(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210616241.3 (22)申请日 2022.06.01 (71)申请人 华中农业大 学 地址 430070 湖北省武汉市洪山区狮子山 街1号 申请人 新疆农业科 学院哈密瓜研究中心 (72)发明人 孔秋生　张永兵　魏小英　范蓉　 杨永　魏明华　李寐华　王珍珠　 凌悦铭　黄颖　 (74)专利代理 机构 武汉智嘉联合知识产权代理 事务所(普通 合伙) 42231 专利代理师 徐绍新 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01)C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种与甜瓜蔓枯病抗性基因Gsb-3共分离的 InDel标记及其应用 (57)摘要 本发明公开了与甜瓜蔓枯病抗性基因Gsb ‑3 共分离的InDel分子标记及其应用。 通过构建重 组自交系分离群体， 利用BSA方法结合全基因组 重测序对甜瓜 蔓枯病抗性进行基因定位， 在两亲 本之间具有多态性的位点 设计开发InDel分子标 记， 并在分离群体各株系中对分子标记进行筛选 验证， 最终挖掘到了一个与甜瓜蔓枯病抗性基因 Gsb‑3共分离的分子标记。 该分子标记所包含的 核苷酸序列分别由SEQ  ID NO.1和SEQ  ID NO.2 所示的引物经PCR扩增得到， 扩增得到的片段分 别与抗病和感病基因共分离。 本发 明提供的分子 标记可以有效、 快速的区分甜瓜蔓枯病抗、 感单 株， 提高了甜瓜蔓枯病表型鉴定的准确性， 可作 为一种有效的手段应用于甜瓜蔓枯病抗病育种 实践中。 权利要求书1页 说明书4页 序列表1页 附图1页 CN 115125320 A 2022.09.30 CN 115125320 A 1.一种用于甜瓜蔓枯病抗性表型鉴定的InDel分子标记引物， 其特征在： 所述InDel分 子标记引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1和SEQ  ID NO.2所示。 2.权利要求1所述的I nDel分子标记引物在甜瓜蔓枯病抗 性表型鉴定中的应用。 3.一种甜瓜蔓枯病抗 性表型鉴定方法， 其特 征在于包括以下步骤： (1)提取待测样品的基因 组DNA； (2)以步骤(1)得到的基因组DNA为模板， 用权利要求1所述的InDel分子标记引 物进行 PCR扩增； (3)对步骤(2)得到的扩增产物进行电泳检测， 根据条 带大小鉴定甜瓜蔓枯病抗 性。 4.如权利要求3所述的甜瓜蔓枯病抗性表型鉴定方法， 其特征在于， 所述PCR扩增体系 为： 反应体系为10 μL， 包括模板DNA  20ng， 浓度为10 μM的前引物和后引物各0.5 μL， Mix  4 μL， ddH2O补足。 5.如权利要求3所述的甜瓜蔓枯病抗性表型鉴定方法， 其特征在于， 所述PCR反应程序 为： 94℃预变性3min； 然后94℃变性30s， 55℃退火30s， 72℃延伸30s， 共34个循环， 最后72℃ 延伸10mi n， 放入4℃保存。 6.如权利要求3所述的甜瓜蔓枯病抗性表型鉴定方法， 其特征在于： 步骤(3)中， 若只出 现与抗病亲本大小相同的特异 性条带， 即只扩增出大小为2 48bp的片段， 则该甜瓜单株表型 为抗病； 若只出现与感病亲本大小相同的特异性条带， 即只扩增出大小为237bp的片段， 则 该甜瓜单株表型为感病。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115125320 A 2一种与甜瓜蔓枯病抗性基因Gsb ‑3共分离的InDel标记及其 应用 技术领域 [0001]本发明涉及分子标记辅助育种技术领域， 具体涉及一种与甜瓜蔓枯病抗性基因 Gsb‑3共分离的I nDel分子标记及其应用。 背景技术 [0002]甜瓜(Cucumis  melo L.)是主要的园艺作 物之一， 果肉香甜多汁， 受到各国消费者 的喜爱， 被广泛种植， 具有十分重要的经济价值。 随着农业现代化的发展， 农产品种植的商 品化、 规模化、 集约化将成为未来农业的主要发展趋势， 随之而来的是扩散速度快且大规模 爆发的病虫害， 一旦发病严重且防治不及时， 往往会造成农产品大幅减产， 经济损失严重。 目前甜瓜生产上常见的病害有40多种， 其中甜瓜蔓枯病(Gummy  stem blight， GSB)是常见 的真菌病害之一， 它由亚隔孢壳属的瓜类黑腐小球壳菌(Di dymella bryoniae)引起， 主要 危害叶片和茎部 皮层组织， 叶片发病一般在叶脉之 间发生褐变， 或者形成圆形棕褐色斑点； 茎部发病初期在近节部产生油浸状病斑， 随着时间的推移茎部发生 纵裂并产生琥珀色胶状 物， 后期茎部干枯、 表面呈灰白色， 当湿度过高时病变的茎部极易发生腐烂导致茎部缢缩， 最终植株因失水整株死亡。 蔓枯病病原菌产生的子囊孢子和分生孢子等子实体可以通过 空 气传播到其他宿主植物表面， 温暖潮湿的温室环境为该病害的传播提供了有利的条件， 在 温室中该病害发病严重时可导致甜瓜减产高达50％。 在过去的几年里， 我国在温室和塑料 大棚中种植甜瓜的规模大幅增加， 这导致蔓枯病已经成为一种与甜瓜经济效益息息相关的 真菌病害。 目前生产上甜瓜蔓枯病的主要防治方法是化学防治， 但从长期来看， 化学防治不 仅成本高， 污染环境， 还会加快菌种进化， 综合来看， 培育具有蔓枯病抗性的甜瓜品种是防 治该病害最经济有效的措施。 [0003]采用常规的育种方法来培育抗蔓枯病的甜瓜品种， 需要在生长期间根据植株的表 型对基因型进 行筛选， 抗病表型的鉴定与病原菌致病力强弱以及发病环境是否适宜等因素 密切相关， 该育种 方法具有周期长、 速度慢、 表性鉴定不稳定等缺陷。 分子标记辅助选择育 种通过开 发与目的基因连锁或共分离的分子标记， 分析该标记的基因型从而对表型进 行鉴 定， 排除了人为主观因素及环境变化的影响， 同时在苗期就可以进 行抗病单株的筛选， 可以 提高表型鉴定的准确性和筛 选效率， 缩短育种年限。 发明内容 [0004]针对甜瓜蔓枯病抗性育种中表型鉴定不稳定， 抗病材料选育耗时费力等问题。 在 现有研究中， 野生资源 ‘PI511890 ’携带抗蔓枯病基因Gsb ‑3， 但该基因尚未被定位且暂未开 发出与其共分离的分子标记。 为克服以上问题本发明旨在提供一个与甜瓜蔓枯病抗病基因 共分离的InDel分子标记及其应用， 利用该标记可以在分离群体中有效的区分株系的蔓枯 病抗性， 显著提高育种效率和准确性， 加快抗蔓枯病新品种的选 育。 [0005]本发明的目的之一在于提供一个与甜瓜蔓枯病抗病基因共分离的InDel分子标说　明　书 1/4 页 3 CN 115125320 A 3