(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210743613.9 (22)申请日 2022.06.27 (71)申请人 甘肃农业大 学 地址 730070 甘肃省兰州市安宁区营门村1 号 (72)发明人 张小雪　马宗武　李发弟　王维民　 张德印　李晓龙　赵源　张煜坤　 林长春　王江荟　程江博　杨晓斌　 黄永亮　崔盼盼　 (74)专利代理 机构 北京智为时代知识产权代理 事务所(普通 合伙) 11498 专利代理师 王加岭　杨静 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01)C12Q 1/6869(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种与绵羊尾脂沉积相关的分子标记及其 应用 (57)摘要 本发明提供了一种与绵羊尾脂沉积相关的 分子标记及其应用。 本发明通过对绵羊RAP1GAP 基因进行PCR扩增和序列分析， 发现在扩增片段 的第123位存在一个A /G多态性位点， 进 一步使用 KASPar引物对1029只湖羊的多态性位点进行检 测和建立最小二乘模型， 对基因型与尾脂性沉积 状进行关联分析， 最终确定了本发明扩增的 RAP1GAP基因片段可以作为与绵羊尾脂沉积相关 的分子标记。 本发明通过检测分子标记， 可选留 AA纯合的绵羊进入核心 群用于育种， 可用于降低 绵羊的尾 部脂肪沉积， 有助于增 加经济效益。 权利要求书1页 说明书6页 序列表2页 附图2页 CN 115074449 A 2022.09.20 CN 115074449 A 1.一种与绵羊尾脂沉积相关的分子标记， 其特征在于， 其核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所 示， 其中第123bp处的R表示A或G， 该突变导 致分子标记的A/G多态性。 2.用于检测权利要求1所述分子标记 的引物对， 其特征在于， 所述引物对包括引物R ‑F 和引物R‑R， 其中所述引物R ‑F的序列如SEQ  ID NO.2所示， 所述引物R ‑R的序列如SEQ  ID  NO.3所示。 3.用于检测权利 要求1所述分子标记的KASPar引物对， 其特征在于， 所述KASPar引物对 包括检测AlleleG的正向引物、 检测用于检测AlleleA的正向引物和通用反向引物， 其中， 所 述检测AlleleG的正向引物的序列如SEQ  ID NO.4所示， 所述检测AlleleA的正向引物的序 列如SEQ ID NO.5所示， 所述 通用反向引物的序列如SEQ  ID NO.6所示。 4.检测权利要求1所述分子标记的检测试剂盒， 其特征在于， 其包含权利要求2 的引物 对或/和权利要求3所述的KAS Par引物对。 5.检测权利要求1所述与绵羊尾脂沉积相关的分子标记的方法， 其包括如下步骤： 1)使用权利要求2的引物对或权利要求3所述的KASPar引物对， 或者使用权利要求4所 述的试剂盒， 对绵羊基因 组DNA进行扩增； 2)对步骤1)获得扩增产物的多态性 位点进行分型鉴定 。 6.根据权利要求5所述的方法， 其特征在于， 步骤2)中的分型鉴定方法为测序法、 基因 芯片法、 荧 光探针法或高分辨 率溶解曲线法。 7.根据权利要求5所述的方法， 其特征在于， 利用权利要求3所述的KASPar引物对进行 PCR扩增， 扩增结束后， 再通过检测荧 光信号确定分型 结果。 8.权利要求1所述的分子标记或权利 要求2所述的引物对或权利 要求3所述的KASPar引 物对， 或权利要求4所述的试剂盒， 或权利要求5 ‑7中任一项所述的方法在绵羊尾脂沉积性 状检测中的应用。 9.权利要求1所述的分子标记或权利 要求2所述的引物对或权利 要求3所述的KASPar引 物对或权利要求4所述的试剂盒， 或权利要求5 ‑7中任一项所述的方法在绵羊育种中的应 用。 