(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210719304.8 (22)申请日 2022.06.23 (71)申请人 青岛汉唐生物科技有限公司 地址 266000 山东省青岛市高新 技术产业 开发区河东路3 69号 申请人 青岛硕景生物科技有限公司 (72)发明人 田永帅　杨帆　陈欢　刘嘉男　 王含　左雪梅　刘万建　宋金玲　 (74)专利代理 机构 青岛中天汇智知识产权代理 有限公司 37241 专利代理师 韩丽萍 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/6844(2018.01) C12N 15/11(2006.01)G01N 33/569(2006.01) G01N 33/558(2006.01) G01N 33/548(2006.01) G01N 33/58(2006.01) C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 一种同时检测新型冠状病毒核酸和抗原的 试剂盒及应用 (57)摘要 本发明属于生物 技术领域， 涉及一种同时检 测新型冠状病毒核酸和抗原的试剂盒及应用， 包 括样本保存液、 胶体金试剂卡和核酸反应体系， 核酸反应体系包括特异性标记引物， 特异性标记 引物包括F3、 B3、 FIP、 BIP和LB， F3的核苷酸序列 如SEQ ID NO.1所示， B3的核苷酸序列如SEQ  ID  NO.2所示； FIP的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所 示， BIP的核苷酸序列如SEQ  ID NO.4所示； LB的 核苷酸序列如SEQ  ID NO.5所示。 本发明结合了 新型冠状病毒核酸检测和抗原检测两种检测方 法， 比单一检测方法可信度更高， 并且不再依赖 于昂贵的实验器材和专业的实验环 境， 使居家核 酸自测成为可能。 权利要求书1页 说明书7页 附图2页 CN 115491437 A 2022.12.20 CN 115491437 A 1.一种同时检测新型冠状病 毒核酸和抗原的试剂 盒， 其特征在于， 包括样本保存液、 胶 体金试剂卡和核酸反应体系， 所述核酸反应体系包括特异性标记引物， 所述特异性标记引 物包括F3、 B3、 FIP、 BIP和LB， 所述F3的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示， 所述B3的核苷酸序 列如SEQ ID NO.2所示； 所述FIP的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示， 所述BIP的核苷酸序列 如SEQ ID NO.4所示； 所述 LB的核苷酸序列如SEQ  ID NO.5所示。 2.根据权利要求1所述的试剂 盒， 其特征在于， 所述样本保存液包括乙二胺四乙酸二钠 盐、 三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、 磷酸盐缓冲液和吐温20 。 3.根据权利要求2所述的试剂 盒， 其特征在于， 所述样本保存液的配制方法包括以下步 骤： 取0.5～3M的Tris ‑HCl溶液5mL、 0.1～1M的EDTA ‑2Na溶液1mL、 0.1～1M的PBS溶液50mL， 溶于400mL ddH2O中， 加入终浓度为1％～ 2％浓度的吐温20， 最后利用d dH2O定容至500mL。 4.根据权利要求1所述的试剂盒， 其特征在于， 所述核酸反应体系还包括反应buffer、 dNTP、 MgSO4、 海藻糖、 Bst酶、 逆转录酶和d dH2O。 5.根据权利要求4所述的试剂盒， 其特征在于， 所述核酸反应体系为粉末状的冻干制 剂。 6.根据权利要求1所述的试剂盒， 其特征在于， 所述胶体金试剂卡由样品垫、 耦合垫、 硝 酸纤维素膜、 吸水垫和底板组成， 样品垫、 耦合垫、 硝酸纤维素膜和吸水垫沿着水平方向顺 序连接在底板上； 所述硝酸纤维素膜上设有检测线T1、 检测线T2和质控线C， 所述检测线T1 包被6‑FAM捕获抗体， 所述检测线T2包被新冠病毒抗原捕获抗体， 所述质控线C包被生物素 捕获抗体； 检测线 T1和T2与质控线C沿着层析 方向顺序分布。 7.根据权利要求1所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒还包括鼻拭子、 胶体金试剂 卡盒和吸样管， 所述胶体金试剂卡放置在胶体金试剂卡盒内， 所述胶体金试剂卡盒具有容 置腔以及与容置腔相通的检测窗口和 加样孔。 