(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210693000.9 (22)申请日 2022.06.17 (71)申请人 河南科技大 学 地址 471023 河南省洛阳市洛龙区开元 大 道263号 (72)发明人 李家创　李娇娇　庞玉辉　王春平　 张力予　卢颖欣　王雨昕　沈远洋　 闫雪芳　赵德辉　 (74)专利代理 机构 郑州睿信知识产权代理有限 公司 41119 专利代理师 李宁 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6841(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种华山新麦草染色体特异ND-FISH探针及 其应用、 试剂盒 (57)摘要 本发明涉及一种华山新麦草染色体特异 ND‑ FISH探针及其应用、 试剂盒， 属于分子遗传学技 术领域。 本发明的华山新麦草染色体特异ND ‑ F I S H 探 针 ，核 苷 酸 序 列 为 5 ’‑ CAATGGGCCTCTACTA TAGGGTGTTAGGCTCACACTAGAGA A‑3’， 5’端标记有荧光基团。 本发明的华山新麦 草染色体特异ND ‑FISH探针通过非变性荧光原位 杂交可以在四个小时内高效区分小麦与华山新 麦草染色体， 能极大提高小麦 ‑华山新麦草衍生 后代的筛选效率， 降低实验成本， 为利用近缘种 华山新麦草改良小麦育种， 拓宽小麦遗传多样性 奠定基础。 权利要求书1页 说明书5页 序列表1页 附图2页 CN 115011724 A 2022.09.06 CN 115011724 A 1.一种华 山新麦草染色体特异ND ‑FISH探针， 其特 征在于： 核苷酸序列为： 5’ ‑CAATGGGCCTCTACTATAG GGTGTTAGGCTCACACTAGAGA A‑3’； 5’端标记有荧 光基团。 2.根据权利要求1所述的华山新麦草染色体特异ND ‑FISH探针， 其特征在于： 所述荧光 基团为6‑FAM荧光基团。 3.一种如权利要求1或2所述的华山新麦草染色体特异ND ‑FISH探针在检测小麦 ‑华山 新麦草远缘杂交后代染色体组中华 山新麦草染色体中的应用。 4.根据权利要求3所述的华山新麦草染色体特异ND ‑FISH探针的应用， 其特征在于： 包 括以下步骤： 将待测样品的染色体制片后与华山新麦草染色体特异ND ‑FISH探针进行非变 性荧光原位杂交， 然后镜检或在缓冲溶 液中浸泡后干燥， 滴加封片 剂放置后再进行镜检。 5.一种如权利 要求1或2所述的华山新麦草染色体特异ND ‑FISH探针在制备用于检测小 麦‑华山新麦草远缘杂交后代染色体组中华 山新麦草染色体的产品中的应用。 6.试剂盒， 其特征在于： 含有如权利要求1或2所述的华山新麦草染色体特异ND ‑FISH探 针。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115011724 A 2一种华山新 麦草染色体特异ND ‑FISH探针及其应用、 试剂盒 技术领域 [0001]本发明涉及一种华山新麦草染色体特异ND ‑FISH探针及其应用、 试剂盒， 属于分子 遗传学技 术领域。 背景技术 [0002]华山新麦草(Psathyr ostachys huashanica  Keng； 2n＝2x＝14,NsNs)属于小麦族 (Triticeae)、 大麦亚族(Hordeinae)、 新麦草属(P sathyrostachys  Nevski)的多年生二倍 体自交不亲和植物。 主要分布在陕西省华山地区(W34 °25′～34°30′,E109°57′～110°05′)， 海拔400‑800的岩石坡地。 华山新麦草的植株呈簇生状， 根茎发达， 具有耐非生物胁迫(盐 碱、 高寒、 干旱和瘠薄等)和抗生物胁迫(锈病、 白粉病、 全蚀病、 赤霉病和 黄矮病等)等众多 优良性状， 是小麦抗逆抗病育种极为不可多得的种质。 上世纪八十年代， 华山新麦草和普通 小麦间的远缘杂交首次由陈漱阳等开展并获得了杂种后代， 试验过程是首先让普通小麦品 种7182与华山新麦草杂交， 然后通过幼胚拯救技术获得了F1代杂种， F1代与小麦亲本回交 获得了小麦 ‑华山新麦草属间杂种七倍体材料H8911(2n＝7x＝49,AABBDDNs)， 即在小麦42 条染色体的基础上附加了7条华山新麦草的染色体。 通过H8911的自交或者与其他小麦杂 交， 收获了一批具有优良农艺性状的小麦 ‑华山新麦草衍生后代材料。 这些材料通常因为华 山新麦草染色体的导入， 而表现出外源 亲本华山新麦草多抗， 耐胁迫的特性， 尤其是对多种 小麦常见病害， 如条锈病、 白粉病等， 普遍具有较好的抗性。 利用染色体工程创制出多种类 型的携带外源染色体的小麦 ‑华山新麦草新种质， 对于丰富小麦遗传多样性， 挖掘外源优异 基因， 以及小麦育种的创新与突破具有重要意义。 鉴定小麦 ‑华山新麦草衍生后代中是否含 有华山新麦草染色体是对该材料进行分析 的第一步。 目前， 最常用的鉴定方法是通过基因 组原位杂交和EST ‑STS分子标记的方法进 行分析。 基因组原位杂交鉴定程序复杂， 完整流程 需要两天时间； 使用EST ‑STS鉴定时， 来自七个同源群的几百对EST ‑STS引物常需要一周左 右的筛选时间。 因此， 对小麦 ‑华山新麦草远缘杂交后代中华山新麦草 染色体的进 行快捷和 准确鉴定是成为了当前研究者和育种家所面临的 “瓶颈”问题。 [0003]缩略语和关键术语定义 [0004]EST‑STS： 表达序列标签， EST是指在物种的cDNA文库中随机挑选克隆进行测序而 得到的序列合集。 STS是指针对合集中的序列， 再度筛选表达次数多且长度合适的序列， 该 序列在合 集中的丰度较高。 发明内容 [0005]本发明的目的是提供一种华山新麦草染色体特异ND ‑FISH探针， 通过非变性荧光 原位杂交能够高效地 鉴别出小麦背景中的外源华 山新麦草染色体。 [0006]本发明还提供了华 山新麦草染色体特异ND ‑FISH探针的应用以及试剂盒。 [0007]为了实现以上目的， 本发明的华山新麦草染色体特异FISH探针所采用的技术方案 是：说　明　书 1/5 页 3 CN 115011724 A 3