(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211014264.3 (22)申请日 2022.08.23 (71)申请人 承启医学 （深圳） 科技有限公司 地址 518110 广东省深圳市龙华区民治街 道樟坑社区青创城C 栋3A1 (72)发明人 张弓　金静洁　肖艳青　 (74)专利代理 机构 北京睿派知识产权代理有限 公司 11597 专利代理师 刘锋 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/113(2010.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种乳腺癌早期诊断的血浆外泌体 miRNA生 物标志物及miRNA检测试剂盒 (57)摘要 本发明公开了一种miRNA的检测方法及应 用。 所述的miRNA含量丰富且性质稳定， 拥有以蛋 白质为代表的传统生物标志物所不具备的特质， 即无需抗体制备且易于精确定量； miRNA在临床 应用中具有独特的优势， 即样本采集方便、 容易 保存、 可以反复采取进行动态监测、 微创、 并且具 有组织和疾病特异性； 本发明的所述的miRNA检 测试剂盒是一种灵活、 高效、 快速、 高灵敏度、 低 成本且简易的生物体系检测手段， 可实现miRNA 的快速检测， 可应用于生物学检测 和临床医学。 权利要求书2页 说明书8页 附图9页 CN 115433779 A 2022.12.06 CN 115433779 A 1.一种miRNA检测方法， 其特征在于， 所述的miRNA包括： has ‑miR‑132‑3p， has‑miR‑ 218‑3p， has‑miR‑924， has‑miR‑3167， has ‑miR‑3168， has ‑miR‑3181， has ‑miR‑4750‑3p和 has‑miR‑7975中的一种或两种以上的组合； 优选地， 所述的miRNA为： has ‑miR‑132‑3p， has‑miR‑218‑3p， has‑miR‑924， has‑miR‑ 3167， has ‑miR‑3168， has ‑miR‑3181， has ‑miR‑4750‑3p和has‑miR‑7975中的一种或两种以 上的组合。 2.根据权利要求1所述的检测方法， 其特 征在于， 所述的检测方法包括如下步骤： (1)提取样品中的RNA； (2)将步骤(1)所 得RNA进行miRNA特异性逆转录成cDNA； (3)将步骤(2)所 得cDNA进行荧 光实时定量PCR检测； 优选地， 所述的检测方法包括如下步骤： (1)提取血清/血浆样品中的外泌体； (2)提取步骤(1)所 得外泌体的RNA； (3)将步骤(2)所 得RNA进行miRNA特异性逆转录成cDNA； (4)将步骤(3)所 得cDNA进行荧 光实时定量PCR检测； 其中， 受试者 为哺乳动物， 特别是 人类。 3.根据权利要求2所述的检测方法， 其特征在于， 所述检测方法包括检测miRNA的表达 水平， 所述检测的样本使用自活检受试者获得的组织样品或流体； 优选地， 所述检测的样本选自： 外泌体、 血清、 血浆、 尿液、 唾液、 淋巴液、 脑脊液、 精液、 卵泡液、 胆汁、 阴道分泌液、 关节 滑液和人奶中的一种； 优选地， 所述检测的样本为外泌体； 优选地， 所述检测的样本为血 液外泌体； 优选地， 所述检测的样本为血清外泌体； 优选地， 所述检测的样本为血浆外泌体。 4.一种用于检测miRNA的产品， 其特征在于， 所述miRNA包括： has ‑miR‑132‑3p， has‑ miR‑218‑3p， has‑miR‑924， has‑miR‑3167， has ‑miR‑3168， has ‑miR‑3181， has ‑miR‑4750‑3p 和has‑miR‑7975中的一种或两种以上的组合， 优选地， 所述 miRNA为： has ‑miR‑132‑3p， has‑ miR‑218‑3p， has‑miR‑924， has‑miR‑3167， has ‑miR‑3168， has ‑miR‑3181， has ‑miR‑4750‑3p 和has‑miR‑7975中的一种或两种以上的组合。 5.根据权利要求4所述的产品， 其特征在于， 所述检测miRNA的产品包括检测miRNA的表 达水平的产品， 所述检测miRNA表达水平的产品选自： 试剂、 试剂盒、 试纸和基因芯片中的一 种， 优选为试剂盒。 6.根据权利要求4所述的产品， 其特征在于， 所述检测的样本使用自活检受试者获得的 组织样品或流体； 优选地， 所述检测的样本选自： 外泌体、 血清、 血浆、 尿液、 唾液、 淋巴液、 脑脊液、 精液、 卵泡液、 胆汁、 阴道分泌液、 关节 滑液和人奶中的一种； 优选地， 所述检测的样本为外泌体。 7.根据权利要求6所述的产品， 其特 征在于， 所述检测的样本为血 液外泌体； 优选地， 所述检测的样本为血清外泌体；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115433779 A 2优选地， 所述检测的样本为血浆外泌体。 8.一种用于乳腺癌诊断/治疗的miRNA生物标志物， 所述的miRNA生物标志物包括： has ‑ miR‑132‑3p， has‑miR‑218‑3p， has‑miR‑924， has‑miR‑3167， has ‑miR‑3168， has ‑miR‑3181， has‑miR‑4750‑3p和has‑miR‑7975中的一种或两种以上的组合， 优选地， 所述miRNA生物标 志物为： has ‑miR‑132‑3p， has‑miR‑218‑3p， has‑miR‑924， has‑miR‑3167， has ‑miR‑3168， has‑miR‑3181， has ‑miR‑4750‑3p和has‑miR‑7975中的一种或两种以上的组合。 9.一种组合基因作为标志物在制备诊断/治疗乳腺癌产品中的应用， 所述的组合基因 包括： has‑miR‑132‑3p， has‑miR‑218‑3p， has‑miR‑924， has‑miR‑3167， has ‑miR‑3168， has ‑ miR‑3181， has‑miR‑4750‑3p和has‑miR‑7975中的一种或两种以上的组合， 所述诊断/治疗 乳腺癌的产品包括检测组合基因的mi RNA表达水平的产品， 所述检测组合基因mi RNA表达水 平的产品选自： 试剂、 试剂盒、 试纸和基因芯片中的一种。 10.一种组合基因作为标志物在制备乳腺癌诊断试剂盒中的应用， 其包含以下步骤的 检测方法： (1)提取样品中的RNA； (2)将步骤(1)所 得RNA进行miRNA特异性逆转录成cDNA； (3)将步骤(2)所 得cDNA进行荧 光实时定量PCR(qRT ‑PCR)检测； 所述的组合基因包括： has ‑miR‑132‑3p， has‑miR‑218‑3p， has‑miR‑924， has ‑miR‑ 3167， has ‑miR‑3168， has ‑miR‑3181， has ‑miR‑4750‑3p和has‑miR‑7975中的一种或两种以 上的组合。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115433779 A 3