10.根据权利要求9所述的应用， 其特 征在于， 其育种目的是为挑选出小尾型绵羊。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115074449 A 2一种与绵羊尾脂沉积相关的分子标记及其应用 技术领域 [0001]本发明属于分子标记的技术领域， 具体涉及RAP1GAP基因片段作为影响绵羊尾脂 沉积相关的分子标记及其应用。 背景技术 [0002]绵羊作为一种常见的家畜， 是农 区重要的生产和生活资料， 其肉和毛产品在改善 和提高当地的生产和生活中起着 举足轻重的作用。 根据历史记载， 羊的野生祖先是细尾羊。 后来， 通过人工选择培育出了肥尾羊或肥臀羊(Moradi,Nejati ‑Javaremi,Moradi ‑ Shahrbabak,Dodds,&Mcewan,2012)。 绵羊根据其尾巴大小可分为五种类型： 短尾羊、 长尾 羊、 短脂肪尾羊、 长脂肪尾羊和肥臀羊。 羊的尾部脂肪能提供足够的能量， 以维持冬季饲草 短缺时的正 常需要(Ermias， Yami， &Rege， 2002； Kashan， Azar， Afzalza deh， &Salehi， 2 005)。 然而， 人们愿意选择购买低脂肪的羊肉产品以获得更健康的饮食。 因为高脂肪饮食会导致 心血管疾病、 糖尿病和肠癌的发病率增加。 随着绵羊的商业化养殖， 尾部脂肪的过度沉积限 制了羊肉的商业价值。 它还会降低饲料转化率， 增加饲养成本。 在实际生产中， 人们发现大 尾羊的交配受孕率低于小尾羊， 因为肥 大的尾巴阻碍 了自然交配。 [0003]RAP1GAP(RAP1  GTP酶激活蛋白)是一个蛋白质编码基因， 是GTP酶激活蛋白(GAP) 家族中第一个被确认的成员(Frisch&Zwartkruis,2010； Rubinfeld， Munemitsu， Clark， Conroy， &Polakis， 1991)， 它在人类医学上的研究相对较好。 RAP 1GAP抑制黑色素瘤细胞的 细胞外信号调节激酶活性、 细胞增殖、 生存和迁移(Zheng  et al.， 2009)。 在体外， RAP 1GAP 的过表达会损害肿瘤细胞的增殖并增强细胞凋亡(D"Silva  et al.， 2005； Mitra  et al.， 2008； Tsygankova  et al.， 2007； Zhang&L.， 2006； Zheng  et al.， 2009)。 以前的研究发现， RAP1GAP的过度表达降低了大鼠甲状腺细胞的增殖(Tsygankova,Feshchenko， Klein， & Meinkoth， 2004)。 RAP1GAP基因与绵羊的尾脂是否有关系， 有和关系并不清楚。 [0004]本发明通过对RAP1GAP基因进行测序和分析， 探讨其不同基因型与绵羊尾脂沉积 性状之间的关联， 旨在为降低绵羊尾脂沉积的遗传改良方面提供基因素材， 加速 自主知识 产权的快速生长小尾型优质肉羊新品种的培 育进程。 发明内容 [0005]为了解决上述技术问题， 本发明提供一种作为与绵羊尾脂沉积相关的分子标记及 其应用。 [0006]本发明的分子标记是从绵羊RAP1GAP基因中扩增得到， 其具体核苷酸序列如SEQ   ID NO.1所示。 通过扩增绵羊RAP1GAP基因的DNA序列并测序， 寻找RAP1GAP基因的多态性位 点， 分析不同的基因型与绵羊尾脂沉积相关性， 从而建立含多态性位点的分子标记的检测 方法， 并可将该分子标记应用于降低绵羊的尾巴脂肪沉积新品种的培 育中。 [0007]为实现上述目的， 本发明采用以下的技 术方案为： [0008]一方面， 本 发明提供了一种与绵羊尾脂沉积相关的分子标记， 其核苷酸序列如SEQ  说　明　书 1/6 页 3 CN 115074449 A 3