(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210748254.6 (22)申请日 2022.06.29 (66)本国优先权数据 202210165436.0 2022.02.23 CN (71)申请人 华南农业大 学 地址 510000 广东省广州市天河区五山 (72)发明人 李红梅　赵昌滨　胡博文　张细权　 罗庆斌　张德祥　聂庆华　罗文　 黎镇辉　 (74)专利代理 机构 广州世超知识产权代理事务 所(普通合伙) 44498 专利代理师 梅伟红 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01)C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种与黄羽肉鸡腿部皮肤黄度相关的分子 标记及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种与黄羽肉鸡腿部皮肤黄 度相关的分子标记及其应用。 所述分子标记的核 苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示， 所述分子标记的 突变位于其非编码序列内含子NC_006088.5: g.11346195G>A处； 本发明发现由于CD36基因内 含子区域突变影 响黄羽肉鸡的腿部皮肤黄度； 因 此， 所述分子标记可应用于选育腿部皮肤黄度较 高的个体， 包括如下步骤： S1.提取待检测黄羽肉 鸡的DNA； S2.目的片段的获得及测序： 利用正反 向引物对通过PCR扩增待测鸡的DNA， 将获得的产 物进行测序， 分析序列碱基； S3.根据分析结果， 育种时选 择保留判定为GG基因型的个体。 该分子 标记有利于选育优势纯合基因型黄羽肉鸡， 剔除 腿部皮肤黄度较低的个体， 提高鸡的腿部皮肤黄 度。 权利要求书1页 说明书4页 序列表1页 附图1页 CN 115181805 A 2022.10.14 CN 115181805 A 1. 一种与黄羽肉鸡腿部皮肤黄度相关的分子标记， 其特征在于， 所述分子标记的核苷 酸序列如SEQ ID NO:1所示， 所述分子标记的突变位于其启动子NC_006088.5:g. 11346195G>A处。 2.根据权利要求1所述的一种与黄羽肉鸡腿部皮肤黄度相关的分子标记， 其特征在于， 所述分子标记在剔除鸡腿部皮肤黄度较低个 体中的应用。 3.根据权利要求2所述的剔除鸡腿部皮肤黄度较低个体的分子标记方法， 其特征在于， 所述分子标记方法的具体步骤如下： S1.根据鸡CD36基因序列， 设计正反向引物对， 获得扩增引物： 正向引物F （SEQ ID NO:2） ： 5 ’ ‑ CATTCCCTTCTGGTAGCCTG ‑3’ 反向引物R （SEQ ID NO:3） ： 5 ’ ‑ TGCATTCTGTCTA AGCTGGTG ‑3’ S2.利用步骤S1所得的扩增引物进行鸡基因组DNA的PCR扩增， 获得扩增产物作为分子 标记的核苷酸序如SEQ ID NO:1所示， 对获得的产物进行测序， 分析序列碱基； S3.对步骤S2所 得的扩增产物进行电泳分离， 获得分离产物； S4.对步骤S3获得的分离产物进行基因型分析， 获得鸡腿部皮肤黄度的有利基因型， 得 到分子标记的突变位于其启动子NC_006088.5:g. 11346195G>A处， 所述有利基因型为 GG基 因型的鸡性状 个体， 所述鸡的性状包括鸡的腿部 黄度值。 4.根据权利要求3所述分子标记方法， 其特征在于， 步骤S2中所述PCR扩增的反应条件 为： 94℃预变性2mi n； 94℃变性3 0s， 60℃退火3 0s， 72℃延伸25s， 34个 循环； 72℃延伸5mi n。 5. 