8.权利要求1 ‑7任一项所述的试剂 盒在非疾病 诊断目的的新型冠状病 毒核酸和抗原检 测中的应用， 其特 征在于， 所述应用包括以下步骤： (1)利用鼻拭子采集样本后， 将鼻拭子与样本保存液充分接触， 放置10～ 20min； (2)将步骤(1)得到的样本保存液滴至核酸反应体系中， 充分混合至无固形物， 置于60 ～70℃下反应25～3 5min； (3)向步骤(2)反应完成的核酸反应体系中再次滴加步骤(1)的样本保存液， 充分混合 后， 吸取混合液滴至胶体金 试剂卡上， 12 ～18min后观察显色情况。 9.根据权利要求8所述的应用， 其特征在于， 所述步骤(3)中观察胶体金试剂卡上质控 线C和检测线T1和检测线T2的显色情况， 若质控线C和检测线T1和检测线T2均显紫红色， 为 阳性结果， 若只有质控线C显紫红色， 为阴性结果， 若质控线C和检测线T1和检测线T2均不显 色， 则结果无效。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115491437 A 2一种同时检测新型冠状病毒核酸和抗原的试剂盒及应用 技术领域 [0001]本发明属于生物技术领域， 具体涉及一种同时检测新型冠状病毒核酸和抗原的试 剂盒及应用。 背景技术 [0002]现有技术检测病原体， 例如检测新型冠状病毒， 一般采用mNGS测序法、 荧光PC R法、 恒温PCR法、 胶体金层析法、 荧光免疫层析法等。 其中， mNGS测序法、 荧光PCR法和恒温PCR法 检测的是病原体的遗传物质 ‑核酸， 例如新型冠状病毒的RNA； 胶体金层析法和荧光免疫层 析法检测的是病原体的蛋白， 例如新型 冠状病毒的S蛋白。 [0003]核酸检测是基于DNA半保 留复制的原理， 即在聚合酶和引物的参与下， 根据碱基互 补配对的原则复制成同样的核酸链。 核酸检测作为新型冠状病毒检测的金标准， 有着速度 快、 准确度高的优点， 但是也存在较大的缺陷， 例如荧光P CR检测时需要借助昂贵的荧光P CR 设备、 特定的实验室环境和专 业的操作人员， 因此对于仪器设备和操作 环境依赖性较大； 相 对而言， 恒温PCR法检测对仪器设备和环境依赖性则较小， 易于判读分析。 [0004]在针对病原体的蛋白的检测方法中， 胶体金检测法通过在耦合垫中放置胶体金颗 粒与抗原或抗体结合形成的复合物， 当样本通过层析 的作用经过耦合垫时， 样本中的抗原 会与复合物发生免疫反应， 进而 形成胶体金 ‑抗原抗体复合物， 经过硝酸纤维素膜时被膜上 包被的质控线和检测线抗体捕获， 胶体金聚集形成检测条带。 使用胶体金检测法检测新型 冠状病毒抗原， 具有检测速度快、 设备简单易操作的优点， 但是仅对抗原进行检测也存在一 定的缺陷， 即容 易发生假阳性， 且不能检测早期感染。 [0005]因此， 目前亟需一种准确度 高且易操作的检测装置及方法， 以减少检测对仪器设 备和环境的依赖性。 发明内容 [0006]本发明的目的在于解决现有技术中存在的上述问题， 提出了一种同时检测新型冠 状病毒核酸和抗原的试剂盒及应用， 该试剂盒包含恒温P CR扩增体系， 在胶体金试剂卡耦合 垫上放置修饰有生物素抗体和新冠抗原 抗体的胶体金颗粒混合物， 在胶体金试剂卡硝酸纤 维素膜上分别包被可以与6 ‑FAM、 新冠抗原结合的捕获抗体； 在检测应用时， 将恒温P CR的产 物与鼻拭子裂解液同时上样， 通过观察胶体金 试剂卡上胶体金聚集的情况进行 结果判断。 [0007]本发明的技 术方案是： [0008]本发明保护一种同时检测新型冠状病毒核酸和抗原的试剂盒， 包括样本保存液、 胶体金试剂卡和核酸反应体系， 所述核酸反应体系包括特异性标记引物， 所述特异性标记 引物包括F3、 B3、 FIP、 BIP和LB， 所述F3的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示， 所述B3的核苷酸 序列如SEQ  ID NO.2所示； 所述FIP的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示， 所述BIP的核苷酸序 列如SEQ ID NO.4所示； 所述 LB的核苷酸序列如SEQ  ID NO.5所示。 [0009]进一步的， 所述样本保存液包括乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA ‑2Na)、 三羟甲基氨基说　明　书 1/7 页 3 CN 115491437 A 3