(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210629462.4 (22)申请日 2022.06.06 (71)申请人 天津市水产研究所 地址 300221 天津市河西区解 放南路442号 (72)发明人 徐晓丽　刘厚孚　罗璋　李媛媛　 张连英　蔡琰　 (74)专利代理 机构 北京睿智保诚专利代理事务 所(普通合伙) 11732 专利代理师 马欢欢 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12R 1/645(2006.01) (54)发明名称 一种假想蛋白基因及其引物探针组和用于 检测二尖梅奇酵母的应用 (57)摘要 本发明提供了一种假想蛋白基因及其引物 探针组和用于检测二尖梅奇酵母的应用， 属于二 尖梅奇酵母定量检测技术领域。 所述用于检测二 尖梅奇酵母的基因片段的 核苷酸序列如 SEQIDNO.1所示， 包含所述基因片段的假想蛋白 基因的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示， 用于扩增 所述基因片段的引物探针组如SEQIDNO.3～5所 示。 本发明提供的用于检测二尖梅奇酵母的基因 片段及其引物探针组， 具有灵敏度高、 特异性强、 检测准确性高的优点， 能够定量检测河蟹中携带 的二尖梅奇酵母的数量， 对于由二尖梅奇酵母引 发疾病的防控具有重要意 义。 权利要求书1页 说明书5页 序列表2页 附图2页 CN 114807427 A 2022.07.29 CN 114807427 A 1.一种用于检测二尖梅奇酵母的基因片段， 其特征在于， 所述基因片段的核苷酸序列 如SEQ ID NO.1所示。 2.一种包含权利要求1所述基因片段的假想 蛋白基因， 其特征在于， 所述假想 蛋白基因 的核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示。 3.一种用于扩增权利要求1所述基因片段的引物探针组， 其特征在于， 所述上游引物的 核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示， 下游引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.4所示， 探针的核苷 酸序列如SEQ  ID NO.5所示。 4.如权利 要求3所述的引物探针组， 其特征在于， 所述探针的5 ′端标记有荧光基团FAM， 3′端标记有淬灭基团BHQ1。 5.一种权利要求3或4所述的引物探针组和权利要求1所述的基因片段用于制备检测二 尖梅奇酵母试剂盒的应用。 6.一种用于检测二尖梅奇酵母的试剂盒， 其特征在于， 包括权利要求3或4所述的引物 探针组、 阳性对照参 考品和阴性对照参 考品。 7.如权利要求6所述的试剂盒， 其特征在于， 所述阳性对照参考品为权利要求1所述的 基因片段， 所述阴性对照参 考品为无菌水。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114807427 A 2一种假想蛋白基因及其引物探针组和用于 检测二尖梅奇酵母 的应用 技术领域 [0001]本发明涉及 二尖梅奇酵母定量检测技术领域， 尤其涉及 一种假想蛋白基 因及其引 物探针组和用于检测二尖梅奇酵母的应用。 背景技术 [0002]中华绒螯蟹俗称河蟹， 是我国重要的淡水养殖 品种之一。 近年来， 我国大力推广稻 渔综合种养， 以实现 “一水两用， 一田双收， 稻渔双赢 ”的目的。 河蟹作为北方地区最适合稻 田养殖的品种， 发展迅速。 随着养殖规模的增大， 病害 逐渐增多， 从2018年开始， 北方地区河 蟹主产地养殖 的中华绒螯蟹出现一种新的病害， 主要症状为病蟹反应迟钝、 围心腔 内可见 大量白色乳状液体， 养殖户称其为 “牛奶病”。 该病随苗种传播， 死亡率高达100％， 造成严重 危害。 [0003]前期研究发现， 河蟹 “牛奶病”病原为二尖梅奇酵母， 目前国标渔药中尚无有效治 疗药物。 开展病原早期检测， 选择不携带二尖梅奇酵母的中华绒螯蟹苗种进行养殖是预防 该疾病的最有效办法。 目前， 已有2种二尖梅奇酵母PCR检测方法公布(CN112210619A， 用于 检测二尖梅奇酵母的引物对及其应用， 20210112； CN114250317A， 一种用于检测二尖梅奇酵 母的引物组和试剂盒， 20220329)， 均具有良好的特异性和灵敏度， 为筛选不携带二尖梅奇 酵母的中华绒螯蟹提供了技术支撑。 最新调查发现， 感染二尖梅奇酵母程度较轻的中华绒 螯蟹， 仅有一部分会发病死亡， 而另一部分中华绒螯蟹并不发病， 能够继续蜕壳生长至成 蟹， 并脱去病原感染。 这可能与中华绒螯蟹携带二尖梅奇酵母的数量以及中华绒螯蟹本身 的免疫能力相关。 因此， 仅仅通过P CR检测方法测定中华绒 螯蟹是否携带二尖梅奇酵母还不 能满足生产需求， 开展病原定量检测以及进一 步提高检测灵敏度十分有必要。 发明内容 [0004]本发明的目的在于用于检测二尖梅奇酵母的基因片段及 其引物探针 组， 得到一种 灵敏度高、 特异性强、 检测准确性高的检测二尖梅奇酵母的试剂盒。 [0005]为了实现上述发明目的， 本发明提供以下技 术方案： [0006]本发明提供了一种用于检测二尖梅奇酵母的基因片段， 所述基因片段的核苷酸序 列如SEQ ID NO.1所示。 [0007]本发明还提供了一种包含所述基因片段的假想蛋白基因， 所述假想蛋白基因的核 苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示。 [0008]本发明还提供了一种用于扩增所述基 因片段的引物探针 组， 所述上游引物的核苷 酸序列如SEQ  ID NO.3所示， 下游引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.4所示， 探针的核苷酸序 列如SEQ ID NO.5所示。 [0009]优选的， 所述探针的5 ′端标记有荧 光基团FAM， 3 ′端标记有淬灭基团BHQ1。 [0010]本发明还提供了一种所述的引物探针组和所述的基因片段用于制备检测二尖梅说　明　书 1/5 页 3 CN 114807427 A 3