根据权利 要求3所述的分子标记方法， 其特征在于， 步骤S2中所述PCR扩增的反应体 系如下： DNA模板 2 μL F‑CD36 0.6 μL R‑CD36 0.6 μL 2xTaq Master Mix 15 μL ddH2O 11.8 μL。 6.根据权利要求3所述的分子标记方法， 其特征在于， 步骤S3 中所述的电泳分离采用琼 脂糖凝胶分离， 所述 琼脂糖凝胶的浓度为1.5%。 7.根据权利 要求3所述的分子标记方法， 其特征在于， 步骤S1所述的CD36基因序列 位于 鸡1号染色体结构上存在的脂肪酸结合区域。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115181805 A 2一种与黄羽肉鸡 腿部皮肤黄度相关的分子标记及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及家禽遗传育种技术领域， 具体地， 涉及一种与黄羽肉鸡腿部皮肤黄度 相关的分子标记及其应用。 背景技术 [0002]近年来， 随着我国经济 的快速发展、 城镇化进程地加快， 家庭养殖生鸡逐渐减少， 同时， 伴随着生活节奏的加快， 新一代消费观念发生转变， 相比于活鸡， 他们更愿意去超市 购买冰鲜黄鸡。 我国更进一步推动黄羽肉鸡以冰鲜鸡的流通方式发展， 国家发布政策强调 加强活禽交易市场分类管理， 推动冰鲜和冰冻肉类上市， 我国更进一步推动黄羽肉鸡以冰 鲜鸡的流通方式发展， 而冰鲜肉鸡呈现给消费者的第一直观 印象就是肤色， 由于受到的文 化观念和消费习惯影响， 消费者更倾向于购买皮肤黄度更高的冰鲜鸡， 这也要求养殖企业 培育皮肤黄度更高的个体。 有研究发现， 在日粮中添加叶黄素能够使鸡的皮肤黄度显著增 加， 但这意味着势必要增加养殖成本， 因此从遗传水平上选育皮肤黄度更高的黄羽肉鸡个 体显得尤为重要。 [0003]在家禽中， 肤色主要受到类胡萝卜素和黑色素沉积程度的影响。 CD36 (CD36  molecule)  基因位于鸡的1号染色体 （参考基因组GRCg6a， chrome  1） ， 编码具有转导信号和 转运功能的跨膜糖蛋白， 在肠粘膜细胞中显著 富集， 具有摄取叶黄素的功能。 同时有研究发 现CD36能够参与脂肪细胞和脂肪组织对类胡 萝卜素的吸收， 并且在脊椎动物体内的类胡 萝 卜素运输过程中起重要作用。 单核苷酸多态性  (Single nucleotide  polymorphism， SNP)   分子标记具有 可遗传特性， 会对基因的表达水平产生直接影响。 因此， CD36的基因多态 性研 究为揭示家禽类胡萝卜素沉积和皮肤 肤色形成的机制打下了基础。 发明内容 [0004]本发明的目的是为了克服现有技术的上述不足， 提供一种与黄羽肉鸡腿部皮肤黄 度相关的分子标记及其应用， 本发明发现CD36基因突变影响黄羽肉鸡的腿部皮肤黄度。 因 此， 该分子标记有利于选育优势纯合基因型黄羽肉鸡， 剔除腿部 皮肤黄度较低的个体， 选育 鸡的腿部皮肤黄度高的优势基因个 体。 [0005]本发明的另一目的在于提供上述分子标记在剔除鸡腿部皮肤黄度较低个体中的 应用。 [0006]本发明的另一目的在于提供一种利用上述分子标记剔除腿部皮肤黄度较低个体 的方法。 [0007]为了实现上述目的， 本发明是通过以下 方案予以实现的： 一种与黄羽肉鸡腿部皮肤黄度相关的分子标记， 所述分子标记的核苷酸序列如 SEQ ID NO:1所示， 所述 分子标记的突变位于其内含子NC_006088.5:g.  11346195G>A处。 本 发明发现， 在所检测黄羽肉鸡群体中， 基因突变型AA型腿部 皮肤黄度值更低， 因此通过筛选 AA型可以剔除腿部皮肤黄度较低的个体， 而GG型腿部皮肤黄度值高于AA型腿部皮肤黄度说　明　书 1/4 页 3 CN 115181805 A 3