(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210640901.1 (22)申请日 2022.06.08 (71)申请人 华兰基因工程有限公司 地址 453000 河南省新乡市平 原示范区黄 河路甲1-1号 (72)发明人 张静静　安文琪　王斌　邢体坤　 宋路萍　 (74)专利代理 机构 北京纪凯知识产权代理有限 公司 11245 专利代理师 张立娜 (51)Int.Cl. C07K 7/08(2006.01) C07K 14/165(2006.01) C07K 19/00(2006.01) C07K 1/36(2006.01)C07K 1/34(2006.01) C07K 1/22(2006.01) C12N 15/11(2006.01) C12N 15/50(2006.01) C12N 15/85(2006.01) C12N 5/10(2006.01) C12N 15/62(2006.01) C12N 15/66(2006.01) (54)发明名称 一种α株2 019-nCoV的表面蛋白受体结合区 制备方法 (57)摘要 本发明公开了一种α株2 019‑nCoV的表面蛋 白受体结合区制备方法。 本发明提供了SEQ  ID  No.1所示多肽或其相关生物材料在如下任一中 的应用： P1、 提高α株2019 ‑nCoV的S蛋白RBD在宿 主细胞中的分泌表达产量； P2、 提高α株2019 ‑ nCoV的S蛋白RBD在宿主细胞中的分泌表达效率； P3、 制备α株2019 ‑nCoV的S蛋白RBD分泌蛋白制 品； 所述相关生物材料为SEQ  ID No.1所示多肽 的编码基因或含有所述编码基因的表达盒或重 组载体或重组菌或转基因细胞系。 本发明采用 2019‑nCoV的S蛋白的天然信号肽和SEQ  ID No.1 所示人工信号肽， 用于引导2019 ‑nCoV的RBD真核 细胞分泌表达， 结果显示人工信号肽H分泌表达 水平显著优于天然信号肽S， 更适用于大规模工 业化生产， 降低生产成本 。 权利要求书2页 说明书8页 序列表3页 附图3页 CN 114957398 A 2022.08.30 CN 114957398 A 1.SEQ ID No.1所示多肽或其相关生物材 料在如下任一中的应用： P1、 提高α 株2019 ‑nCoV的S蛋白RBD在 宿主细胞中的分泌表达产量； P2、 提高α 株2019 ‑nCoV的S蛋白RBD在 宿主细胞中的分泌表达效率； P3、 制备α 株2019 ‑nCoV的S蛋白RBD分泌蛋白制品； 所述相关生物材料为SEQ  ID No.1所示多肽的编码基因或含有所述编码基因的表达盒 或重组载体或重组菌或转基因细胞系。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特 征在于： 所述宿主细胞为真核宿主细胞。 3.根据权利要求1或2所述的应用， 其特 征在于： 所述编码基因为如下任一： (a1)SEQ ID No.2所示的DNA分子； (a2)在严格条件下与(a1)限定的DNA分子杂交且编码SEQ  ID No.1所示多肽 的DNA分 子； (a3)与(a1)或(a2)限定的DNA序列具有99％以上、 95％以上、 90％以上、 85％以上或者 80％以上同源性且编码SEQ  ID No.1所示多肽的DNA分子 。 4.融合蛋白， 为将SEQ  ID No.1所示多肽融合于α株2019 ‑nCoV的S蛋白RBD的N端后所 得。 5.根据权利 要求4所述的融合蛋白， 其特征在于： 所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ  ID  No.4的第1 ‑242位或第1 ‑247位所示或如SEQ  ID No.4所示。 6.编码权利要求 4或5所述融合蛋白的核酸分子 。 7.根据权利要求6所述的核酸分子， 其特征在于： 所述核酸分子自5 ’端到3’端依次由 SEQ ID No.1所示多肽的编码基因和 α 株2019 ‑nCoV的S蛋白RBD的编码基因 组成； 进一步地， 所述SEQ  ID No.1所示多肽的编码基因为如下任一： (a1)SEQ ID No.2所示的DNA分子； (a2)在严格条件下与(a1)限定的DNA分子杂交且编码SEQ  ID No.1所示多肽 的DNA分 子； (a3)与(a1)或(a2)限定的DNA序列具有99％以上、 95％以上、 90％以上、 85％以上或者 80％以上同源性且编码SEQ  ID No.1所示多肽的DNA分子； 和/或 进一步地， 所述α 株2019 ‑nCoV的S蛋白RBD的编码基因为如下任一： (b1)SEQ ID No.3所示的DNA分子； (b2)在严格条件下与(b1)限定的DNA分子杂交且相同蛋白质的DNA分子； (b3)与(b1)或(b2)限定的DNA序列具有99％以上、 95％以上、 90％以上、 85％以上或者 80％以上同源性且编码相同蛋白质的DNA分子； 和/或 更进一步地， 所述核酸分子为SEQ  ID No.5的第1 ‑726位或第1 ‑741位所示DNA分子或 SEQ ID No.5所示DNA分子 。 8.含有权利要求7 所述核酸分子的表达盒、 重组载体、 重组菌或转基因细胞系。 9.权利要求4或5所述融合蛋白或权利要求6或7所述的核酸分子或权利要求8所述的表 达盒、 重组载体、 重组菌或转基因细胞系在 如下任一中的应用： P1、 提高α 株2019 ‑nCoV的S蛋白RBD在 宿主细胞中的分泌表达产量；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114957398 A 2P2、 提高α 株2019 ‑nCoV的S蛋白RBD在 宿主细胞中的分泌表达效率； P3、 制备α 株2019 ‑nCoV的S蛋白RBD分泌蛋白制品。 10.一种制备α 株2019 ‑nCoV的S蛋白RBD分泌蛋白的方法， 包括如下步骤： (A1)将权利要求6或7 所述的核酸分子导入宿主细胞， 得到 重组细胞； (A2)培养所述重组细胞， 从培 养上清中获得α 株2019 ‑nCoV的S蛋白RBD分泌蛋白。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114957398 A 3