典型性病原体的鉴别诊断提供新的手段。 权利要求书1页 说明书5页 序列表2页 附图4页 CN 114921575 A 2022.08.19 CN 114921575 A 1.一种引物探针组， 其特征在于， 所述引物探针组用于同时检测肺炎衣原体和沙眼衣 原体DNA， 包 含可以同时检测肺炎衣原体和沙眼衣原体DNA的引物探针组； 其中， 肺炎衣原体和沙眼衣原体的引物对序列如SEQ  ID NO.1‑2所示， 肺炎衣原体和沙 眼衣原体的探针序列如SEQ  ID NO.3所示。 2.根据权利要求1所述的一种引物探针组， 其特征在于， 所述引物探针组还包括管家基 因引物对和管家基因探针， 管家基因引物对序列如SEQ  ID NO.4‑5所示， 管家基因探针序列 如SEQ ID NO.6所示。 3.根据权利要求2所述的一种引物探针组， 其特征在于， 所述肺炎衣原体和沙眼衣原体 探针的5’端标记有FAM发光基团， 3 ’端标记有荧光淬灭基团BHQ1； 管家基因探针的5 ’端标记 有CY5发光基团， 3 ’端标记有荧 光淬灭基团BHQ2。 4.一种同时检测肺炎衣原体和沙眼衣原体DNA的试剂 盒， 其特征在于， 包括权利要求1 ‑ 3任一项所述的引物探针组、 缓冲液、 dNTPs、 MgCl2、 DEPC水和Taq酶。 5.根据权利要求4所述的一种同时检测肺炎衣原体和沙眼衣原体DNA的试剂盒， 其特征 在于， 所述引物探针组中的引物在扩增体系中的终浓度为100 ‑1000nM； 所述引物探针组中 的探针在扩增体系中的终浓度为5 0‑500nM。 6.根据权利要求4所述的一种同时检测肺炎衣原体和沙眼衣原体DNA的试剂盒， 其特征 在于， 所述的试剂盒的检测样本为 咽拭子。 7.如权利要求1 ‑3任一项所述的引物探针组在同时检测肺炎衣原体和沙眼衣原体DNA 的试剂盒中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114921575 A 2一种同时检测肺炎衣原体和沙眼衣原体DNA的试剂盒及其 应用 技术领域 [0001]本发明属于病原微生物分子生物学领域， 具体涉及一种同时检测肺炎衣原体和沙 眼衣原体DNA的试剂盒及其应用。 背景技术 [0002]衣原体(chlamydia)是一组极小的， 非运动性的， 专在细胞内生长的微生物。 衣原 体可分为4种， 即肺炎衣原体、 鹦鹉 热衣原体、 沙眼衣原体和牛衣原体。 衣原体为革兰阴性病 原体， 是一类能通过细菌滤器、 在细胞内寄生、 有独特发育周期的原核细胞性微生物。 衣原 体是一种比细菌小但比病毒 大的生物， 是专性细胞内寄生的、 近似细菌与病毒的病原体， 具 有两相生活环。 它没有合成高能化合物ATP、 GTP的能力， 必须由宿主细胞提供， 因而成为能 量寄生物， 多 呈球状、 堆状， 有细胞壁， 有细胞膜， 属原核细胞， 一般 寄生在动物细胞内。 目前 区分为沙眼、 肺炎、 鹦鹉与家畜等四种衣原体。 [0003]肺炎衣原体是一种病原体， 该病原体引起非典型性肺炎， 同时还可导致支气管炎、 咽炎、 鼻窦炎、 中耳炎、 虹膜炎、 心肌炎、 心内膜炎、 脑膜炎、 结节 性红斑等疾病， 也是艾滋病、 白血病的激发感染的重要病原菌之一。 另外流行病 学和病原学研究认为， 肺炎衣原体感染 与心血管疾病也有一定的相关性， 其中最常见 的为肺炎衣原体引起的呼吸道感染。 临床表 现多不典型， 通常以咽痛和声音嘶哑起病， 数日至七天后可出现咳嗽， 同时还可伴有低热， 白细胞计数大多正常， 血沉增快， 胸片可显示单侧节段性肺炎， 甚至病变广泛者可波及双肺 也可伴有胸膜炎或胸腔 积液。 [0004]沙眼衣原体除可导致沙眼外， 还是公认的性传播疾病的传染源之一。 在非淋菌性 尿道炎中， 几乎一半是 由沙眼衣原体传染造成的。 它还可以引起尿道综合征和性病性淋巴 肉芽肿、 男性尿道炎、 附睾炎、 女性不育、 子宫颈炎、 盆腔炎等。 新生儿通过产道感染可引起 新生儿眼炎或新生儿肺炎。 沙眼衣原体还可引起成人肺炎， 对孕妇危害也较大， 可造成宫外 孕、 流产、 死胎、 绒毛膜羊膜炎、 早产等。 [0005]多年来， 世界各地的医院及实验室均常规使用病原体分离培养法、 免疫学检查等 方法对衣原体进行检测， 但这些检测方法都存在许多难以克服的缺陷。 传统的衣原体分离 方法操作步骤繁琐， 条件要求较高， 检测周期长， 实验安全性和结果准确性相对难以保证； 免疫学检测法常采用酶联免疫吸附试验， 该法具有直观、 技术成熟、 特异性好的优点， 但耗 时、 操作繁琐、 灵敏度低、 假阳性高等限制了其在临床上的参 考价值。 [0006]近年来， 分子生物学技术如实时荧光PCR技术等的引入， 很大程度上改善了检测和 鉴定病原体的现状。 特别是多重荧光定量P CR是在实时荧光定量PCR技术基础上发展 出的多 重联检， 能够在同一个反应管中实现多个基因序列的扩增和特异 性检测， 在临床应用中， 可 同时检测并区分沙眼衣原体和肺炎衣原体， 有利于精确判断病情， 实现疾病的早期、 快速、 精准治疗。 多重PCR技术的成功实施需要解决以下几个关键技术 问题： (1)由于需要使用多 组引物/探针组合， 设计时需要避免不同引物/探针之间互相产生交联。 (2)避免每组引物/说　明　书 1/5 页 3 CN 114921575 A 3