(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210580582.X (22)申请日 2022.05.25 (71)申请人 中国农业科 学院油料作物研究所 地址 430000 湖北省武汉市武昌区徐 东二 路2号 (72)发明人 王汉中　顿小玲　王新发　任丽军　 刘贵华　田泽　 (74)专利代理 机构 武汉宇晨专利事务所(普通 合伙) 42001 专利代理师 龚莹莹 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01) A01H 1/04(2006.01) (54)发明名称 一种与油菜钙含量性状QTL紧密连锁的分子 标记BnCa-2C2及其应用 (57)摘要 本发明属于分子生物学及遗传育种技术领 域， 公开了一种与油菜钙含量性状QTL紧密连锁 的分子标记BnCa ‑2C2及其应用。 本发明获得了一 个与油菜钙含量显著关联的SNP(单核苷酸多态 性)标记， 位于Darmor ‑bzh v10基因组C02染色体 上第56463993位碱基位置， 可解释20.7%的表型 变异。 根据该分子标记设计的KASP检测引物进行 辅助选择， 可以提高 高钙油菜单株的筛 选效率。 权利要求书1页 说明书5页 序列表2页 CN 114752702 A 2022.07.15 CN 114752702 A 1.检测甘蓝型油菜Darmor ‑bzh v10基因组C02染色体上第56463993位碱基的试剂在甘 蓝型油菜钙含量筛 选育种中的应用。 2.根据权利要求1所述的应用， 所述的试剂为引物。 3.根 据 权 利 要 求 2 所 述 的 应 用 ，所 述 的 引 物 为 B n C a ‑2 C 2‑F 1 ： GAGTAAACCATTGCTCTTATGTTCAG， BnCa ‑2C2‑F2： GAGTAAACCATTGCTCTTATGTTCAT， 和BnCa ‑2C2‑ R： CGTTTATTTGACGAATAAAATAAAGG。 4.检测包含有甘蓝型油菜Darmor ‑bzh v10基因组C02染色体上第56463993位碱基的油 菜序列的试剂在油菜钙元素富集能力筛选育种中的应用， 所述的油菜序列为SEQ  ID NO.1 所示。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114752702 A 2一种与油菜钙含量性状Q TL紧密连锁的分子标记BnCa ‑2C2及 其应用 技术领域 [0001]本发明属于分子生物学及遗传育种技术领域， 具体涉及一种与油菜钙含量性状 QTL紧密连锁的分子标记BnCa ‑2C2及其应用。 背景技术 [0002]甘蓝型油菜是由甘蓝和白菜经自然种间杂交和加倍进化而来， 其菜用属性在 起源 和进化上具备科学基础。 随着双低油菜品种的广泛推广， 油菜的菜苗及菜薹作为可 口蔬菜 正逐渐被广大消费者认可。 研究表明， 油菜是钙元素的良好植物转化载体， 培育钙元素高效 利用的油菜新品种是改善人体矿质营养素缺乏和推动油菜全价值链开发利用的一种重要 技术手段。 [0003]应用传统育种技术进行钙等矿质营养素的作物育种改良难度较大， 存在选择效率 低、 育种周期 长等缺陷。 随着分子生物学和测序技术的快速发展， 通过基因型选择辅助的育 种手段经实践证明是解决传统育种困境的有效途径， 而性状紧密连锁的分子标记开 发是该 技术应用的重要 前提。 利用分子标记辅助选择检测油菜中与钙含量积累紧密关联的分子标 记， 可降低繁琐的表型鉴定 工作规模， 指导 性状的精准 导入或聚合， 将极大提高育种效率。 [0004]本发明以油菜核心种质资源群体为材料， 利用全基 因组关联分析鉴定油菜中具有 育种应用潜力的钙含量相关QTL位点， 并基于QTL位点信息开发分子标记， 对加速富钙油菜 新品种选 育和提升油菜生产效益有积极作用。 发明内容 [0005]本发明的目的是在 于提供了检测甘蓝型油菜Darmor ‑bzh v10基因组C02染色体上 第56463993位碱基的试剂在甘蓝型油菜钙含量筛选育种中的应用。 通过对甘蓝型油菜 Darmor‑bzh v10基因组第C02染色体上第56463993位碱基进行基因型的检测， 即可实现对 高钙油菜的筛 选育种。 [0006]为了达到上述目的， 本发明采取以下技 术措施： [0007]与甘蓝型油菜钙含量 性状QTL位点qBnCa‑2C2的获得： [0008](1)收集327份来自世界各个国家的甘蓝型油菜自交系作为油菜关联群体， 采集关 联群体各株系的单株叶片， 用CTAB法提取总DNA， 利用武汉双绿源创芯科技研究院有限公司 开发的油菜5 0K Illumina SNP芯片对每 个样本进行基因型分析。 [0009](2)利用Illumina  BeadStudio基因分型软件(http://www.illumina.com/)计算 群体材料在每个位点的标记杂合率(heterozygous  rate)、 缺失率(mi ssing rate)、 最小 等 位基因频率(minor  allele frequency)。 以缺失率≤0.2、 杂合率≤0.2、 最小等位基因频率 >0.05以及SNP标记在甘蓝型油菜Darmor基因组(Ch alhoub et al.,2014)中唯一匹配为筛 选标准进行SNP标记的过 滤， 最终获得21,243个高质量SNP标记用于全基因 组关联分析。 [0010](3)将获得的关联分析群体的基因型数据导入STRUCTURE  v.2.3.4进行群体结构说　明　书 1/5 页 3 CN 114752702 A 3